ELISA定性檢測(cè)HBsAg灰區(qū)和相關(guān)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果分析

李 秀，王紅麗，馬 超，田永芳，劉小雙

ELISA定性檢測(cè)HBsAg灰區(qū)和相關(guān)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果分析

李 秀，王紅麗，馬 超，田永芳，劉小雙

（新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，新疆烏魯木齊830001）

實(shí)際工作中，由于HBsAg濃度低或基因表達(dá)變異，出現(xiàn)乙肝表面抗原灰區(qū)。本實(shí)驗(yàn)正是運(yùn)用酶免法定性檢測(cè)HBsAg，同時(shí)結(jié)合化學(xué)發(fā)光定量法及核酸DNA檢測(cè)相關(guān)結(jié)果，進(jìn)行對(duì)比分析，從而劃分灰區(qū)范圍，準(zhǔn)確檢出乙肝表面抗原灰區(qū)血清，發(fā)出正確報(bào)告單。

1 材料與方法

1．1 標(biāo)本來(lái)源

我院2011年3月—2012年3月門診、住院病人篩選出弱陽(yáng)性標(biāo)本（0．05＜A＜0．5）48例4種感染模式患者血清。其中HBsAg＋、抗HBeAg＋和抗HBcAg＋感染者HBsAg A值0．1－0．5間27例和0．5－＞1．0（弱陽(yáng)性報(bào)出）13例；HBsAg＋、HBeAg＋和抗HBcAg＋感染者HBsAg A值0．1－0．5間3例和0．5－＞1．0（弱陽(yáng)性報(bào)出）5例。見(jiàn)表1。

1．2 儀器及試劑

1．2．1 ELISA法采用的是廈門英科新創(chuàng)提供的乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒及科華公司立可讀乙肝檢測(cè)試劑盒（用于表面抗原雙篩）；洗滌液為英科新創(chuàng)原裝洗滌液；洗板機(jī)為Rayto RT－3100全自動(dòng)洗板機(jī)及KHB－Wellscan K3酶標(biāo)儀。

1．2．2 羅氏電化學(xué)發(fā)光乙肝檢測(cè)試劑盒及羅氏COBASE601電化學(xué)發(fā)光分析儀。

1．2．3 Roche Light Cycler 480型全自動(dòng)熒光實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增儀及深圳凱杰公司乙肝DNA檢測(cè)試劑。

1．3 資料統(tǒng)計(jì)處理

資料由LIS數(shù)據(jù)庫(kù)整理后，EXCEL軟件包做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，統(tǒng)計(jì)學(xué)方法用百分比計(jì)算。

2 結(jié)果

表1 低濃度HBsAg病人乙肝定量、定性檢測(cè)結(jié)果

從表中所見(jiàn)，HBsAg＋、抗HBeAg＋和抗HB－cAg＋感染模式中27例（56．2%）HBsAg弱陽(yáng)性病人Els法定性所測(cè)A值是0．1－0．5間，用Ecl法檢測(cè)HBsAg為1－10COI（＞1COI為陽(yáng)性），DNA拷貝均≤103IU／ml。13例（27．1%）HBsAg＋、抗HBeAg＋和抗HBcAg＋感染模式HBsAg弱陽(yáng)性病人，Els法定性初篩用英科新創(chuàng)乙肝表面檢測(cè)試劑盒，復(fù)篩用上海科華乙肝表面檢測(cè)試劑盒，A值結(jié)果是弱陽(yáng)性，一個(gè)是陽(yáng)性，在0．5－＞1．0間，仍按弱陽(yáng)性報(bào)出，其Ecl法檢測(cè)值為10－100COI，核酸DNA≤103IU／ml。5例（10．4%）HBsAg＋、HBeAg＋和抗HBcAg＋感染模式的病人，HBsAg Els法A值0．5－＞1．0，其Ecl法HBsAg＞100COI或更高；HBeAg＞500COI或更高，核酸≥103IU／ml。3例（6．2%）HBsAg＋、HBeAg＋和抗HBcAg＋感染模式的病人，HBsAg Els法A值0．1－0．5間，其Ecl法在1－10COI間，DNA≤103IU／ml。見(jiàn)表1。

3 討論

由此，本實(shí)驗(yàn)認(rèn)為，若Els法HBsAg A值在0．1－0．5or 0．5－＞1．0間，Ecl法HBsAg定量值在1－100COI，DNA≤103IU／ml，可視為乙肝灰區(qū)范圍。

Els法由于方法學(xué)原因，受不同試劑、標(biāo)本質(zhì)量、操作精細(xì)程度等多種因素影響，易造成假陰性或假陽(yáng)性［1］。而化學(xué)發(fā)光法靈敏度高，尤其對(duì)低濃度HBsAg血清，重復(fù)性好，在完全密閉反應(yīng)系統(tǒng)中進(jìn)行，可消除試劑批間及批內(nèi)差異［2］。而DNA檢測(cè)水平升高取決于HBeAg陽(yáng)性而不是HBsAg陽(yáng)性。

在運(yùn)用Els法定性檢測(cè)乙肝表面抗原灰區(qū)時(shí)，通常需重復(fù)試驗(yàn)并且使用兩種以上不同廠家試劑，最好進(jìn)一步用化學(xué)發(fā)光定量檢測(cè)，對(duì)比分析結(jié)果，并結(jié)合DNA核酸表達(dá)水平，只有這樣才能準(zhǔn)確無(wú)誤發(fā)出報(bào)告單，降低漏報(bào)誤報(bào)發(fā)生。

［1］李美忠，姜慶波．化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法測(cè)定乙型肝炎表面抗原的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)［J］．實(shí)用醫(yī)技雜志，2010，17（4）：343．

［2］劉秀琴，傅杭洲，張曉俐等．化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法與酶聯(lián)免疫法測(cè)定乙肝表面抗原的比較［J］．海南醫(yī)學(xué)，2010，21（8）：104．

2013－01－24）

1007－4287（2014）02－0290－02