加減補(bǔ)肺湯對COPD“肺氣虛證”大鼠免疫功能、血液流變學(xué)的影響

李 遜

(遵義醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院中醫(yī)科，貴州 遵義 563003)

中醫(yī)認(rèn)為，慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease，COPD)的發(fā)生由慢性咳嗽、喘發(fā)展而來，COPD患者多體弱年邁、肺脾腎虛、痰瘀阻肺、氣道壅塞[1～3]。加減補(bǔ)肺湯是在補(bǔ)肺湯基礎(chǔ)上進(jìn)行增減，針對肺脾腎三臟，通過補(bǔ)益肺脾腎、祛瘀滌痰治療COPD，具有安全性高和療效可靠的優(yōu)點(diǎn)。為進(jìn)一步探討加減補(bǔ)肺湯對COPD的作用機(jī)制，我們觀察其對COPD肺氣虛證大鼠的免疫功能和血流變的影響，現(xiàn)將結(jié)果匯報(bào)如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康清潔級(jí)Wistar大鼠100只，體質(zhì)量(250±20) g，雌雄各半，由貴陽中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物所提供(合格證號(hào)524426，飼養(yǎng)室溫20～25℃)。

1.2 藥物

加減補(bǔ)肺湯：黃芪20 g，黨參10 g，補(bǔ)骨脂15 g，百部10 g，桑白皮10 g，丹參15 g。制法：所有藥物加水浸泡2 h，首煎煮沸30 min，次煎20 min，兩煎合一紗布過濾，裝入燒杯置40℃的恒溫水浴箱，濃縮至含生藥2 g/mL，4℃冰箱保存。加減補(bǔ)肺湯由貴陽中醫(yī)學(xué)院一附院藥劑科提供，使用前加熱至常溫。桂龍咳喘寧膠囊(0.3 g/粒，批號(hào)20030221，山西桂龍藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字Z20053135)用蒸餾水制成0.09 g/mL混懸液灌胃給藥。

1.3 主要儀器和試劑

超聲霧化器，德國白瑞公司生產(chǎn)，自制1 m3煙室，自制透明霧化箱40 cm×40 cm×40 cm；木瓜蛋白醇(使用時(shí)采用0.9%NaCl注射液稀釋為3 g/L)，Sigma公司提供，恒溫水浴箱，低速冷凍離心機(jī)。

2 實(shí)驗(yàn)步驟

2.1 模型的制備

采用《實(shí)用中醫(yī)證候動(dòng)物模型學(xué)》“煙熏法肺氣虛證動(dòng)物模型”方法[1]聯(lián)合木瓜蛋白酶霧化吸入法[2]制備Wistar大鼠COPD“肺氣虛證”模型：將大鼠置于特制的1 m3煙室中，用刨花、鋸末、煙葉各30～50 g點(diǎn)燃煙熏30 min/次，每日2次，適當(dāng)通風(fēng)以防大鼠窒息。造模期60 d，于造模開始后30、32、34、36 d再給大鼠木瓜蛋白酶霧化吸入，每次將5只大鼠放入與超聲波霧化器相連的透明霧化箱中，通過霧化管向箱中噴入3 g/L的木瓜蛋白酶，每次霧化量2 mL。

2.2 分組和給藥

將Wistar大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為5組，每組20只，雌雄各半。①正常對照組0.9%氯化鈉注射液1 mL/100 g；②模型組給藥同①組；③加減補(bǔ)肺湯高劑量組1 mL/100 g；④加減補(bǔ)肺湯組低劑量組0.5 mL/100 g；⑤桂龍咳喘寧組1.25 mL/100 g。上述5組均于停止煙熏當(dāng)天開始灌胃給藥，每日1次，連續(xù)15 d。

2.3 指標(biāo)檢測

灌藥結(jié)束后2 d斷頭取血取臟器，并計(jì)算臟器指數(shù)。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 11.5 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，各組組間比較采用單因素方差分析及SNK檢驗(yàn)，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 加減補(bǔ)肺湯對COPD“肺氣虛證”大鼠臟器系數(shù)的影響

與正常對照組比較，模型組胸腺、脾臟和肝臟系數(shù)顯著降低(P<0.05)，提示模型制作成功；與模型組比較，加減補(bǔ)肺湯和桂龍咳喘寧可顯著增加脾臟和肝臟系數(shù)(P<0.05)，加減補(bǔ)肺湯高劑量組可增加胸腺系數(shù)(P<0.05)。

表1 加減補(bǔ)肺湯對COPD“肺氣虛證”大鼠臟器系數(shù)影響

注：組間方差分析，模型組與正常對照組比較：*P<0.05，與模型組比較：#P<0.05

3.2 加減補(bǔ)肺湯對COPD“肺氣虛證”大鼠T淋巴細(xì)胞亞群的影響

與正常對照組比較，模型組CD4+、CD8+和D4+/CD8+顯著降低(P<0.05)；與模型組比較，加減補(bǔ)肺湯均可增加CD4+、CD8+和D4+/CD8+(P<0.05)，桂龍咳喘寧可以增加CD4+和CD8+(P<0.05)。

3.3 加減補(bǔ)肺湯對COPD“肺氣虛證”大鼠血液流變學(xué)的影響

表3顯示，與正常對照組比較，模型組的全血黏度、血漿黏度和紅細(xì)胞壓積顯著降低；與模型組比較，加減補(bǔ)肺湯和桂龍咳喘寧可顯著降低COPD“肺氣虛證”大鼠紅細(xì)胞壓積，加減補(bǔ)肺湯可顯著降低COPD“肺氣虛證”大鼠全血黏度，加減補(bǔ)肺湯高劑量可降低COPD“肺氣虛證”大鼠血漿黏度。

表2 加減補(bǔ)肺湯對COPD“肺氣虛證”大鼠T淋巴細(xì)胞亞群的影響

注：組間方差分析，模型組與正常對照組比較：*P<0.05，與模型組比較：#P<0.05

表3 加減補(bǔ)肺湯對COPD“肺氣虛證”大鼠血液流變學(xué)影響

注：組間方差分析，模型組與正常對照組比較：*P<0.05，與模型組比較：#P<0.05

4 討論

補(bǔ)肺湯來源于《云岐子保命集》，是補(bǔ)益肺氣的經(jīng)典方，原方由人參、黃芪、熟地黃、五味子、紫菀、桑白皮組成，具有補(bǔ)肺益腎、清火化痰功效。方中人參合用黃芪實(shí)衛(wèi)固表，甘溫益氣，補(bǔ)脾益肺；熟地質(zhì)潤，

滋補(bǔ)肝腎之陰；五味子斂肺止咳；紫菀溫化痰飲，降氣止咳；桑白皮瀉肺平喘，利水消腫。加減補(bǔ)肺湯是在原方基礎(chǔ)上，減去酸甘滋膩之熟地和五味子，以黨參替換溫燥的人參，以祛痰止咳的百部易紫菀，納入補(bǔ)氣生陽、益衛(wèi)固表的黃芪，補(bǔ)腎助陽的補(bǔ)骨脂和活血化瘀的丹參。諸藥同用，溫腎助陽以化痰飲，攝納腎氣以平喘咳，先后天同補(bǔ)，共奏益氣補(bǔ)虛、扶正固本之功，具有減輕臨床癥狀、延緩肺動(dòng)脈高壓的形成、阻止疾病進(jìn)一步發(fā)展的作用[2～4]。

本課題中，COPD“肺氣虛證”大鼠出現(xiàn)精神不振、體毛無光澤、生長遲緩、身體消瘦、蜷縮少動(dòng)，舌質(zhì)瘀斑紫黯或舌苔少，捕捉時(shí)抵抗力明顯減弱，造模1 d出現(xiàn)明顯咳嗽，逐漸轉(zhuǎn)為慢性咳嗽，且口鼻潮濕，呼吸道分泌物增多。給予加減補(bǔ)肺湯后，癥狀明顯改善，大鼠體質(zhì)量增加，其毛色、毛態(tài)、精神狀態(tài)、舌質(zhì)瘀斑和捕捉時(shí)抵抗力等均有改善，氣喘、咳嗽癥狀不同程度減輕，口鼻分泌物減少。

胸腺是重要的中樞免疫器官，T 細(xì)胞發(fā)育成熟的場所。COPD“肺氣虛證”大鼠胸腺系數(shù)降低，提示胸腺等免疫器官受損，T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)降低，機(jī)體的免疫功能減弱；另外血液流變是評(píng)估機(jī)體微循環(huán)的重要指標(biāo)，與正常組比較，COPD“肺氣虛證”大鼠全血黏度、血漿黏度和紅細(xì)胞壓積增高，提示COPD存在紅細(xì)胞聚集和變形異常。給予COPD“肺氣虛證”大鼠加減補(bǔ)肺湯后，大鼠的T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)增高，全血黏度、血漿黏度和紅細(xì)胞壓積降低，說明加減補(bǔ)肺湯具有增加COPD大鼠免疫功能、降低血黏度的作用，與處方中多種中藥的藥理密切相關(guān)。丹參具有擴(kuò)張小動(dòng)脈，增加毛細(xì)血管網(wǎng)開放數(shù)目和微循環(huán)張力，解除微血管痙攣，降低肺動(dòng)脈壓，改善微循環(huán)、肺順應(yīng)性及肺心病患者的肺血流圖，制約紅細(xì)胞與血小板聚集，降低血液黏稠度，改善血液流變的作用[5]；黨參具有抗氧化、抗應(yīng)激、清除自由基和調(diào)節(jié)免疫功能多種作用[6]；黃芪可以明顯調(diào)節(jié)COPD 的炎癥反應(yīng)，增強(qiáng)機(jī)體抗感染能力，促進(jìn)炎癥吸收，降低外周血象，改善血液流變學(xué)和氣道阻塞作用[7]。

大量動(dòng)物和臨床實(shí)驗(yàn)顯示，加減補(bǔ)肺湯治療COPD或肺相關(guān)疾病具有多方面機(jī)制：①抑制或降

低COPD肺氣虛證的大鼠血清IL-8、TNF-α水平，減輕和提高血漿SOD活力,降低MDA含量，清除自由基及抗脂質(zhì)過氧化作用，同時(shí)降低氣管肺泡灌洗液中 TNF-α、IL-8表達(dá)，保護(hù)氣道黏膜,緩解和控制氣道的慢性炎癥反應(yīng)，減輕肺損傷[3,4,8]；②通過降低血清中 MDA 含量，上調(diào) ECSOD mRNA 表達(dá)，提高肺纖維化大鼠生存狀態(tài)，改善纖維化指標(biāo)[9]；③ COPD 穩(wěn)定期患者服用加減補(bǔ)肺湯可有效改善臨床癥狀和肺部體征，延緩肺功能下降趨勢，緩解期預(yù)防復(fù)發(fā)。綜上所述，加減補(bǔ)肺湯治療COPD療效確切，增加機(jī)體免疫力和改善血液流變學(xué)指標(biāo)，可能是其治療COPD的機(jī)理之一。

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