SDF-1α促進(jìn)原代培養(yǎng)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖的作用

黃曉佳，李 靜，許 瀟，李永金

（江蘇大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院藥理學(xué)系，江蘇鎮(zhèn)江 212013）

星形膠質(zhì)細(xì)胞是大腦神經(jīng)細(xì)胞中比例最高的一種神經(jīng)細(xì)胞，對(duì)神經(jīng)元可起到營養(yǎng)、支持、清除毒性氨基酸而保護(hù)神經(jīng)元的作用［1-2］。近年來研究表明，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生損傷時(shí)，星形膠質(zhì)細(xì)胞可產(chǎn)生并分泌許多炎癥介質(zhì)，如細(xì)胞因子和趨化因子，繼而調(diào)節(jié)神經(jīng)元的功能［3-4］。在腦損傷后的恢復(fù)期，星形膠質(zhì)細(xì)胞可被激活而增殖，產(chǎn)生膠質(zhì)疤痕，該作用也與其分泌的活性物質(zhì)有關(guān)。

近年來，研究發(fā)現(xiàn)一種趨化因子：間質(zhì)細(xì)胞來源因子-1（stromal cell-derived factor-1，SDF-1）在神經(jīng)系統(tǒng)中具有一定的功能，參與了一些神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生過程，如急性腦缺血、外傷性腦損傷、大腦感染等。SDF-1最初在B細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，對(duì)T淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等具有趨化作用［5-6］。根據(jù)基因剪切的不同，SDF-1有二種異構(gòu)體：SDF-1α和SDF-1β［6］。SDF-1氨基酸序列在各物種間高度保守，人和小鼠的SDF-1α和SDF-1β蛋白氨基酸序列分別有99%和97%的相似度［7］。除對(duì)血液系統(tǒng)的作用，SDF-1也可調(diào)節(jié)心臟細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能，具有促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用。SDF-1通過與其受體結(jié)合發(fā)揮作用，其受體包括CXCR-4和CXCR-7。CXCR-4受體參與了腫瘤細(xì)胞的生長、遷移、浸潤等過程［8］；CXCR-7受體表達(dá)于造血系統(tǒng)、心臟、血管、骨骼、腎臟等處，其對(duì)SDF-1的結(jié)合力高于CXCR-4受體［9-10］。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，SDF-1及其受體CXCR-4和CXCR7在神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、施旺細(xì)胞中均有表達(dá)，可調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)和一些激素的釋放［11］。但SDF-1對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞具有哪些作用，其作用產(chǎn)生的分子機(jī)制目前仍不明確。

在本實(shí)驗(yàn)中，我們采用原代培養(yǎng)的大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞作為工具，用重組人SDF-1α進(jìn)行刺激，觀察SDF-1α對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的作用，并研究其作用的相關(guān)分子信號(hào)通路。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料 新生大鼠（出生24 h以內(nèi)）來自于江蘇大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，高糖DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基、青霉素、鏈霉素購自Gibco公司，胎牛血清購自杭州四季青生物工程材料有限公司。重組人SDF-1α購自美國R＆D公司；胰酶、臺(tái)盼藍(lán)染液、細(xì)胞裂解液購自美國Sigma公司；溴化去氧尿苷（5-bromo-2′-deoxyuridine，BrdU）和小鼠抗 GFAP單克隆抗體購自美國Sigma公司；小鼠抗BrdU單克隆抗體購自美國B＆D公司；Alexa488和Alexa594結(jié)合兔抗小鼠熒光二抗均購自美國Jackson Immuno Research公司；鈣離子熒光探針（Fluo-3/AM）購自美國Molecular Probe公司；兔抗細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases，ERK）1/2單克隆抗體（No.4695）、兔抗磷酸化ERK1/2單克隆抗體（No.4376）購自美國Cell Signaling Technology公司；小鼠抗甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）單克隆抗體購自上?？党巧镌噭┯邢薰尽＜?xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購自碧云天生物技術(shù)研究所。細(xì)胞RNA提取試劑盒（RNeasymini kit）、大鼠 Cylin A2、Cyclin B1、Cyclophillin引物均購自美國Qiagen公司。cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和定量PCR試劑盒均購自美國ABI公司。定量PCR儀為美國ABI公司產(chǎn)品，激光共聚焦顯微鏡Zeiss LSM-510為德國Zeiss公司產(chǎn)品。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng) 按照文獻(xiàn)方法稍作修改，進(jìn)行大鼠皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的分離和培養(yǎng)［12］。將出生24 h內(nèi)的新生大鼠斷頸，剝離腦膜，去除小腦和延腦，將大腦皮層搗碎后加入0.25%胰酶于37°C消化15 min。將吹打后的細(xì)胞懸液過100目金屬篩，將含細(xì)胞的濾液培養(yǎng)于含10%胎牛血清、1×105U·L-1青霉素、100 mg·L-1鏈霉素和2 mmol·L-1谷氨酰胺的高糖DMEM中。培養(yǎng)24 h后，換液以去除非貼壁細(xì)胞，此后每周更換2次培養(yǎng)液。于12 d后，將培養(yǎng)瓶至于37℃恒溫?fù)u床上以200 r·min-1振搖過夜，去除小膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞等混雜細(xì)胞。將貼壁細(xì)胞消化種于培養(yǎng)板中進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。此細(xì)胞經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞酸性蛋白抗體免疫組化染色鑒定后，95%以上的細(xì)胞為星形膠質(zhì)細(xì)胞。

1.3 細(xì)胞計(jì)數(shù) 將星形膠質(zhì)細(xì)胞以2×108·L-1密度種植于24孔板上，以含0.5%血清培養(yǎng)進(jìn)行細(xì)胞周期同步化48 h，之后以不同濃度SDF-1α進(jìn)行處理。48 h后消化細(xì)胞，以0.4%臺(tái)盼藍(lán)染液進(jìn)行染色和細(xì)胞計(jì)數(shù)。

1.4 細(xì)胞增殖檢測(cè) 將星形膠質(zhì)細(xì)胞種植于玻璃片上，加入BrdU作用12 h，冷甲醇固定5 min，吹干后以PBS洗滌3次。加入抗BrdU抗體（1∶5）和抗GFAP抗體（1∶600）于4℃孵育過夜，PBS洗滌后與熒光二抗（1∶800）于室溫下作用1 h，用熒光顯微鏡拍照觀察陽性細(xì)胞，每張玻璃片選取5個(gè)不同視野，至少選取10 000個(gè)細(xì)胞，以陽性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的比例作為數(shù)據(jù)。

1.5 細(xì)胞內(nèi)鈣離子測(cè)定 在貼壁細(xì)胞培養(yǎng)液中加入熒光離子探針Fluo-3/AM（終濃度為10μmol·L-1），在37℃下避光孵育 40 min。之后，用 Hank′s溶液將細(xì)胞洗滌3次以去除多余的Fluo-3，以激光共聚焦顯微鏡掃描細(xì)胞，激發(fā)光波長為488 nm，發(fā)射光為550 nm，連續(xù)掃描400次，掃描頻率為2 s/次。給藥前掃描30次，給予相應(yīng)藥物后繼續(xù)掃描。使用ZEISS-SP2軟件計(jì)算鈣離子熒光強(qiáng)度。以各個(gè)時(shí)間點(diǎn)熒光強(qiáng)度與初始熒光強(qiáng)度比值作為細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度［Ca2＋］i的相對(duì)值。

1.6 W estern blot檢測(cè) 各組細(xì)胞經(jīng)處理后，以PBS吹打收集，加入細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞，以10 000×g于4℃離心20 min，取上清作為蛋白質(zhì)樣本。配制10%的SDS-PAGE膠，以30μg蛋白質(zhì)上樣進(jìn)行蛋白質(zhì)電泳。電泳結(jié)束后電轉(zhuǎn)于醋酸纖維素膜上，用5%脫脂奶粉于室溫下封閉1 h，于4℃與一抗（anti-ERK抗體1∶2 000，anti-ERK抗體1∶3 000，anti-GAPDH抗體1∶5 000）反應(yīng)過夜，經(jīng)洗滌后于室溫下與相應(yīng)二抗反應(yīng)1 h。進(jìn)行ECL發(fā)光反應(yīng)使底片曝光，掃描蛋白質(zhì)條帶灰度值并進(jìn)行分析。

1.7 細(xì)胞周期檢測(cè) 將星形膠質(zhì)細(xì)胞按2×108·L-1密度接種于6孔板，經(jīng)處理24 h后收集細(xì)胞，冷PBS洗滌2次，加入1 ml預(yù)冷70%乙醇中于4℃固定過夜，離心后棄上清。按照試劑盒說明書加入PI染色液（含 RNase A），混勻，于37℃避光孵育30 min后進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

1.8 細(xì)胞周期蛋白基因表達(dá)檢測(cè) 采用試劑盒提取細(xì)胞總mRNA，并采用DNA酶I進(jìn)行消化。mRNA經(jīng)純化后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，進(jìn)行定量RTPCR檢測(cè)。用Cyclophillin基因作為內(nèi)參，以mRNA相對(duì)表達(dá)量作為指標(biāo)。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以ˉx±s表示，采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。

Fig 1 Effects of SDF-1αon cell proliferation in rat astrocytes（ˉ±s，n＝6）A：Representative image of BrdU/GFAP double staining in astrocytes after 48 h-SDF-1αchallenge；B：Cell counting analysis revealsastrocytes underwent proliferation at48 h after the treatmentwith SDF-1α；C：BrdU incorporation assay shows the increased DNA synthesis in astrocytes after the treatmentwith SDF-1αfor 48 h.The arrows indicate the BrdU＋nuclei.*P＜0.05，**P＜0.01 vs control.Bar in A＝25μm.

2 結(jié)果

2.1 SDF-1α對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖的作用 在本實(shí)驗(yàn)中，采用細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞增殖。如Fig 1所示，星形膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)血清饑餓48 h后，以不同濃度的 SDF-1α處理 48 h，SDF-1α（10～40 nmol·L-1）可明顯的促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖，而5 nmol·L-1SDF-1α對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞沒有作用。同時(shí)，BrdU參入實(shí)驗(yàn)也證明，SDF-1α（10～40 nmol·L-1）可劑量依賴性地增加星形膠質(zhì)細(xì)胞的DNA合成。

2.2 SDF-1α對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的作用 趨化因子可通過激活其受體導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增加，并誘導(dǎo)相關(guān)生化反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)中，通過使用鈣離子熒光探針，測(cè)定了SDF-1α對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的作用。如Fig 2所示，靜息狀態(tài)下，星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度處于穩(wěn)定的狀態(tài)，加入SDF-1α（20 nmol·L-1）后，細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度明顯增加，約20 s后達(dá)到峰值，后逐漸降低至正常水平。而溶劑對(duì)照組細(xì)胞鈣離子濃度無明顯變化。

Fig 2 Effect of SDF-1αon intracellular calcium concentration in astrocytesThe intracellular calcium concentration in astrocytes was increased，with a peak at10 s after SDF-1αchallenge

2.3 SDF-1α對(duì)細(xì)胞ERK信號(hào)的作用 在細(xì)胞增殖的過程中，ERK信號(hào)通路發(fā)揮了重要的作用。在神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中，SDF-1α通過激動(dòng)其受體而導(dǎo)致了 ERK1/2的磷酸化，繼而促使細(xì)胞發(fā)生增殖［13］。在本實(shí)驗(yàn)中，通過 Western blot的方法檢測(cè)了ERK1/2的磷酸化。如Fig 3所示，靜息狀態(tài)下星形膠質(zhì)細(xì)胞低表達(dá)磷酸化ERK1/2，而20 nmol·L-1SDF-1α可明顯提高ERK1/2的磷酸化水平，該作用從10 min開始，持續(xù)至60 min。

2.4 SDF-1α對(duì)細(xì)胞周期的作用 通過用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞周期的檢測(cè)，如Fig 4A所示，對(duì)照組細(xì)胞95%處于G0期；20 nmol·L-1SDF-1α可明顯增加處于S期和G2/M期的細(xì)胞，促使細(xì)胞由G0期進(jìn)入了S期和M期。

2.5 SDF-1α對(duì)細(xì)胞周期蛋白基因表達(dá)的作用 細(xì)胞周期蛋白對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)控具有重要的作用，在細(xì)胞周期轉(zhuǎn)化過程中發(fā)揮了調(diào)控功能。在細(xì)胞進(jìn)入S期后，cyclin表達(dá)發(fā)生變化，促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入下一個(gè)細(xì)胞周期。通過定量RT-PCR檢測(cè)，如Fig 4B所示，經(jīng)20 nmol·L-1SDF-1α處理48 h后，Cyclin A2、Cyclin B1的基因表達(dá)明顯增加。

Fig 3 Effects of SDF-1αon the phosphorylation of ERK1/2 in astrocytes±s，n＝4）After treatment with SDF-1α，the expression of pERK1/2 was increased，lasting from 10 min to 60 min.*P＜0.05，**P＜0.01 vs control.

Fig 4 Effects of SDF-1αon the cell cycle transition and expressions of Cyclin A2 and Cyclin B1 in astrocytes（±s，n＝4）After the treatmentwith SDF-1αfor 48 h，the percentage of the astrocytes in S phase and M phase was increased；A：ThemRNA expressions of Cyclin A2 and Cyclin B1 were induced by the treatmentwith SDF-1αfor 48 h as well B：**P＜0.01 vs control.

3 討論

本研究表明，外源性給予SDF-1α可明顯促進(jìn)原代培養(yǎng)大鼠星形細(xì)胞增殖。同時(shí)，SDF-1α可促進(jìn)鈣離子內(nèi)流，激活細(xì)胞內(nèi)ERK信號(hào)通路，使細(xì)胞周期由G0期進(jìn)入S期和M期；細(xì)胞周期相關(guān)蛋白Cylin A2和Cyclin B1的基因表達(dá)也上調(diào)。這些結(jié)果表明，SDF-1α可通過促進(jìn)鈣離子內(nèi)流，使ERK信號(hào)通路激活，導(dǎo)致細(xì)胞進(jìn)入DNA合成期和細(xì)胞分裂期，從而使細(xì)胞增殖。該結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果相一致，提示SDF-1α具有生長因子樣作用，可促進(jìn)細(xì)胞增殖。

在與細(xì)胞增殖有關(guān)的細(xì)胞通路中，ERK1/2通路具有重要的作用。ERK1/2在細(xì)胞內(nèi)廣泛表達(dá)，可被具有有絲分裂原樣作用的因子，如細(xì)胞因子和趨化因子所磷酸化。被磷酸化激活后，ERK1/2可磷酸化一系列底物，包括蛋白激酶、受體、細(xì)胞骨架蛋白和轉(zhuǎn)錄因子，從而產(chǎn)生調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的作用［14-15］。使用反義寡核苷酸或抑制劑抑制ERK1/2的表達(dá)可起到抑制細(xì)胞增殖的作用，如成纖維細(xì)胞、T細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、干細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞［14］。相反，在細(xì)胞內(nèi)上調(diào)ERK1/2的活性則可減低細(xì)胞對(duì)生長因子的依賴性，并促進(jìn)其增殖［16］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，星形膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)SDF-1α刺激后，細(xì)胞內(nèi)ERK1/2迅速被磷酸化，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞增殖，進(jìn)一步證實(shí)了ERK1/2在細(xì)胞增殖中的作用［17］。

此外，ERK1/2通路也可調(diào)節(jié)細(xì)胞周期轉(zhuǎn)變過程。靜息狀態(tài)下，ERK存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，呈無活性狀態(tài)。當(dāng)受到促有絲分裂因子刺激后，ERK1/2迅速被磷酸化，繼而在后續(xù)的數(shù)小時(shí)內(nèi)呈現(xiàn)出高活性狀態(tài)，直到G1后期［18］。ERK信號(hào)被激活后，Cyclin D1表達(dá)上調(diào)，Cyclin A2和Cyclin B1的表達(dá)也增高，共同起到促進(jìn)細(xì)胞周期轉(zhuǎn)變的作用［19］。ERK1/2也可轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核內(nèi)，促進(jìn)與細(xì)胞周期轉(zhuǎn)變有關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞生長周期的轉(zhuǎn)變［20］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，SDF-1α可促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞由G0期向S期和M期轉(zhuǎn)變，同時(shí)Cyclin A2和Cyclin B1的基因表達(dá)也出現(xiàn)增高。

目前，研究已證實(shí)，SDF-1α不僅可通過調(diào)節(jié)造血細(xì)胞的功能，如促進(jìn)前體細(xì)胞遷移和B淋巴細(xì)胞前體細(xì)胞增殖；還具有調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞增殖和遷移的作用，如促進(jìn)小腦神經(jīng)細(xì)胞的遷移，促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞的增殖［11］。CXCR4受體阻斷藥 AMD3100可阻斷SDF-1所引發(fā)的細(xì)胞遷移和增殖的作用，表明SDF-1α的作用可能由CXCR4受體所介導(dǎo)［21］。同時(shí)，SDF-1通過激動(dòng)CXCR4受體，使腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖，CXCR4受體在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中高表達(dá)，和腫瘤惡性程度正相關(guān)［12］。這些結(jié)果均表明SDF-1通過其受體調(diào)節(jié)了部分神經(jīng)和腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移。近年來部分研究表明，CXCR4和CXCR7受體可產(chǎn)生二聚體，其作用可能會(huì)部分重合，甚至相互干擾［22］。CXCR4激活后可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高，而CXCR7卻不具備該作用，提示需采用RNA干擾等高特異性的方法來研究SDF-1受體介導(dǎo)的生理學(xué)效應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，SDF-1α可促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞鈣離子內(nèi)流，推測(cè)可能是由CXCR4受體介導(dǎo)了該效應(yīng)，在今后的研究中該問題將得到進(jìn)一步驗(yàn)證和闡明。

綜上，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，SDF-1α可增加原代培養(yǎng)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，磷酸化ERK1/2蛋白，促使細(xì)胞進(jìn)入S期和M期，并可促進(jìn)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白如Cyclin A2和Cyclin B1的基因表達(dá)，具有明顯促細(xì)胞增殖的作用。該結(jié)果提示，SDF-1α可能調(diào)節(jié)了中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后膠質(zhì)細(xì)胞增生的過程。

參考文獻(xiàn)：

［1］ Blackburn D，Sargsyan S，Monk P N，et al.Astrocyte function and role in motor neuron disease：a future therapeutic target［J］？Glia，2009，57（12）：1251-64.

［2］ Vangeison G，Carr D，F(xiàn)ederoff H J，et al.The good，the bad，and the cell type-specific roles of hypoxia inducible factor-1 alpha in neurons and astrocytes［J］.JNeurosci，2008，28（8）：1988-93.

［3］ RitzM F，Hausmann ON.Effect of17beta-estradiol on functional outcome，release of cytokines，astrocyte reactivity and inflammatory spreading after spinal cord injury in male rats［J］.Brain Res，2008，1203：177-88.

［4］ 牛 非，胡金風(fēng)，苑玉和，等.星形膠質(zhì)細(xì)胞在腦缺血中的變化和作用［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2011，27（10）：1342-5.

［4］ Niu F，Hu JF，Yuan Y H，etal.Change and role of astrocyte in cerebral ischemia［J］.Chin Pharmacol Bull，2011，27（10）：1342-5.

［5］ Ma Q，Jones D，Borghesani P R，et al.Impaired B-lymphopoiesis，myelopoiesis，and derailed cerebellar neuronmigration in CXCR4-and SDF-1-deficient mice［J］.Proc Natl Acad Sci USA，1998，95（16）：9448-53.

［6］ Yang S，Pham L K，Liao CP，et al.A novel bonemorphogenetic protein signaling in heterotypic cell interactions in prostate cancer［J］.Cancer Res，2008，68（1）：198-205.

［7］ Shirozu M，Nakano T，Inazawa J，et al.Structure and chromosomal localization of the human stromal cell-derived factor 1（SDF1）gene［J］.Genomics，1995，28（3）：495-500.

［8］ Balkwill F.The significance of cancer cell expression of the chemokine receptor CXCR4［J］.Semin Cancer Biol，2004，14（3）：171-9.

［9］ Gerrits H，Van Ingen Schenau D S，Bakker N E，et al.Early postnatal lethality and cardiovascular defects in CXCR7-deficient mice［J］.Genesis，2008，46（5）：235-45.

［10］Balabanian K，Lagane B，Infantino S，etal.The chemokine SDF-1/CXCL12 binds to and signals through the orphan receptor RDC1 in T lymphocytes［J］.JBiol Chem，2005，280（42）：35760-6.

［11］Odemis V，Boosmann K，Heinen A，et al.CXCR7 is an active component of SDF-1 signalling in astrocytes and Schwann cells［J］.JCell Sci，2010，123（Pt7）：1081-8.

［12］Huang X J，ZhangW P，LiC T，etal.Activation of CysLT receptors induces astrocyte proliferation and death after oxygen-glucose deprivation［J］.Glia，2008，56（1）：27-37.

［13］Barbero S，Bonavia R，Bajetto A，et al.Stromal cell-derived factor 1alpha stimulates human glioblastoma cell growth through the activation of both extracellular signal-regulated kinases 1/2 and Akt［J］.Cancer Res，2003，63（8）：1969-74.

［14］Meloche S，Pouyssegur J.The ERK1/2 mitogen-activated protein kinase pathway as amaster regulator of the G1-to S-phase transition［J］.Oncogene，2007，26（22）：3227-39.

［15］Yoon S，Seger R.The extracellular signal-regulated kinase：multiple substrates regulate diverse cellular functions［J］.Growth Factors，2006，24（1）：21-44.

［16］Cheng M，Sexl V，Sherr C J，etal.Assembly of cyclin D-dependent kinase and titration of p27Kip1 regulated bymitogen-activated protein kinase kinase（MEK1）［J］.Proc Natl Acad Sci USA，1998，95（3）：1091-6.

［17］高麗昌，李婷婷，唐 祿，等.ERK1/2信號(hào)通路在角質(zhì)細(xì)胞生長因子-2誘導(dǎo)角膜基質(zhì)細(xì)胞增殖中的作用［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2011，27（10）：1405-5.

［17］Gao LC，Li T T，Tang L，etal.Role of ERK-1/2 signaling pathway in keratinacyte growth factor-2 stimulating human keratinocyte proliferation［J］.Chin Pharmacol Bull，2011，27（10）：1405-5.

［18］Yamamoto T，Ebisuya M，Ashida F，et al.Continuous ERK activation downregulates antiproliferative genes throughoutG1 phase to allow cell-cycle progression［J］.Curr Biol，2006，16（12）：1171-82.

［19］Zhang W，Liu H T.MAPK signal pathways in the regulation of cell proliferation inmammalian cells［J］.Cell Res，2002，12（1）：9-18.

［20］Lidke D S，Huang F，Post JN，et al.ERK nuclear translocation is dimerization-independent but controlled by the rate of phosphorylation［J］.JBiol Chem，2010，285（5）：3092-102.

［21］Folkins C，Shaked Y，Man S，etal.Glioma tumor stem-like cells promote tumor angiogenesis and vasculogenesis via vascular endothelial growth factor and stromal-derived factor1［J］.Cancer Res，2009，69（18）：7243-51.

［22］Levoye A，Balabanian K，Baleux F，et al.CXCR7 heterodimerizeswith CXCR4 and regulates CXCL12-mediated G protein signaling［J］.Blood，2009，113（24）：6085-93.