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    EB病毒血清學聯(lián)合DNA定量檢測在診斷嬰兒傳染性單核細胞增多癥中的意義

    2014-05-19 00:43朱芹郭平黃雅娟等
    中國現(xiàn)代醫(yī)生 2014年11期

    朱芹 郭平 黃雅娟等

    [摘要] 目的 評估EB病毒抗體VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgG、EBNA-IgG及EBV-DNA載量檢測在嬰兒傳染性單核細胞增多癥(IM)中的診斷意義。 方法 用ELISA法檢測78例IM患兒血清中EBV四種抗體及PCR熒光定量法檢測外周血單個核細胞EBV-DNA載量。 結(jié)果 在IM急性期VCA-IgM陽性率在<1歲患兒中為27.8%,而≥4歲組患兒中為83.3%。有近20% <1歲患兒所有EBV抗體均陰性,需重復做抗體測定。EBV-DNA載量檢測總陽性率為70.5%,<1歲患兒中陽性率為61.1%,<1歲組患兒中有5例,在1歲組患兒中3例早期檢測VCA-IgM抗體是陰性,而EBV-DNA載體是陽性的,但在后來的VCA-IgG檢測均是陽性的。結(jié)論 在嬰兒期IM急性階段,只用血清學方法來診斷不夠靈敏,建議在VCA-IgM陰性的患兒中聯(lián)合EBV-DNA載量檢測,以提高嬰幼兒IM臨床診斷的敏感性。

    [關鍵詞] EB病毒;傳染性單核細胞增多癥;EBV抗體;EBV-DNA

    [中圖分類號] R466.6 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701(2014)11-0056-03

    [Abstract] Objective To evaluation the diagnosis sensitivity of Epstein-Barr virus(EBV) DNA load and four antibodies(VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgG、EBNA-IgG) in infantile infectious mononucleosis(IM). Methods EBV DNA loads of peripheral blood samples from 78 pediatric IM patients were analyzed by fluorescence quantitative polymerase chain reaction(PQ-PCR) as well as Elias method to detect the four antibodies in the serology. Results The anti-viral capsid antigen-IgM(anti-VCA-IgM) positive rate in the acute phase was only 27.8% in infants but 83.3% in patients ≥4 years of age. Nearly twenty percent of the infants were negative for all anti-EBV antibodies and required repeated serologic tests. The total positive rate of EBV-DNA load was 70.5% and the positive rate of the infants of <1 year old was 61.1%.Five of <1 year old and three of 1 year old seronegative infants with IM symptoms were positive in EBV - DNA load during acute phase were eventually considered as having IM on anti-VCA-IgG seroconversion thereafter. Conclusion It is not sensitive enough to diagnose IM in the infants with serologic test alone. It is proposed that the EBV-DNA load is also evaluated in peripheral blood mononuclear cells when infants presenting with IM symptoms which are negative for anti-EBV antibodies during the acute phase to increase the diagnostic sensitivity of IM in infants.

    [Key words] Epstein-Barr virus; Infectious mononucleosis; Epstein-Barr virus antibodies; Epstein-Barr virus DNA

    傳染性單核細胞增多癥(IM)是由EB病毒感染所致的急性傳染病。臨床上以發(fā)熱、咽峽炎、淋巴結(jié)及肝脾腫大、外周血中淋巴細胞增加并出現(xiàn)異形淋巴細胞等為特征[1]。是兒童時期常見的病毒傳染病,一年四季均可發(fā)病,臨床表現(xiàn)多樣,且往往有多臟器損害,早期診斷困難,易漏診誤診,尤其是在嬰幼兒中,由于抗EB病毒抗體反應弱,更給診斷帶來困難。本研究對傳染性單核細胞增多癥患兒的四種抗EBV抗體及EBV-DNA載量測定進行分析,以評價此兩種檢測指標在IM患兒中的診斷意義。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選取2010年1月~2012年12月在紹興市人民醫(yī)院住院治療的78例診斷為IM的病例,IM診斷標準參考《諸福棠實用兒科學》[2],并排除巨細胞病毒、弓形體、腺病毒及化膿性鏈球菌感染,其中男46例,女32例,年齡2個月~14歲。按年齡分為四個組:<1歲、1歲、2~3歲、≥4歲。

    1.2 方法

    靜脈抽血2 mL,采用ELISA方法測定EBV四種抗體,包括:VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgG和EBNA-IgG。試劑盒由德國OUMEMG公司生產(chǎn)。血清樣本來自3個階段:急性期≤3周,恢復期4~8周,隨訪期≥24周。并比較各個年齡組的EBV抗體。檢測方法參考試劑說明書。低于1.0×103拷貝為陰性。實驗同時設陰陽性對照。

    1.3 統(tǒng)計學處理

    采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件對所得數(shù)據(jù)進行分析處理,計數(shù)資料用χ2檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果

    2.1 VCA-IgM檢測結(jié)果

    各年齡組VCA-IgM結(jié)果如表1所示,VCA-IgM在急性期,即發(fā)熱開始3周內(nèi)檢測。<1歲組、1歲組、2~3歲組和≥4歲組陽性率分別為27.8%、41.2%、61.5%和83.3%,隨著年齡上升,陽性率也在提高。比較VCA-IgM陽性率,<1歲和≥1歲(χ2=8.57,P<0.01),<2歲和≥2歲(χ2=14.25,P<0.01),<4歲和≥4歲(χ2=13.13,P<0.01),差異有統(tǒng)計學意義。病程8周后再檢測VCA-IgM,已均為陰性。

    2.2 VCA-IgG檢測結(jié)果

    各年齡組VCA-IgG結(jié)果如表1所示,VCA-IgG也在IM急性期測得,在IM急性期VCA-IgG總陽性率是92.3%。<1歲組、1歲組VCA-IgG陽性率分別是77.8%和88.2%,>2歲兒童在急性期均能測得VCA-IgG。<1歲組和≥4歲組VCA-IgG陽性率差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=7.27,P<0.05)。

    2.3 EA-IgG檢測結(jié)果

    各年齡段EA-IgG不同時間段檢測結(jié)果如表2所示。各年齡組EA-IgG分別在急性期(≤3周),恢復期(4~8周),隨訪期(≥24周)測得,在急性期,<1歲組、1歲組、2~3歲組和≥4歲組陽性率分別為0、17.6%、30.8%、63.3%。在隨訪期(≥24周),2歲及以上兒童EA-IgG陽性率約40.0%左右。

    2.4 EBNA-IgG檢測結(jié)果

    各年齡段EBNA-IgG不同時間段檢測結(jié)果如表2所示。EBNA-IgG出現(xiàn)較晚,約有20%患兒在隨訪期仍測不到EBNA-IgG。

    2.5 EBV-DNA載量檢測結(jié)果及與VCA-IgM檢測結(jié)果比較

    各年齡段EBV-DNA載量檢測結(jié)果及與VCA-IgM檢測結(jié)果比較見表1、3。表1所示EBV-DNA載量陽性率是70.5%。在<1歲患兒中,EBV-DNA載體陽性率分別為61.1%,與同組VCA-IgM的陽性率27.8%比較差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=4.05,P<0.05),在2~3歲組及≥4歲組患兒中,EBV-DNA載體陽性率分別為69.2%及80.0%,與同組VCA-IgM陽性率比較對IM早期檢出率無明顯差異(χ2分別為0.17、0.11,P>0.05)。在<1歲組患兒中有5例,在1歲組患兒中3例早期檢測VCA-IgM抗體是陰性,而EBV-DNA載體是陽性的,但在后來的VCA-IgG檢測是陽性的。

    3 討論

    傳染性單核細胞增多癥(IM)是常見的一種單核巨噬細胞系統(tǒng)急性增生性傳染病,主要由EBV感染引起。EBV感染人體后,B淋巴細胞是主要宿主細胞,EB病毒感染B淋巴細胞后,B淋巴細胞可表達一系列EB病毒特異性抗原,誘導機體產(chǎn)生免疫反應,產(chǎn)生針對EBV的多種抗體。在原發(fā)性EBV感染過程中首先產(chǎn)生針對衣殼抗原(CA)的IgM和IgG抗體(抗CA-IgM/IgG),抗CA-IgM早期出現(xiàn),在1~2個月后消失,抗CA-IgG抗體稍遲于前者。在急性感染晚期,抗早期抗原(EA)抗體出現(xiàn),可持續(xù)3~6個月,在恢復期晚期抗核抗原(NA)抗體產(chǎn)生,抗CA-IgG和抗NA-IgG可持續(xù)終身??笴A-IgM陽性一直是EB病毒感染IM診斷依據(jù),但是EB病毒感染的血清學反應復雜多樣,有的病例抗CA-IgM產(chǎn)生延遲,有的持續(xù)缺失[3~4],這給IM的早期確診帶來一定困難。目前很多文獻只是報道CA-IgM在IM診斷中的應用,且陽性率較高,可能與選擇病例的年齡及有典型IM癥狀及體征才做檢測有關。本組病例中,VCA-IgM陽性共45例,陽性率為57.7%,較文獻報道低[5,6],這與本組選擇病例的年齡有關,在我們選擇的78例IM患兒中,嬰幼兒比例較高,<1歲患兒占18/78(23.1%),1歲組占17/78(21.8%)這些患兒的抗CA-IgM、抗CA-IgG抗體陽性率均不高,抗CA-IgM為27.8%、41.2%,抗CA-IgG抗體為77.8%、88.2%,而在≥4歲的兒童中抗CA-IgM陽性率在80%以上,這表明用目前的血清學標準在急性期來診斷>2歲的患兒IM是有用的,而在1歲或1歲以下患兒的IM還缺乏相應的標準。對于<1歲的兒童,不能僅憑抗CA-IgM來診斷,在急性期和恢復期雙份血清抗CA-IgG抗體滴度4倍以上的升高可能更有用,所以需重復進行血清檢測。而對抗EA抗體和抗CA-IgM/IgG一樣,在<1歲和1歲年齡組中,陽性率均很低,這可能與相對年長兒童、小年齡兒童的抗體反應弱有關。而NA-IgG在恢復期晚期出現(xiàn),20%患兒在隨訪期仍測不到。

    EBV-DNA檢測一方面可以應用于EBV攜帶者的低水平復制,此外還可以檢測EBV相關性疾病的活動性感染。對EBV攜帶者而言,其淋巴細胞內(nèi)一般可能存在著較低水平的EBV-DNA載量,但這些攜帶者的血漿及血清中則很少檢測到EBV-DNA。實時熒光定量PCR能夠準確地檢測病毒的拷貝數(shù),能更準確地反映EB病毒感染和病毒復制情況,為IM患兒在臨床診斷及治療上提供很大幫助。在我們的研究中,EBV-DNA載體總陽性率為70.5%,與國內(nèi)文獻相當[7],在<1歲及1歲組患兒中,EBV-DNA載體陽性率分別為61.1%及64.7%,與同組VCA-IgM陽性率27.8%、41.2%比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01),我們發(fā)現(xiàn)在<1歲組患兒5例,在1歲組患兒3例在急性階段血清學是陰性的,EBV-DNA是陽性的,在后來復查血清學抗CA-IgG轉(zhuǎn)成陽性便作出了明確診斷。那么在IM急性期,當EBV特異抗體未被檢測到,EBV-DNA檢測是否可以作為補充。特別是在嬰幼兒中,較弱的和延遲的抗體生成可能是由于他們的免疫反應未成熟[8,9],所以當嬰幼兒有典型的IM癥狀,而急性期中抗體又是陰性,我們是否可以通過增加檢測EBV-DNA作為補充來提高診斷敏感性。

    [參考文獻]

    [1] Olson D, Huntington MK. Co-infection with cytomegalovirus and Epstein-Barr virus in mononucleosis. Case report and review of literature[J]. S D Med,2009,62(9):349-353.

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    (收稿日期:2013-09-23)

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    (收稿日期:2013-09-23)

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