大腸桿菌的分離與藥敏鑒定

王壯志　宋艷東　師曉杰

中圖分類號(hào)：S852.65 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1001-0769（2014）06-0060-02

摘 要：從20多個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)的發(fā)病雞中分離出可疑菌株，經(jīng)常規(guī)方法培養(yǎng)、純化、鏡檢及生理生化鑒定，分離鑒定出 18 株雞致病性大腸桿菌（ED1、ED2、ED3、ED4、ED5、SD1、SD2、SD3、SD4、WD1、WD2、WD3、WD4、ND1、ND2、ND3、ND4、ND5），有 12 株分離株被鑒定出血清型，血清型主要有 O78、O35、O36、O1、O2、O5、O18。其中 O78 共有 4 株，占 33.3 %，O35 共有 3 株，占 25 %，藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，分離的大腸桿菌對(duì)氟苯尼考，丁胺卡那霉素，新霉素，慶大霉素敏感，對(duì)環(huán)丙沙星，強(qiáng)力霉素，諾氟沙星中度敏感，而對(duì)紅霉素，青霉素，鏈霉素產(chǎn)生了耐藥性。

關(guān)鍵詞：雞大腸桿菌??；血清型；分離；鑒定；藥敏試驗(yàn)

1 前言

大腸桿菌病是由大腸埃希氏菌（Escherchia Coli，E. Coli）的某些血清型所引起的一類傳染病的總稱。但它也是一個(gè)非常重要的胚胎病[1]。正常的人類和動(dòng)物的腸道內(nèi)寄居絕大多數(shù)菌。然而，一些大腸桿菌在漫長(zhǎng)的進(jìn)化過(guò)程中，細(xì)菌會(huì)侵入腸外組織，器官或血液毒性，可引起人類和動(dòng)物細(xì)菌性病。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 病料來(lái)源

病料來(lái)源于山西地區(qū)各養(yǎng)殖場(chǎng)及養(yǎng)殖戶送檢的病、死雞，臨床剖檢有典型心包炎、肝周炎、氣囊炎或卵黃性腹膜炎，疑似為大腸桿菌病。

2.2 方法

2.2.1 大腸桿菌的分離與培養(yǎng)

無(wú)菌取病料接種于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h后觀察菌落的形態(tài)。取中等大小、圓形隆起、光滑濕潤(rùn)、邊緣整齊的菌落，直接劃線接種于麥康凱瓊脂平板、依紅美蘭瓊脂平板和血瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)24 h。置4 ℃冰箱環(huán)境保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2.2 生化試驗(yàn)

選取在伊紅美藍(lán)瓊脂上生長(zhǎng)出的帶金屬光澤的黑色菌落，選取在麥康凱瓊脂上長(zhǎng)出的磚紅色菌落進(jìn)行生化試驗(yàn)。作糖發(fā)酵試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、M.R試驗(yàn)、構(gòu)椽酸鹽利用試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、三糖鐵試驗(yàn)，在37 ℃培養(yǎng)24～48 h之后觀察變化。

2.2.3 藥敏試驗(yàn)

用藥敏片進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作：用酒精燈火焰把接種環(huán)滅菌，然后接種環(huán)挑取一定量的細(xì)菌培養(yǎng)物，將細(xì)菌涂布到平皿培養(yǎng)基上，涂布的時(shí)候用劃線的方式[6]。

判定標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1。

3 結(jié)果與分析

3.1大腸桿菌的分離

在無(wú)菌條件下采取病料，接種到培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng) 24 h 后，普通肉湯呈均勻混濁，試管底部有淡白色粘稠沉淀，輕輕搖晃呈云霧狀散開(kāi)，并有臭糞味。在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，為圓形微凸起，表面中等大小，光滑濕潤(rùn)，淺灰色半透明菌落，在血液瓊脂上出現(xiàn)菌落邊緣整齊，并有隆起的灰白色，菌落較大，多數(shù)不溶血。在麥康凱瓊脂平板上形成菌落中等大小表面光滑濕潤(rùn)呈現(xiàn)粉紅色。在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上形成菌落帶有金屬光澤呈現(xiàn)紫黑色。

3.2.1 染色鏡檢結(jié)果

病死雞心、肝組織及培養(yǎng)物涂片染色鏡檢可見(jiàn)大多數(shù)分散排列，偶爾有 2～3個(gè)連在一起，兩端鈍圓，兩端濃染的革蘭氏陰性短桿菌。

3.2.2 生化試驗(yàn)結(jié)果

分離到的 18 株菌，各菌均對(duì)大多數(shù)糖類產(chǎn)酸產(chǎn)氣，如葡萄糖、甘露糖、緩慢發(fā)酵蔗糖果糖、乳糖、麥芽糖、，MR 試驗(yàn)陽(yáng)性，三糖鐵底層產(chǎn)酸，V-P 試驗(yàn)陰性，尿素酶試驗(yàn)陰性產(chǎn)生靛基質(zhì)（表2）。

3.2.4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果（抑菌圈直徑平均值，單位：mm）

由表 3 可以看出：分離的大腸桿菌對(duì)氟苯尼考、丁胺卡那霉素、新霉素、慶大霉素敏感，對(duì)環(huán)丙沙星、強(qiáng)力霉素、諾氟沙星中度敏感，而對(duì)紅霉素、青霉素鏈霉素產(chǎn)生了耐藥。

5 結(jié)論

藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，分離的大腸桿菌對(duì)氟苯尼考，丁胺卡那霉素，新霉素，慶大霉素敏感，對(duì)環(huán)丙沙星，強(qiáng)力霉素，諾氟沙星中度敏感，而對(duì)紅霉素，青霉素，鏈霉素產(chǎn)生了耐藥。

參考文獻(xiàn)：（6篇，略）

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