牛大力水提物和醇提物急性毒性實(shí)驗(yàn)研究*

楊增艷,周海松,趙湘培,唐瑾,柏春暉

(廣西民族醫(yī)藥研究院,南寧 530001)

牛大力水提物和醇提物急性毒性實(shí)驗(yàn)研究*

楊增艷,周海松,趙湘培,唐瑾,柏春暉

(廣西民族醫(yī)藥研究院,南寧 530001)

目的 對牛大力水提取物和醇提取物的急性毒性進(jìn)行初步研究。方法通過測定小鼠的最大耐受量(MTD)評價(jià)牛大力的安全性。結(jié)果牛大力水提取物的MTD＞1 000 g·kg-1,相當(dāng)于人擬用日劑量的110倍;牛大力醇提物的MTD＞1 700 g·kg-1,相當(dāng)于人擬用日劑量的186倍。結(jié)論牛大力無明顯毒性,常用日劑量安全。

牛大力水提物;牛大力醇提物;毒性實(shí)驗(yàn),急性;最大耐受量

牛大力為豆科崖豆藤屬美麗崖豆藤(Millettia specisoaChamp)的根,具有補(bǔ)虛潤肺、強(qiáng)筋活絡(luò)等功效。常用于治療腎虛、氣虛、腰酸腿痛、風(fēng)濕病、慢性肝炎、支氣管炎、咳嗽、肺結(jié)核等病癥[1]。有關(guān)該藥材的毒性實(shí)驗(yàn)研究少見報(bào)道。筆者對牛大力的水提物和醇提物進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)研究,結(jié)合兩種提取物對小鼠體質(zhì)量方面的影響,對牛大力的安全性做出初步評價(jià),為其進(jìn)一步開展藥效學(xué)研究提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 SPF級昆明種小白鼠80只,雌雄各半,體質(zhì)量18～22 g。由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,生產(chǎn)許可證號:SCXK(桂)2013-0003,動(dòng)物質(zhì)量合格證號:0001757。動(dòng)物分籠飼養(yǎng),自由飲水,喂標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料。動(dòng)物室溫度(24±2)℃,相對濕度50%～60%,照明時(shí)間隨同自然變化。

1.2 藥材 牛大力藥材采自廣西防城。挖出植物根部,洗凈,切段曬干備用。經(jīng)廣西民族醫(yī)藥研究院梁定仁主任鑒定為豆科崖豆藤屬美麗崖豆藤的根。

1.3 儀器 電子天平(美國雙杰兄弟有限公司),恒溫水浴鍋(上海亞榮生化儀器廠)。

1.4 牛大力水提取物的制備 牛大力藥材粗粉,加入8倍體積純化水于不銹鋼鍋中浸泡45 min后,加熱煮沸后調(diào)整溫度致藥液微沸,繼續(xù)水煮2 h,濾出藥液。重復(fù)2次,將3次所得濾液合并,濃縮藥液至濃度為6.6 g·mL-1,得牛大力水提物。

1.5 牛大力醇提取物的制備 牛大力藥材粗粉用75%乙醇10倍量浸泡30 min后,微沸回流煎煮1.5 h,濾渣取汁,重復(fù)2次,將3次所得濾液合并,濃縮藥液至濃度為21 g·mL-1,得牛大力醇提物。

1.6 預(yù)實(shí)驗(yàn)情況 隨機(jī)選取受試小白鼠10只,雌雄各半。實(shí)驗(yàn)前禁食12 h,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一次性灌胃3 h后給飼料,自由飲水。觀察1 d,記錄動(dòng)物死亡情況。牛大力水提物濃度為6.6 g·mL-1,按40 mL·kg-1小鼠體質(zhì)量一次性灌胃,無死亡,動(dòng)物飲食和活動(dòng)正常;牛大力醇提物濃度為21 g·mL-1,按40 m L·kg-1小鼠體質(zhì)量一次性灌胃,無死亡,動(dòng)物飲食和活動(dòng)正常。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,可進(jìn)行最大耐受量(maximum tolerated dose,MTD)實(shí)驗(yàn)。

1.7 MTD實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物禁食12 h,按相當(dāng)于原藥材水提物6.6 g·mL-1、醇提物21 g·mL-1,小鼠口服最大給藥量0 mL·kg-1,灌胃給藥,水提物1 d內(nèi)共給藥3次(分別于9∶00,13∶00,17∶00),醇提物1 d內(nèi)給藥2次(分別于9∶00,17∶00),空白對照組相應(yīng)給予0.9%氯化鈉溶液。每天觀察并記錄小鼠的體質(zhì)量、皮膚毛發(fā)、眼和黏膜的變化、四肢活動(dòng)以及發(fā)生中毒和死亡等情況,連續(xù)觀察14 d,14 d后處死小鼠進(jìn)行尸體解剖檢查。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS10.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t檢驗(yàn),P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

給藥后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均出現(xiàn)不喜動(dòng)、不思飲食、尿液發(fā)黃、便溏等現(xiàn)象,24 h后觀察,上述癥狀消失,各組動(dòng)物飲食和活動(dòng)正常,未出現(xiàn)任何中毒癥狀,無動(dòng)物死亡。14 d后處死小鼠,肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、卵巢、子宮、精囊、前列腺、睪丸、胃、腸及胸腔、腹腔,各器官均無異常。牛大力水提取物MTD＞1 000 g·kg-1,醇提物MTD＞1 700 g·kg-1。以人擬用日劑量為1 g·kg-1來計(jì)算,水提物的最大耐受量相當(dāng)于人擬用日劑量的110倍,而醇提物的最大耐受量相當(dāng)于人擬用日劑量的186倍。牛大力水提物組給藥組對小鼠體質(zhì)量無影響;牛大力醇提物給藥組的小鼠體質(zhì)量增加量均小于空白對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見表1。

表1 牛大力水提物和醇提物對小鼠體質(zhì)量的影響Tab.1 Effect of water extract and ethanol extract of Radix millettiae speciosae on body weight of mice±s

表1 牛大力水提物和醇提物對小鼠體質(zhì)量的影響Tab.1 Effect of water extract and ethanol extract of Radix millettiae speciosae on body weight of mice±s

與空白對照組比較,*1P＜0.01Compared with blank control group,*1P＜0.01

體質(zhì)量/%空白對照組(雄性)組別劑量/ (g·kg-1)小鼠/只/g給藥前給藥后14 d體質(zhì)量增加率10 21.33±1.63 31.50±1.87 0.48空白對照組(雌性)0 10 18.67±0.82 27.00±0.89 0.45牛大力水提物(雄性)1 000 10 21.85±1.34 31.77±2.42 0.45牛大力水提物(雌性)1 000 10 19.17±1.03 26.33±1.56 0.37牛大力醇提物(雄性)1 700 10 21.46±1.20 29.61±1.56 0.34*1牛大力醇提物(雌性)1 700 10 21.23±1.64 26.77±1.54 0.30*10

3 討論

根據(jù)《中藥藥理研究方法學(xué)》要求,小鼠最大耐受藥量倍數(shù)以耐受人用量口服100倍以上(按體質(zhì)量計(jì)算)為安全,可以提供臨床應(yīng)用[2]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,牛大力無論水提物或醇提物的最大給藥量均大于成人日用劑量100倍,且受試動(dòng)物飲食和活動(dòng)正常,未出現(xiàn)任何中毒癥狀,無動(dòng)物死亡,提示牛大力無明顯毒副作用。另外,牛大力的醇提物造成小鼠體質(zhì)量增加量減少的現(xiàn)象,還需結(jié)合長期毒性試驗(yàn)和更進(jìn)一步的藥理實(shí)驗(yàn),才能綜合分析與評價(jià)牛大力的安全性。

[1] 廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳.廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)[M].南寧:廣西科學(xué)技術(shù)出版社,1990:31.

[2] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2006:107-109.

DOI 10.3870/yydb.2014.06.007

Acute Toxicity Study of Water and Ethanol Extracts of Radix Millettiae Speciosae

YANG Zeng-yan,ZHOU Hai-song,ZHAO Xiang-pei,TANG Jin,BAI Chun-hui
(Guangχi Minority Nationality Medical Institute,Guangχi Zhuang Qutonomous Region,Nanning 530001,China)

ObjectiveTo study the acute toxicity of water and ethanol extracts ofRadiχmillettiae speciosae.MethodsThemaximum tolerated dose(MTD) of water and ethanol extracts ofRadiχmillettiae speciosaeweremeasured for the safety evaluation.ResultsMaximal tolerated dose(MTD) of water extractwas higher than 1 000 g·kg-1,which equaled to 110 times the dose for human adults(60 kg).MTD of ethanol extractwas higher than 1 700 g·kg-1,which equaled to 186 times the dose for human adults(60 kg).ConclusionRadiχmillettiae speciosaedoes not have obvious toxicity,thus its routine clinical dose is safe and feasible.

Water extract ofRadiχmillettiae speciosae;Ethanol extract ofRadiχmillettiae speciosae;Toxicity experiment,acute;Maximum tolerated dose

R285

A

1004-0781(2014)06-0721-02

2013-10-20

2013-11-20

*2012年度廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科技專項(xiàng)課題(GZPT1231)

楊增艷(1975-),男,壯族,廣西南寧人,副主任藥師,碩士,主要從事傳統(tǒng)醫(yī)藥研究與開發(fā)工作。電話:(0) 13517687298,E-mail:yzyan@163.com。