慢性乙型肝炎患者腸源性內(nèi)毒素血癥中免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子表達(dá)變化的研究

王建紅　李紅　趙龍鳳

【摘要】 目的：研究慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）患者腸源性內(nèi)毒素血癥（intestinal endotoxemia，IETM）中與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cells，Treg）、Th17細(xì)胞相關(guān)免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的表達(dá)變化。方法：應(yīng)用ELISA法分別對(duì)80例CHB患者和20例健康對(duì)照者的血漿IL-10、TGF-β、IL-6、IL-17、IL-23及內(nèi)毒素水平進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)測(cè)定的內(nèi)毒素水平，將CHB患者分為內(nèi)毒素陽(yáng)性組和內(nèi)毒素陰性組。結(jié)果：CHB患者血漿IL-10、TGF-β、IL-6、IL-17、IL-23水平均明顯高于健康對(duì)照組（Z值分別為5.265、6.859、6.894、5.028、6.877，均P<0.01）。內(nèi)毒素陽(yáng)性組患者明顯高于內(nèi)毒素陰性組和健康對(duì)照組（H值分別為45.833、48.423、48.984、75.184、75.814，均P<0.01）。結(jié)論：CHB患者IETM時(shí)血漿中與Treg、Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子水平進(jìn)一步增高。

【關(guān)鍵詞】 乙型肝炎； 慢性； 腸源性內(nèi)毒素血癥； 細(xì)胞因子

Change of Immunological Cytokines Expression in Chronic Hepatitis B Patients with Intestinal Endotoxemia/WANG Jian-hong，LI Hong，ZHAO Long-feng.//Medical Innovation of China，2014，11（12）：020-022

【Abstract】 Objective：To investigate the change of the Treg/Th17-related cytokines in chronic hepatitis B patients with intestinal endotoxemia.Method：The serum levels of Treg/Th17-related cytokines and endotoxin（ET）in 80 patients with chronic hepatitis B（CHB） and 20 healthy controls（NC） were measured by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）.According to serum ET levels，all CHB patients were divided into two groups： ET positive and ET negative.Result：Compared to NC，the serum concentration of IL-10，TGF-β，IL-6，IL-17，IL-23 were all significantly increased in CHB patient groups（Z=5.265，6.859，6.894，5.028，6.877，all P<0.01）.The levels of IL-10，TGF-β，IL-6，IL-17，IL-23 in ET positive group were significantly higher than ET negative group and NC（H=45.833，48.423，48.984，75.184，75.814，all P<0.01）.Conclusion：The Treg/Th17-related cytokines were increased in CHB patients with intestinal endotoxemia.

【Key words】 Hepatitis B； Chronic； Intestinal endotoxemia； Cytokines

First-authors address：Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2014.12.007

乙型肝炎病毒（HBV）是一種在世界范圍廣泛流行、嚴(yán)重危害人類健康的傳染病[1]。HBV感染后致肝臟損害主要由機(jī)體對(duì)HBV免疫應(yīng)答介導(dǎo)[2]。目前，HBV感染后慢性化進(jìn)程中免疫應(yīng)答的確切機(jī)制還不清楚，但可以肯定的是細(xì)胞免疫在其中起重要作用。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cells，Treg）、Th17細(xì)胞是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的兩類免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，兩者密切相關(guān)，來(lái)源與同一初始CD4+ T淋巴細(xì)胞群，在分化和功能上既相互聯(lián)系，又相互制約[3]。Treg/Th17細(xì)胞失衡可導(dǎo)致多種慢性感染性疾病、自身免疫疾病及腫瘤等的發(fā)生、發(fā)展。已有研究報(bào)道，慢性乙型肝炎（CHB）患者體內(nèi)亦存在Treg/Th17失衡，參與HBV感染慢性化的進(jìn)程[4-5]。筆者前期研究發(fā)現(xiàn)，CHB患者體內(nèi)長(zhǎng)期持續(xù)患有腸源性內(nèi)毒素血癥（intestinal endotoxemia，IETM）時(shí)可以導(dǎo)致機(jī)體的免疫功能低下，造成HBV難以清除[6]。那IETM與Treg/Th17平衡關(guān)系如何呢？本研究通過(guò)檢測(cè)內(nèi)毒素水平，將CHB患者分為內(nèi)毒素陽(yáng)性組和內(nèi)毒素陰性組，通過(guò)比較兩組患者外周血Treg、Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的的水平，間接探討IETM中CHB患者外周血Treg/Th17平衡的改變。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年2月-2013年11月在本院住院的80例CHB患者，其中男58例，女22例，年齡18～69歲，平均（30±6）歲。CHB患者診斷均符合《慢性乙型肝炎防治指南》（2010年版）[7]，近半年均未服用過(guò)抗病毒及免疫調(diào)節(jié)劑藥物，排除其他肝炎病毒感染及其他原因引起的肝損害。同時(shí)選取20例健康對(duì)照者，男14例，女6例，年齡20～55歲，平均（25±9）歲，肝功能正常，HBV血清學(xué)標(biāo)志物陰性。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意，所有患者均簽署知情同意書。兩組研究對(duì)象一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 檢測(cè)方法 抽取受試對(duì)象晨間空腹靜脈血1 mL，離心分離血清，-20 ℃保存。待所有樣本收集完全后，取凍存血清，ELISA雙抗體夾心法檢測(cè)血漿IL-10、TGF-β、IL-6、IL-17、IL-23及內(nèi)毒素水平。根據(jù)檢測(cè)的內(nèi)毒素水平，將CHB患者分為內(nèi)毒素陽(yáng)性組和陰性組，內(nèi)毒素陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)為健康者內(nèi)毒素水平95%可信區(qū)間的上限值36.68 pg/mL，>36.68 pg/mL為內(nèi)毒素陽(yáng)性組，≤36.68 pg/mL為內(nèi)毒素陰性組。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示；采用兩個(gè)樣本比較的Mann-Whitney U檢驗(yàn)或多個(gè)獨(dú)立樣本比較的Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)；以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 健康者與CHB患者內(nèi)毒素、IL-10、TGF-β水平的比較 80例CHB患者中，45例發(fā)生IETM，占56.25%。內(nèi)毒素陽(yáng)性組與陰性組的年齡、性別比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與健康者比較，CHB患者內(nèi)毒素水平明顯升高（P<0.01），且IL-10、TGF-β水平均明顯升高（Z值分別為5.265、6.859）。內(nèi)毒素陽(yáng)性組IL-10、TGF-β水平均較陰性組升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），見表1。

2.2 健康者與CHB患者IL-6、IL-17、IL-23水平的比較 與健康者比較，CHB患者IL-6、IL-17、IL-23水平均明顯升高（Z值分別為6.894、5.028、6.877）。內(nèi)毒素陽(yáng)性組IL-6、IL-17、 IL-23水平均較陰性組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），見表2。

3 討論

TGF-β不僅是Treg分泌的發(fā)揮抑制作用的主要細(xì)胞因子，體外研究還表明相對(duì)較低濃度的TGF-β主要促進(jìn)Th17細(xì)胞的分化，而高濃度的TGF-β則主要促進(jìn)Treg的分化而抑制Th17細(xì)胞的分化[8]。IL-10是Treg分泌的另一主要細(xì)胞因子，它可調(diào)控IL-12的產(chǎn)生，進(jìn)而抑制Th1型細(xì)胞免疫反應(yīng)[3]。有研究表明，CHB患者血漿TGF-β、IL-10水平明顯升高，且與病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)[3]。本研究發(fā)現(xiàn)與健康對(duì)照組比較，CHB患者TGF-β、IL-10水平亦均明顯升高，按內(nèi)毒素水平分組后，內(nèi)毒素陽(yáng)性組二者均明顯高于內(nèi)毒素陰性組，初步提示內(nèi)毒素可影響CHB患者TGF-β、IL-10的表達(dá)水平，二者可能參與了IETM的病變過(guò)程。

IL-6聯(lián)合TGF-β可促進(jìn)轉(zhuǎn)錄因子RORt的表達(dá)和STA-T3通路的活化，從而可誘導(dǎo)Th17細(xì)胞的分化與增殖[9]。在關(guān)于糖尿病的研究中發(fā)現(xiàn)，IL-6不僅可誘導(dǎo)Th17細(xì)胞的分化與增值，且可以抑制Treg的分化，使Treg/Th17平衡向Th17方向偏移[10]。IL-23屬于IL-12家族，主要由mDC細(xì)胞分泌，是維持Th17細(xì)胞分化及功能發(fā)揮的細(xì)胞因子，IL-23缺乏使其存活及增殖受限[11]。IL-17是Th7細(xì)胞分泌的主要致炎性細(xì)胞因子，可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞等分泌IL-6、IL-8、前列腺素E2，增強(qiáng)TNF-α的功能及細(xì)胞間黏附分子的表達(dá)，在炎癥性疾病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用[12]。IL-23/IL-17信號(hào)通路參與多種炎性疾病，有研究發(fā)現(xiàn)慢性乙型肝炎的病變中亦有IL-23/IL-17信號(hào)通路的參與[13]。本發(fā)現(xiàn)與健康對(duì)照組比較，CHB患者血漿IL-6、IL-23、IL-17水平均明顯升高，按內(nèi)毒素水平分組后，內(nèi)毒素陽(yáng)性組三者均明顯高于內(nèi)毒素陰性組，初步提示CHB患者IETM時(shí)IL-6、IL-23、IL-17的表達(dá)水平亦發(fā)生了變化，它們亦可能參與了IETM的病理生理過(guò)程。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)，CHB患者IETM時(shí)與Treg、Th17細(xì)胞密切相關(guān)的細(xì)胞因子表達(dá)均升高，初步提示Treg、Th17細(xì)胞可能都參與了IETM的病變過(guò)程，下一步筆者將直接研究CHB患者IETM時(shí)外周血Treg、Th17細(xì)胞表達(dá)的變化，為通過(guò)降低內(nèi)毒素水平來(lái)改善CHB患者病情提供免疫治療方面的新視角。

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（收稿日期：2014-01-16） （本文編輯：歐麗）

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（收稿日期：2014-01-16） （本文編輯：歐麗）