慢性應(yīng)激對大鼠血清活性腎素與血管緊張素Ⅱ的影響及電針的干預(yù)作用*

宋洪濤 姚海江 莫雨平 唐銀杉 許安萍 楊 娟 賽音朝克圖 李志剛△

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，北京 100029；2.內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010065）

慢性應(yīng)激對大鼠血清活性腎素與血管緊張素Ⅱ的影響及電針的干預(yù)作用*

宋洪濤1姚海江1莫雨平1唐銀杉1許安萍1楊 娟1賽音朝克圖2李志剛1△

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，北京 100029；2.內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010065）

目的觀察慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠血清活性腎素與血管緊張素Ⅱ的變化以及電針的干預(yù)作用，探討腎素-血管緊張素系統(tǒng)在抑郁病與心血管疾病之間的關(guān)聯(lián)。方法采用慢性應(yīng)激刺激結(jié)合孤養(yǎng)的方式建立大鼠慢性應(yīng)激抑郁模型，分組后分別采用電針、氟西汀治療21 d，通過敞箱試驗觀察大鼠的行為學(xué)變化；采用ELISA檢測各組大鼠血清活性腎素和血管緊張素Ⅱ水平。結(jié)果模型組大鼠敞箱試驗水平運(yùn)動得分和垂直運(yùn)動得分明顯降低，電針和氟西汀可逆轉(zhuǎn)此變化；模型組大鼠血清中活性腎素水平和血管緊張素Ⅱ的水平升高，電針和氟西汀均可降低兩者的變化。結(jié)論慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠的循環(huán)RAS系統(tǒng)被過度激活，電針和氟西汀可降低其激活程度。

抑郁電針腎素-血管緊張素系統(tǒng)活性腎素大鼠

1 材料與方法

1.1 動物與分組雄性SD大鼠，清潔級，體質(zhì)量（200±10）g，購于北京維通利華實(shí)驗動物技術(shù)有限公司，合格證號：SCXK（京）2012-0001。實(shí)驗前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后進(jìn)行初步篩選，將水平活動大于120次或小于30次的予以剔除，剩余28只大鼠隨機(jī)分為4組，空白組、模型組、氟西汀組、電針組，每組7只。

1.2 儀器與試劑MULTISKAN EX PRIMARY EIA V 2.3酶標(biāo)儀（美國）。大鼠血管緊張素Ⅱ酶聯(lián)免疫試劑盒購于武漢華美生物工程有限公司；大鼠活性腎素酶聯(lián)免疫試劑盒購于上海研謹(jǐn)生物科技有限公司。LH202型韓氏穴位神經(jīng)刺激儀（北京大學(xué)神經(jīng)科學(xué)研究所監(jiān)制，北京華衛(wèi)產(chǎn)業(yè)開發(fā)公司生產(chǎn)）。

1.3 模型制備采用慢性不可預(yù)知性溫和應(yīng)激模型結(jié)合孤養(yǎng)的方式進(jìn)行造模，隨機(jī)接受21 d 7種不同的應(yīng)激刺激，平均每種刺激給予3次。包括冷水游泳（4℃，5min）、晝夜顛倒（24 h）、禁食（24 h）、夾尾（距尾尖2 cm，3min）、禁水（24 h）、電擊足底（30 V，每次持續(xù)5 s）、潮濕飼養(yǎng)（將200mL水加入有鋸末的籠底，24 h）。

1.4 干預(yù)方法空白組：不給予任何處理。模型組：每日給予慢性應(yīng)激刺激結(jié)合孤養(yǎng)。電針組：每天給予慢性應(yīng)激刺激結(jié)合孤養(yǎng)，參照全國針灸學(xué)會實(shí)驗針灸研究會制定的《實(shí)驗動物針灸穴位圖譜》選取相當(dāng)于人體解剖部位的百會穴和印堂穴，用華佗牌0.30mm×13mm毫針進(jìn)行針刺，針柄接韓氏LH202型電針儀，于每日進(jìn)行應(yīng)激刺激前1 h進(jìn)行電針，平刺進(jìn)針，進(jìn)針深度為0.5～1 cm，電針頻率為2 Hz，電流強(qiáng)度為1mA，每次20min，每日1次。氟西汀組：每天給予慢性應(yīng)激刺激結(jié)合孤養(yǎng)，將鹽酸氟西汀以生理鹽水配制成1mg/mL質(zhì)量濃度，按照2mg/kg體質(zhì)量，灌胃給藥，每日1次。

1.5 行為學(xué)檢測行為學(xué)檢測采用敞箱試驗（openield test），底面為80 cm×80 cm×40 cm敞箱，內(nèi)側(cè)周壁及底面均為黑色，底面用白線劃分為面積相等的25個等邊方格，周圍高40 cm。將大鼠置于中心方格內(nèi)，實(shí)驗者距離大鼠1m以外，觀察大鼠5min內(nèi)穿越格數(shù)（4爪均進(jìn)入的方格方可記數(shù)）記為水平運(yùn)動次數(shù)，后肢直立次數(shù)（2前爪騰空或攀附墻壁）記為垂直運(yùn)動次數(shù)。每只動物實(shí)驗完成后徹底清洗敞箱內(nèi)壁及底面，再進(jìn)行下1只實(shí)驗。

1.6 標(biāo)本采集與檢測應(yīng)激21 d結(jié)束后，斷頭處死大鼠，取血5mL，在4℃，3000 r/min的條件下，離心15 min，-20℃保存待測。采用ELISA檢測大鼠血清活性腎素和血管緊張素Ⅱ水平。嚴(yán)格按照試劑盒說明操作。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。數(shù)據(jù)以（±s）表示，組間差異采用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠敞箱試驗結(jié)果比較見圖1。圖1示大鼠應(yīng)激前活動度水平相同（P＞0.05），應(yīng)激刺激21 d后模型組水平運(yùn)動及垂直運(yùn)動均明顯減少，與空白組比較，水平運(yùn)動及垂直運(yùn)動均有顯著差異，說明造模成功（P＜0.05或0.01）。與模型組比較，氟西汀組與電針組明顯升高（P＜0.05或0.01），說明氟西汀和電針均具有抗抑郁作用。

2.2 各組大鼠血清活性腎素和血管緊張素Ⅱ的含量比較見表1。結(jié)果示與空白組比較，模型組大鼠血清中活性腎素水平升高（P＜0.01）；與模型組比較，氟西汀組和電針組大鼠血清中活性腎素水平明顯下降（P＜0.01）；與空白組比較，模型組大鼠血清中血管緊張素Ⅱ的水平升高（P＜0.05）；與模型組比較，氟西汀組和電針組大鼠血清中血管緊張素Ⅱ水平明顯下降（P＜0.05）；模型組與電針組的大鼠血清活性腎素水平和血管緊張素Ⅱ水平均無顯著差異（P＞0.05）。

圖1 各組大鼠敞箱試驗水平及垂直運(yùn)動次數(shù)比較（±s，n=7）

表1 各組大鼠血清活性腎素和血管緊張素Ⅱ水平比較（±s）

表1 各組大鼠血清活性腎素和血管緊張素Ⅱ水平比較（±s）

組別n活性腎素血管緊張素Ⅱ空白組7 646.92±69.12 2.71±1.82模型組7 968.18±51.52**6.78±4.51*氟西汀組7 684.27±67.53△△3.25±1.81△電針組7 744.88±58.12△△3.73±2.26△

3 討論

RAS是一種類似的下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)和交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)的應(yīng)激激素反應(yīng)系統(tǒng)。RAS主要包括各種酶（腎素、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶、糜蛋白酶和氨基肽酶）、血管緊張素肽段、受體等。在血中，腎素有非活性和活性腎素兩種存在方式。體內(nèi)循環(huán)中多達(dá)90％的腎素以非活性方式存在。然而，只有活性腎素能夠酶解血管緊張素原為血管緊張素Ⅰ，進(jìn)而產(chǎn)生具有活性的血管緊張素Ⅱ。血管緊張素Ⅱ被認(rèn)為是RAS的核心成分，通過與其特異的血管緊張素1型（AT1）受體結(jié)合，發(fā)揮多種生物學(xué)效應(yīng)，包括強(qiáng)大的收縮血管、升高血壓、促進(jìn)心肌肥大、成纖維細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞增殖等作用。但是，如果血管緊張素Ⅱ產(chǎn)生過多，作用時間過長，會引起心血管組織細(xì)胞的損傷，最終導(dǎo)致動脈粥樣硬化、高血壓和心力衰竭等多種心血管疾病的發(fā)生發(fā)展［2］。

近年有報道表明，AngⅡ與抑郁、焦慮和認(rèn)知功能有著密切的關(guān)系［3-7］。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為抑郁癥的主要病機(jī)是髓海虧虛、神機(jī)紊亂、臟腑陰陽氣血失調(diào)。印堂、百會為督脈穴位，督脈是諸陽經(jīng)脈之總會，對整個經(jīng)脈系統(tǒng)有統(tǒng)帥作用，與腦、脊髓等關(guān)系相當(dāng)密切，歷代醫(yī)家素有“病變在腦，首取督脈”之說。此兩穴位于頭部，符合針灸治療的“經(jīng)脈所過，主治所及”的取穴原則。另外，此二穴為臨床治療抑郁癥主穴，能調(diào)節(jié)髓海機(jī)能，使其紊亂的神機(jī)恢復(fù)正常，具有抗抑郁效果［8-11］。

本研究結(jié)果顯示，與空白組比較，模型組大鼠血清中活性腎素水平升高，模型組大鼠血清中血管緊張素Ⅱ的水平亦升高，這與臨床報道的抑郁患者血液血管緊張素Ⅱ水平升高的結(jié)果一致，大鼠在慢性應(yīng)激刺激下，循環(huán)RAS出現(xiàn)過度激活。

與模型組比較，氟西汀組和電針組大鼠血清中活性腎素及血管緊張素Ⅱ水平明顯下降，針刺大鼠印堂、百會，可以調(diào)整過度激活的RAS系統(tǒng)，活性腎素和血管緊張素Ⅱ水平下降，其可能與其電針發(fā)揮抗抑郁作用，減少對大鼠機(jī)體刺激，降低了循環(huán)RAS系統(tǒng)的過度激活有關(guān)。

慢性不可預(yù)知性溫和應(yīng)激模型結(jié)合孤養(yǎng)是國內(nèi)外公認(rèn)的復(fù)制抑郁模型大鼠的方式，本實(shí)驗結(jié)果顯示，抑郁模型大鼠的循環(huán)RAS系統(tǒng)被過度激活。近年大量的臨床及實(shí)驗室資料支持RAS與心血管疾病有關(guān)系，因此可以推斷，抑郁病與心血管疾病之間，RAS系統(tǒng)的過度激活發(fā)揮著重要的作用，具體的作用機(jī)制還有待深入研究。

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Effect of Chronic Stress Depression in Serum Active Renin and AngiotensinⅡand Effect of electro-

acupuncture in it

SONG Hong-tao，YAO Hai-jiang，MO Yu-ping，et al.School of Acupuncture-moxibustion and Tuina，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China

Objective：To observe the changes of serum active renin and AngiotensinⅡin chronicity stress depression model rat and the interference of electroacupuncture to them so as to explore the function of the reninangiotensin system between depression and cardiovascular disease.Methods：The chronic unpredictable mild stress combined with solitarily feedingmethod was used tomake the depression model.The locomotor activity of rats in blank control group，model control group，electro-acupuncture group and fluoxetine group were observed by open-field experiment.Serum active renin and AngⅡlevelswere determined by using enzyme-linked immunoabsorbent assay.Results：The cross and rear scores of the model group were significantly lower than those of the blank group，while electro-acupuncture and fluoxetine reversed it.Levels of active renin and AngⅡin serum in model group were higher than those in the control group.Electro-acupuncture and fluoxetine were obvious to improve those pathological changes.Conclusion：Circulatory pisma RASare activated excessive in chronicity stress depressionmodel rats.The electro-acupuncture and fluoxetine can improve those pathological changes.

Depression；Electro-acupuncture；RAS；Serum Active Renin；Rat腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）在維持血壓、水和電解質(zhì)平衡及心血管系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要的作用，對心血管系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展至關(guān)重要［1］。本研究觀察慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠血清活性腎素與血管緊張素Ⅱ的變化以及電針的干預(yù)作用，探討RAS在抑郁病與心血管疾病之間的關(guān)聯(lián)。

R285.5

A

1004-745X（2014）01-0001-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2014.01.001

國家自然科學(xué)基金資助課題（81072860）

△通信作者

2013-09-16）