鼠抗人hMIC-l單克隆抗體抑制裸鼠移植人胰腺癌體內(nèi)研究

劉朝陽，王小兵，張 偉

（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院，中國協(xié)和醫(yī)學(xué)院，腫瘤研究所腫瘤醫(yī)院，北京 100021）

鼠抗人hMIC-l單克隆抗體抑制裸鼠移植人胰腺癌體內(nèi)研究

劉朝陽，王小兵，張 偉

（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院，中國協(xié)和醫(yī)學(xué)院，腫瘤研究所腫瘤醫(yī)院，北京 100021）

目的 初步研究鼠抗人hMIC-l單克隆抗體對胰腺癌體內(nèi)給藥的抗腫瘤活性，為hMIC-l抗體應(yīng)用于腫瘤治療提供實驗依據(jù)。方法 2種人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1和SW1990各腋窩皮下接種24只Balb/c裸鼠，共計48只皮下接種荷瘤裸鼠分別隨機(jī)共分為8組，每組6只荷瘤鼠。模型對照組荷瘤裸鼠腹腔注射0.9％氯化鈉注射液（10 mL/kg，NS，Biw，ip×8），陽性對照組荷瘤裸鼠腹腔注射鍵擇（50 mg/kg，qw，ip×4），鼠抗人hMIC-l單克隆抗體組分別荷瘤鼠尾靜脈內(nèi)注射鼠抗人hMIC-l單克隆抗體（10 mg/kg，Biw，ip×8）共4周或（2 mg/kg，Biw，ip× 8）共4周。觀察荷瘤裸鼠日常表現(xiàn)、腫瘤生長、實驗后腫瘤組織切片HE染色后光鏡下的組織形態(tài)學(xué)改變。結(jié)果荷瘤裸鼠尾靜脈內(nèi)注射鼠抗人hMIC-l單克隆抗體組裸鼠（10 mg/kg，Biw，iv×8）腫瘤生長緩慢，瘤體明顯小于模型對照組，并呈現(xiàn)量效關(guān)系。鏡下觀察鼠抗人hMIC-l單克隆抗體組實驗后腫瘤組織切片胰腺結(jié)構(gòu)破壞，有大量淋巴細(xì)胞浸潤，腫瘤細(xì)胞明顯壞死，細(xì)胞溶解。結(jié)論 尾靜脈內(nèi)注射鼠抗人hMIC-l單克隆抗體（10 mg/kg，Biw，iv×8）能有效抑制裸鼠移植人胰腺癌PANC-1腫瘤生長，使瘤組織壞死、結(jié)構(gòu)破壞。

鼠抗人hMIC-l單克隆抗體；人胰腺癌；PANC-1；SW1990；抑瘤作用；體內(nèi)

巨噬細(xì)胞抑制因子 1（macrophage inhibitory cytokine-1，MIC-1）是 人 轉(zhuǎn) 化 生 長 因 子 β （transforming growth factor-β，TGF-β）超家族中的重要分支成員，1997年，Bauskin等［1］研究巨噬細(xì)胞活化相關(guān)基因時從U937細(xì)胞系cDNA文庫中首先分離出巨噬細(xì)胞抑制因子。后來，相同的蛋白被報告為胎盤轉(zhuǎn)化生長因子β（placental transforming growth factorbeta，PTGFB），前列衍生腺因子prostate derived factor，PDF），生長分化因子15（growth/differentiation factor 15，GDFl5），胎盤骨形態(tài)發(fā)生蛋白（placcntal bonemorphogenetic protein，PLAB），非甾體抗炎藥激活基因（nonsteroidal anti-inflammatory drug-activated gene，NAG-1）。該因子在正常生理情況下，胎盤是僅有高表達(dá)組織，不同的上皮細(xì)胞（包括神經(jīng)上皮）表達(dá)MIC-1mRNA較低，除中樞神經(jīng)系統(tǒng)上皮細(xì)胞（脈絡(luò)叢，室管膜）通過免疫組化方法可發(fā)現(xiàn)少量MIC-1蛋白表達(dá)外，在其他組織很難發(fā)現(xiàn)，但該因子在炎癥、腫瘤發(fā)生時可大量表達(dá)［2］。MIC-l表達(dá)和腫瘤有著密切的聯(lián)系，MIC-1能抑制cyclin D1抑癌基因的表達(dá)，從而促進(jìn)胃腸道固體瘤的發(fā)生。胰腺癌是一種臨床表現(xiàn)隱匿、發(fā)展迅速預(yù)后差的消化道惡性腫瘤，80％～85％胰腺癌患者就診時，病變已經(jīng)到了晚期，手術(shù)切除率只有15％左右，患者平均生存期僅為4～6月，5年生存率幾乎為零。MIC-l異常升高可能預(yù)警著病變的發(fā)生，在一些疾病中顯示出一定的臨床診斷價值。MIC-1作為候選血清腫瘤標(biāo)志物已進(jìn)行了較為廣泛的研究［3］，研究表明MIC-1聯(lián)合CAl99檢測可提高胰腺癌檢測的敏感性。通過比較腫瘤患者與正常人基因表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)MICI基因在腫瘤患者表達(dá)水平明顯升高，由于MIC-1是分泌性細(xì)胞因子，能夠進(jìn)入血液發(fā)揮遠(yuǎn)距離作用。MIC-1過表達(dá)具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的作用。積極研究和探索腫瘤及胰腺癌治療新途徑新藥物在腫瘤和胰腺癌研究方面具有重要意義。單克隆抗體制備實驗期長，影響因素多，包括抗原制備、動物免疫、脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞制備、細(xì)胞融合、雜交瘤細(xì)胞選擇性培養(yǎng)、雜交瘤細(xì)胞篩選與克隆化、抗體鑒定、分泌單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞系的建立以及單克隆抗體制備。我們科室從新鮮人胎盤組織（北京市朝陽醫(yī)院婦產(chǎn)科提供）提取RNA獲得MIC-1基因片段，并定點突變其5’端7個密碼子，將MIC-1基因5’端的7個非酵母偏好密碼子改造為酵母的同義優(yōu)越密碼子，從而顯著提高其在畢赤酵母中的表達(dá)量，通過基因重組方法獲得人MIC-1蛋白表達(dá)質(zhì)粒，篩選出穩(wěn)定高表達(dá)人MIC-1重組蛋白畢赤酵母GSll5菌株，建立種子庫，優(yōu)化發(fā)酵、表達(dá)和純化工藝，采用ELISA法測定單克隆抗體免疫球蛋白類型與亞型，SDS-PAGE電泳檢測表達(dá)產(chǎn)物，ELISA間接法測定抗體的濃度，western blot方法檢測免疫后小鼠抗血清特異性，抗體經(jīng)蛋白A親合層析柱純化后純度可達(dá)95％以上。本實驗以研究室制備的酵母重組hMIC-I抗原作為免疫原制備出抗hMIC-1單克隆抗體為深入開展功效研究，抗腫瘤作用研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 藥物和試劑

鼠抗人MIC-1單克隆抗體無菌液由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所生物檢測中心制備，日常冷凍保存-70℃冰箱中，抗體純度達(dá)95％以上。注射用鹽酸吉西 他 濱 （鍵 擇 Gemcitabine Hydrochloride for Injection），進(jìn)口藥品注冊證號H20050171，產(chǎn)品批號A634640A，F(xiàn)rance Lilly產(chǎn)品。無菌0.9％氯化鈉注射液，北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品，國藥準(zhǔn)字H11021190，批號D201006312。

1.2 動物

Balb/c裸鼠，16～18 g，SPF級，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所提供［SCXK（京）2009-0004］。實驗在中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院中國協(xié)和醫(yī)學(xué)院腫瘤研究所腫瘤醫(yī)院實驗室完成［SYXK（京）2013-002］。

1.3 人可移植性胰腺癌細(xì)胞株

PANC-1由 Lieber M.等建株，SW1990由 Kyriazis AP.等建株，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所生物檢測中心液氮保存。

BD Ultra-Fine 29G舒銳一次性使用無菌、無毒、無熱源胰島素注射器，美國 BD公司產(chǎn)品，批號9019189，注冊證號國食藥監(jiān)械（進(jìn)）字 2007第3151306號，產(chǎn)品執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)YZB/USA2418-2006。

BD一次性使用無菌、無毒、無熱源帶注射針注射器，美國BD公司產(chǎn)品，批號0076363，注冊證號國食藥監(jiān)械（進(jìn)）字2007第3150778號，產(chǎn)品執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)YZB/SIN2414-2006。醫(yī)用凈化工作臺，CJ-2F型，凈化等級100級（美國聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)209E），平均菌落數(shù)≤0.5個/皿·h，平均風(fēng)速0.4±20％，噪聲≦62 dB （A），振動≦3μm（X，Y，Z方向），蘇州市馮氏實驗動物設(shè)備有限公司產(chǎn)品。librorEB-280型分析天平。82-1型電動離心機(jī)。Sartorius Laboratory精密天平，量程范圍0.01～100 g。奧豪斯電子精密天平，量程范圍0.01～510 g，U.S.A OHAUS coep產(chǎn)品。電子數(shù)顯卡尺，桂林廣陸數(shù)字測控股份有限公司產(chǎn)品，型號SF2000，分辨率0.01 mm，規(guī)格0～150 mm，標(biāo)準(zhǔn) GB/T14899-94。日本 NIKON倒置顯微鏡、Olympus/PM-6顯微鏡。多用可調(diào)照明放大鏡，北京鴻泰順達(dá)公司生產(chǎn)，型號JS126。多功能實驗（鼠）采血解剖放大儀，萊爾（北京）凈化設(shè)備有限公司制造，MODEL 8609。

1.4 腫瘤移植實驗方法

鼠抗人hMIC-1單克隆抗體對裸鼠移植人胰腺癌PANC-1和SW1990體內(nèi)作用取經(jīng)體外細(xì)胞培養(yǎng)已在裸鼠體內(nèi)皮下傳代生長良好人胰腺癌PANC-1和SW1990腫瘤結(jié)節(jié)，超凈臺中無菌操作制成瘤細(xì)胞液，接種于裸鼠腋窩皮下，7 x 106cell/鼠。將動物分別隨機(jī)分為4組，每組6只，稱體重標(biāo)號，PANC-1和SW1990共8組。實驗分別為模型對照組、陽性藥鍵擇（Gem 50 mg/kg）組、鼠抗人hMIC-1單克隆抗體高劑量（10 mg/kg）組、鼠抗人hMIC-1單克隆抗體低劑量（2 mg/kg）組。實驗組在接種腫瘤后腫瘤體積生長到約80～100 mm3時，每周尾靜脈注射鼠抗人hMIC-1單克隆抗體液2次，以后每周相同時間尾靜脈注射鼠抗人hMIC-1單克隆抗體液2次，實驗全程共注射鼠抗人hMIC-1單克隆抗體液液8次。陽性藥鍵擇（Gem 50 mg/kg）組開始給藥時間同實驗組，每周腹腔注射1次，以后每周相同時間腹腔注射1次，實驗全程共注射4次。模型對照組相同時間腹腔注射0.9％無菌Nacl注射液10 mL/kg，實驗全程共注射8次。各組給藥時間從接種腫瘤后第10天開始。裸鼠飼養(yǎng)在IVC-Ⅱ型（智能型）獨立送風(fēng)隔離籠具屏障系統(tǒng)輔以潔凈層流柜的動物飼養(yǎng)室內(nèi)，室溫20℃～22℃，相對濕度40％ ～60％。實驗動物使用許可證號SYXK（京）2008-0025。裸鼠食用滅菌裸鼠飼料，SPF級，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所產(chǎn)品，許可證號SCXK（京）2009-0008，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)GB14924.3-2001。于實驗開始后每4天用卡尺測一次皮下腫瘤體積，日常觀察荷瘤鼠表現(xiàn)，末次給藥結(jié)束后，于腫瘤接種后第37天處死動物，完整剖取瘤結(jié)并稱瘤重和體重，計算相對腫瘤增殖率，分別取實驗結(jié)束時PANC-1和SW1990模型對照組和鼠抗人hMIC-1單克隆抗體治療組腫瘤組織做病理切片，蘇木精-伊紅HE染色，Olympus/PM-6光學(xué)顯微鏡下觀察腫瘤組織變化，試驗結(jié)果用Office Excel軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。

1.5 統(tǒng)計方法

藥效判定標(biāo)準(zhǔn)：腫瘤抑制率={1-（給藥組平均瘤重（T）/對照組平均瘤重（C））}×100％；腫瘤體積（V）=腫瘤長徑（L）×腫瘤短徑（S）2/2。按以下公式計算相對腫瘤體積（RTV）和腫瘤體積抑制率IRTV（％）

RTV=Vt/V0

Vt：測量腫瘤得到的瘤體積

V0：初始瘤體積（給藥前）

T/C％=給藥組的RTV平均值/對照組的RTV平均值×100％

根據(jù)T/C％計算腫瘤體積抑制率IRTV（％）= {1-（T/C）}×％

2 結(jié)果

2.1 鼠抗人 hM IC-1單克隆抗體對人胰腺癌PANC-1和SW 1990抑制作用

實驗結(jié)果表明，鼠抗人hMIC-1單克隆抗體對人胰腺癌PANC-1具有明顯抑瘤活性（10 mg/kg，Biw，iv×8），腫瘤抑制率67.65％，抑瘤效應(yīng)與劑量間具有量效關(guān)系，抑瘤效果優(yōu)于鍵擇腹腔給藥組（Gem 50 mg/kg，qw，ip×4）（P＜0.01）（表1、彩插4圖1、2）。

表1 鼠抗人hMIC-1單克隆抗體對裸鼠移植人胰腺癌抑瘤作用觀察Tab.1 Effect ofmonoclonal antibody against hMIC-1 on pancreatic tumor in nudemice

2.2 鼠抗人 hM IC-1單克隆抗體對人胰腺癌PANC-1和SW 1990裸鼠體內(nèi)移植生長影響

實驗第六周結(jié)束后對人胰腺癌PANC-1實驗，鼠抗人hMIC-1單克隆抗體組（10 mg/kg，Biw，iv× 8）動物腫瘤體積平均為559 mm3，與荷瘤模型對照組動物腫瘤平均體積比較，腫瘤體積抑制率為66.82％。荷瘤模型對照組動物腫瘤體積平均為1685 mm3，鍵擇腹腔給藥組（Gem 50 mg/kg，qw，ip ×4）動物腫瘤體積平均為765 mm3，腫瘤體積抑制率為54.59％。鼠抗hMIC-1單克隆抗體高劑量組實驗結(jié)束時腫瘤體積與荷瘤模型對照組比較差異極顯著P＜0.01。對人胰腺癌SW1990實驗，鼠抗hMIC-1單克隆抗體組（10 mg/kg，Biw，iv×8）動物腫瘤體積平均為1045 mm3，腫瘤體積抑制率為39.83％。荷瘤模型對照組動物腫瘤體積平均為1737 mm3，鍵擇腹腔給藥組（Gem 50 mg/kg，qw，ip ×4）動物腫瘤體積平均為881 mm3，腫瘤體積抑制率為49.28％。鼠抗hMIC-1單克隆抗體高劑量組實驗結(jié)束時腫瘤體積與荷瘤模型對照組比較差異顯著P＜0.05。

2.3 實驗結(jié)束后PANC-1移植瘤組織病理形態(tài)學(xué)觀察

實驗結(jié)束后，進(jìn)行移植瘤組織病理學(xué)檢查，光鏡下可見荷瘤模型對照組癌組織，腫瘤細(xì)胞結(jié)構(gòu)清楚，細(xì)胞完整，癌細(xì)胞圓形或橢圓形，核大，核仁明顯，細(xì)胞大小不等，癌細(xì)胞被纖維組織分隔成大小不等的癌巢，其中可見腺管、腺腔樣結(jié)構(gòu)。鼠抗人hMIC-1單克隆抗體組可見腫瘤細(xì)胞被破壞，光鏡下可見有大量淋巴細(xì)胞浸潤，腫瘤細(xì)胞明顯壞死，細(xì)胞溶解。表明鼠人抗hMIC-1單克隆抗體對腫瘤細(xì)胞具有明顯抑制作用（圖3）。

3 討論

巨噬細(xì)胞抑制因子MIC-1（又稱GDF-15，NAG-1，PDF，PLAB，PTGFB）是分泌型細(xì)胞因子，含有保守的7個半胱氨酸結(jié)構(gòu)域。MIC-1在合成過程中先裝配成前體蛋白，然后剪切加工成25×103二聚體蛋白。MIC-1基因定位于人染色體 19p13.2-p13.1，共編碼308個氨基酸，包括29個氨基酸信號肽、167個氨基酸的前肽及112個氨基酸成熟蛋白多肽鏈。在探索腫瘤分子水平改變過程中，研究發(fā)現(xiàn)許多腫瘤存在MIC-I基因表達(dá)，MIC-1的表達(dá)水平的升高與腫瘤及機(jī)體分化和發(fā)育有密切關(guān)系［4-6］。在前列腺癌和結(jié)腸癌標(biāo)本中均檢測到MIC-1表達(dá)水平明顯高于對應(yīng)的正常組織，在胰腺癌、黑色素瘤和甲狀腺癌細(xì)胞株分泌大量的MIC-1蛋白。在多種上皮腫瘤細(xì)胞系中，MIC-I能夠被多種抗癌藥物誘導(dǎo)表達(dá)上調(diào)，上調(diào)表達(dá)的MIC一1能夠促進(jìn)P21表達(dá)，使細(xì)胞停止在G1期，促進(jìn)細(xì)胞凋亡［7-8］。研究表明人MIC一1表面至少存在五個特異的抗原表位，針對位于N端的表位1（1-13氨基酸）的抗體是唯一能用于ELISA試劑盒的單抗，而表位2和表位5是受體結(jié)合位點，是功能抗體潛在的抗原表位，外源加入針對表位5的抗體能夠抑制癌細(xì)胞的生長。

鼠抗體對靶抗原具有特異性，但它不能激活相應(yīng)人效應(yīng)系統(tǒng)，抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒作用（ADCC）、補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒作用（CDC）等，鼠抗體作為外源蛋白進(jìn)入人體，會使人體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生應(yīng)答，即產(chǎn)生人抗鼠抗體（human anti-mouse antibody，HAMA），而且異源蛋白在人體內(nèi)很快被清除，半壽期較短，因此，作為治療性抗體要進(jìn)行人源化抗體改造。人源化抗體包括嵌合抗體、改型抗體和全人源化抗體等，人源化抗體可以減少異源抗體對人類機(jī)體造成的免疫副反應(yīng)。用DNA重組技術(shù)和抗體庫技術(shù)可使鼠源性單克隆抗體進(jìn)行人源化改造。人源化抗體減少了異源性抗體免疫原性，同時保留了親本抗體特異性結(jié)合抗原能力，明顯降低由鼠源單克隆抗體所致的人抗鼠抗體反應(yīng)，鼠抗人MIC-l單克隆抗體人源化改造工作正在科室探索。

防止腫瘤中血管生成是阻止腫瘤生長的方法之一［9］，VEGF蛋白被認(rèn)為是血管形成的靶蛋白，然而，靶向作用于VEGF蛋白在黑色素瘤病人中并不能防止腫瘤生長。研究人員在美國病理學(xué)雜志中報道，與沒有腫瘤的人相比，在67％的黑色素瘤病人中MIC-1蛋白的含量水平要高出5～6倍。研究人員找尋血管形成的其他蛋白時發(fā)現(xiàn)MIC-1是血管形成這一過程調(diào)控者，MIC-1蛋白可以促進(jìn)腫瘤中血管的產(chǎn)生，通過靶蛋白MIC-1可以阻止高侵襲力和致死性黑色素瘤生長，在病人的血中消除MIC-1可以用于防止腫瘤血管形成使腫瘤組織缺少細(xì)胞營養(yǎng)和無法移除細(xì)胞產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物使腫瘤死亡。靶向作用于MIC-1，在動物和人組織樣本中使MIC-1蛋白的水平下降300％～400％，防止了血管的形成和減少了腫瘤的發(fā)展約300％［10-15］。腫瘤細(xì)胞通過分泌蛋白作用于腫瘤周圍的血管在原血管上引起新的血管形成，這些新血管長入腫瘤細(xì)胞中提供營養(yǎng)并帶走代謝產(chǎn)物，血管的形成導(dǎo)致形成了功能完善的血管結(jié)構(gòu)，提供其需要的營養(yǎng)和帶走細(xì)胞代謝產(chǎn)物，使腫瘤得以生長。因此，使MIC-1降低的藥物可能是有效治療腫瘤重要武器的一部分。1895年，Hericourt和Richet［16］將癌細(xì)胞注入動物體內(nèi)，用產(chǎn)生的抗血清治療癌癥病人，發(fā)現(xiàn)病人癥狀得到明顯改善，從此開始將抗體治療應(yīng)用于臨床的研究?；蚬こ碳夹g(shù)的發(fā)展，抗體基因結(jié)構(gòu)的闡明，DNA重組技術(shù)應(yīng)用促進(jìn)治療性抗體的發(fā)展，MIC-l單克隆抗體有可能在臨床具有診斷價值及腫瘤治療的作用?？剖仪捌谟脽晒鈽?biāo)記MIC-l單克隆抗體對荷瘤裸鼠作用后，用小動物活體成像觀察及取荷瘤裸鼠皮下瘤做免疫組化CD31觀察，結(jié)果顯示MIC-l單克隆抗體主要聚集在腫瘤區(qū)域，腫瘤組織內(nèi)新生血管和微血管密度與腫瘤模型對照組比較明顯減少，提示MIC-l單克隆抗體對腫瘤的新生血管形成具有抑制作用，且具有一定的靶向性。

由于胰腺癌早期癥狀不典型，絕大多數(shù)患者就診時已屬中晚期，手術(shù)切除是唯一可以治愈的機(jī)會，但是，胰腺解剖結(jié)構(gòu)復(fù)雜，手術(shù)切除率低，即使根治性手術(shù)也很難完全切凈腫瘤，術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率高，而復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移缺乏有效的監(jiān)測手段，缺乏有效的治療措施，因而預(yù)后極差，死亡率為惡性腫瘤之首。本實驗Balb/c荷瘤裸鼠尾靜脈內(nèi)注射鼠抗人hMIC-l單克隆抗體（10 mg/kg，Biw，ip×8）共4周或（2 mg/kg，Biw，ip×8）共4周，動物無死亡，在實驗期內(nèi)動物的飲食，二便，步態(tài)等均未見異常，所有實驗動物活動自如，實驗結(jié)束時與模型對照組比較，體重?zé)o明顯差異，體重增加，未表現(xiàn)毒性反應(yīng)。實驗結(jié)束后脫頸椎處死小鼠，實驗組動物進(jìn)行尸解，肉眼觀察心、肝、脾、肺、胃、小腸、腎等未見異常改變，未顯示抗體毒性反應(yīng)。實驗初步顯示鼠抗人hMIC-l單克隆抗體可抑制裸鼠移植人胰腺癌的生長為MIC-l的應(yīng)用研究提供了新思路。

［1］Bauskin AR，Valenzuela SM，Moore AG，et al.MIC-1，a novel macrophage inhibitory cytokine，is a divergent member of the TGF-beta superfamily［J］.Proc Natl Acad Sci US A，1997，94 （21）：11514-11519.

［2］Fairlie WD，Moore AG，Bauskin AR，et al.MIC-1 is a novel TGF-bcta superfamily cytokine associated with macrophage activation［J］.JLeukoc，1999，65（1）：2-5.

［3］FairlieWD，Zhang HP，Wu Wm，et al.The propeptide of the transforming growth factor-beta superfamily member，macrophage inhibitory cytokine-1（MIC-1），is a multifunctional domain that call facilitate protein folding and secretion［J］.J Biol Chem，2001，276（20）：16911-16918.

［4］Welsh JB，Sapinoso LM，Kern SG，etal.Large-scale delineation of secreted protein biomarkers overexpressed in cancer tissue and serum［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，2003，100（6）：3410 -3415.

［5］Kim JS，Baek SJ，Sali T，et al.The conventional nonsteroidal anti·inflammatory drug sulindac sulfide arrests ovarian catncer cell growth via the expression of NAG-1/MIC-1/GDF-15［J］.Mol Cancer Ther，2005，4（3）：487-93.

［6］Killan D，Chen SJ，Johansson SL，etal.Dysregulated expression ofMIC-1/PDF in human prostate tumor cells［J］. Biochem Biophys Res Commum，2003，30（50）：598-604.

［7］Yamaguchi KLee SH，Eling TE，Back SJ.A novel peroxisome prolifemtor-activated receptor gamma ligand，MCC-555，induces apoptosis via posttranscriptional regulation of NAG-1 in colorectal cancer cells［J］.Mol Cancer Ther，2006，5（5）：1352-1361.

［8］S.J.Huh，C.-Y.Chung，A.Sharma，G.P.Robertson.Macrophage Inhibitory Cytokine-1 Regulates Melanoma Vascular Development［J］.American Journal Of Pathology，2010，176 （6）：2948-2952.

［9］翟羽，侯潔，蔡月花.地塞米松對小鼠H22腫瘤生長及血管生成的抑制作用［J］.中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2004，14（1）：16 -19.

［10］M.Mimeault，S.K.Batra.Divergent molecular mechanisms underlying the pleiotropic functions of macrophage inhibitory cytokine-1 in cancer［J］.JCell Physiol，2010，224（3）：626-635.

［11］SSenapati，SRachagani，K Chaudhary，etal.Overexpression of macrophage inhibitory cytokine-1 induces metastasis of human prostate cancer cells through the FAK-RhoA signaling pathway［J］.Oncogene，2010，29（9）：1293-1302.

［12］Boyle GM，Pedley J，Martyn AC，et al.Macrophage inhibitory cytokine-1 is overexpressed in malignantmelanoma and is associated with tumorigenicity［J］.J Invest Dermatol，2009，129（3）：383-391.

［13］Khaled YS，Elkord E，Ammori BJ.Macrophage inhibitory cytokine-1：a review of its pleiotropic actions in cancer［J］.Cancer Biomark，2012，11（5）：183-190.

［14］Mimeault M，Batra SK.Novel biomarkers and therapeutic targets for optimizing the therapeutic management of melanomas［J］.World JClin Oncol，2012，3（3）：32-42.

［15］Yamashita T，Yoneta A，Hida T.Macrophage inhibitory cytokine-1：a new player inmelanoma development［J］.J Invest Dermatol，2009，129（2）：262-264.

［16］Drews J.Drug discovery：a historical perspective［J］.JScience，2000，287（5460）：1960-1964.

Effective of anticancer mousemonoclonal antibody against hM IC-1 targets pancreatic tumor for nudem ice in vivo

LIU Zhao-yang，WANG Xiao-bing，ZHANGWei
（Cancer Institute，Chinese Academy of Medical Sciences Peking Union Medical College，Beijing 100021，China）

Objective To investigate a antitumor effects ofmouse originalmonoclonal antibody against hMIC-1 as intravenous administration with human pancreatic tumor in vivo and providing experimental data.M ethods The fourtyeightmice were randomized into eightgroups for loaded with two pancreatic tumor cell lines panc-1 or sw1990 respectively，and individual tumor growth was observed，antitumor efficacy was evaluated after usingmouse originalmonoclonal antibody against hMIC-1 by intravenous administration.The pathological change with formalin fixed，paraffin embedded tissues section was viewed.Results There was a significant difference in tumor volume and weigt in intravenous injection of mouse originalmonoclonal antibody against hMIC-1 on load pancreatic tumor with nudemice group compared with that inthe control group after four week treatment，and the mouse original monoclonal antibody against hMIC-1 demonstrated a close association between inhibition of tumor volume growth and dose-effective in the two xenograftmodels examined.Under examined microscope，the pancreatic tumor tissue was destroyed evidently in mouse originalmonoclonal antibody against hMIC-1 group.Conclusions The antitumor effect of intravenous injection formouse originalmonoclonal antibody against hMIC-1 is better than that of systemic using gemcitabine.

Mouse originalmonoclonal antibody against hMIC-1；Pancreatic tumor；PANC-1；SW1990；Inhibitive tumor action；In vivo

R73 R332

A

1671-7856（2014）03-0014-06

10.3969.j.issn.1671.7856.2014.003.004

國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃‘863’資助項目（2007AA027485）。

劉朝陽，男，副主任技師，學(xué)士，研究方向：腫瘤藥理、腫瘤分子藥理及腫瘤分子生物學(xué)，抗腫瘤藥物研究。E-mail：Liuzhy118@ 163.com。

張偉，男，研究員，研究生導(dǎo)師，研究方向：腫瘤分子標(biāo)志物，腫瘤分子細(xì)胞生物學(xué)，基因工程藥物研究。E-mail：LiyDoctor@126.com；zhangww1954@126.com。

2013-12-30