酮病復(fù)方制劑對奶牛酮病抗氧化性能的影響研究

摘要

[目的]研發(fā)治療奶牛酮病的新方法、新藥物，從抗氧化性能方面揭示廣西大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院臨床實(shí)驗(yàn)室自主研發(fā)的酮病治療復(fù)方制劑—— “酮康”對奶牛酮病的療效。[方法]2013年6月，采用改良水楊醛比色法檢測廣西南寧某規(guī)模化奶牛場圍產(chǎn)期奶牛46頭，其中9頭為酮病牛，并將其分為治療組（6頭）和陽性對照組（3頭），另從37頭中選取6頭與治療組奶牛體況相似、胎次相近、產(chǎn)奶量接近的奶牛作為健康對照組。試驗(yàn)期間，治療組每天灌服“酮康”400 ml，連續(xù)治療5 d，陽性對照組、健康對照組均不灌服。分別采血檢測試驗(yàn)前后奶牛各抗氧化酶活性（CAT、GPX、MDA、SOD、TAC、VE）。[結(jié)果]治療后治療組奶牛血酮含量明顯降低，血糖明顯上升，SOD和GPX的活性明顯升高，差異極顯著（P<0.01）。CAT活性明顯低于對照組，差異顯著（P<0.01）。MDA含量稍有下降，差異不顯著（P>0.05），雖稍低于健康對照組和陽性對照組，但差異也不顯著（P>0.05）。VE含量明顯低于健康對照組，差異極顯著（P<0.01），而對照組治療后VE含量均比治療前高。治療組在治療后TAC和CAT活性均低于陽性對照組，差異極顯著（P<0.01）[結(jié)論]“酮康”對降低酮病奶牛的血酮含量、提高血糖含量和改善抗氧化性能的作用明顯，效果良好。若不進(jìn)行治療和科學(xué)的飼養(yǎng)管理 ，酮病將持續(xù)傷害奶牛。

關(guān)鍵詞奶牛酮??；治療；抗氧化

中圖分類號S823文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號0517-6611（2014）28-09783-03

Effects of Ketosis Compound Preparations on Oxidation Resistance in Ketosis Cows

SU Xiaoqi， HUANG Yunfei， NGUYEN Thithanhhai， HE Baoxiang* et al

（College of Animal Science and Technology， Guangxi University， Nanning， Guangxi 530005）

Abstract[Objective] To find new methods and new medicine in the treatment of ketosis， reveal the compound preparation Tongkangs treatment effect， which was developed by clinical laboratory of College of Animal Science and Technology of Guangxi University. [Method] In June 2013， to detect the ketosis of 46 perinatal cows which came from a largescale dairy farm in Guangxi Nanning by the method of Salicylaldehyde Colorimetry， result by 9 cows were diagnosed ketosis ， and 6 cows were divided into the treatment group， 3 cows were divided into the positive controls， 6 cows were selected from 37 cows left as healthy control which conditions， tire time， milk production were similar to the treatment group. During the test， the treatment group was filled Tongkang 400 ml every day and five days in a row， positive controls and healthy controls were not filled. Antioxidant indicators （CAT， GPX， MDA， SOD and TAC， VE） were tested before and after the treatment. [Result] The results showed that after the treatment， treatment groups ketone content decreased significantly， glucose content increased significantly， the activity of SOD and GPX increased significantly， and the difference is extremely significant （P< 0.01）. CAT activity significantly lower than the positive controls and healthy controls， the difference is extremely significant （P<0.01）. MDA content in a slight decline， the difference was not significant （P>0.05）， although slightly lower than that of healthy controls and positive controls， no significant difference （P>0.05）. VE content of treatment group is significantly lower than healthy controls， the difference is extremely significant （P< 0.01）， while positive controls and healthy controls′ VE after the treatment were higher than before. Treatment group′s TAC activity and CAT activity were significantly lower than that of positive controls after the treatment， the difference is extremely significant （P< 0.01）. [Conclusion] This experiment showed that Tongkang do well in reducing ketosis cows blood ketone content and increasing glucose content， and improving the effect of oxidation resistance. Without good treatment and scientific breeding management， cows could be hurt by ketosis sostenuto.

Key words Ketosis cow； Treatment； Antioxidant

酮病是奶牛由于攝食不足、大量泌乳、飼養(yǎng)管理不當(dāng)或胎衣不下等其他疾病繼發(fā)等原因造成的比較高發(fā)的一種碳水化合物及脂質(zhì)代謝紊亂性營養(yǎng)代謝病。奶牛發(fā)病時(shí)不僅會表現(xiàn)出精神沉郁、消瘦、泌乳量下降等臨床癥狀，而且會造成免疫力降低、繁殖性能下降、乳房炎和子宮內(nèi)膜炎等繼發(fā)疾病發(fā)病幾率升高，導(dǎo)致奶牛淘汰率大大增加，從而給牛場造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。研發(fā)一種高效、低價(jià)的酮病治療藥物具有重大意義。近年來，對奶牛酮病發(fā)病機(jī)理的研究不勝枚舉，對圍產(chǎn)期奶牛因采食減少、能量攝入不足而又大量泌乳，從而導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)能量負(fù)平衡，引起體脂動員，造成肝損傷，機(jī)體內(nèi)環(huán)境抗氧化酶活性低下的研究備受關(guān)注[1]。國內(nèi)外不少學(xué)者嘗試通過改善飼料成分[2]、補(bǔ)充添加劑[3]等方式來改善酮病奶牛的氧化代謝，提高抗氧化酶活性來降低自由基等對組織細(xì)胞的傷害，以達(dá)到改善和治療酮病的目的。筆者通過灌服廣西大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院臨床實(shí)驗(yàn)室研制的酮康復(fù)方制劑“酮康”，監(jiān)測酮病奶牛及其對照組奶牛治療前后血糖、血酮以及抗氧化酶活性的變化，檢驗(yàn)“酮康”的酮病治療效果。

1材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物

2013年6月，在廣西壯族自治區(qū)南寧市某規(guī)?；膛鲞x取體況、胎次、產(chǎn)奶量相近的分娩后10 d左右的奶牛46頭，清晨空腹頸靜脈采血12 ml，加入肝素鈉混勻，立即以3 500 r/min離心，取血漿5 ml，置于冷凍樣品箱中，立刻送回廣西大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院臨床實(shí)驗(yàn)室，-20 ℃下保存，48 h內(nèi)進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的測定：KET（血酮）、GLU（血糖）、TAC（總抗氧化能力）、MDA（丙二醛）、GPX（谷胱甘肽過氧化物酶）、CAT（過氧化氫酶活性）、SOD（超氧化物歧化酶活性）、VE（維生素E）。參照學(xué)者普遍認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)[4]對試驗(yàn)動物進(jìn)行酮病定量檢測：臨床型酮病牛（血酮含量≥20 mg/dl，血糖含量≤50 mg/dl）；亞臨床型酮牛（10 mg/dl≤血酮含量≤20 mg/dl，血糖含量≤50 mg/dl）；健康牛（血酮含量≤10 mg/dl，血糖正常）。臨床型酮病牛7頭，亞臨床型酮病牛2頭，健康牛37頭。選取5頭臨床型酮病奶牛和1頭亞臨床型酮病奶牛作為治療組，2頭臨床型酮病奶牛和1頭亞臨床型酮病奶牛作為陽性對照組，從37頭健康牛中選取與治療組的體況、胎次、產(chǎn)奶量等情況相近的6頭牛作為健康對照組。

1.2 試驗(yàn)材料

CAT試劑盒：可見光法，批號為20130510；GPX試劑盒：二硫代二硝基苯甲酸（Dithiodinitrobenzoic acid ，DTNB）顯色法，批號為20130512；MDA試劑盒：硫代巴比妥酸（Thio barbituric acid ，TBA）法，批號為20130521；SOD試劑盒：羥胺法，批號為20130515；TAC試劑盒：菲啉比色法，批號為20130512；VE試劑盒：比色法，批號為20130518。 以上試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，嚴(yán)格按照說明書操作。

KET：改良水楊醛比色法，所用的丙酮、水楊醛等試劑均為分析純；GLU：葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法；“酮康”，由廣西大學(xué)內(nèi)科學(xué)試驗(yàn)室提供；WFJ2100型可見分光光度計(jì)（龍尼柯上海儀器有限公司）；TG16-WS臺式高速離心機(jī)（湖南湘儀儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)公司）。

1.3 試驗(yàn)方法

分組后第2天起，治療組奶牛每天采食后灌服“酮康”400 ml/頭，連續(xù)灌服5 d（1個(gè)療程），陽性對照組試驗(yàn)牛和健康對照組牛均不灌服用藥，每天觀察記錄奶牛的臨床表現(xiàn)。灌藥治療開始前1天和治療結(jié)束后第2天，頸靜脈處采血15 ml，加入肝素鈉混勻后現(xiàn)場立即以3 500 r/min離心10 min，取血漿，分裝于EP管中，保存在低溫樣品箱中立即送回廣西大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院臨床實(shí)驗(yàn)室，-20 ℃下保存，48 h內(nèi)檢測完畢。

1.4 數(shù)據(jù)處理

使用Excel 2010軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析，使用SPSS 18.0軟件進(jìn)行一般線性分析，P>0.05表示差異不顯著，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著，結(jié)果均以x±SD表示。

2 結(jié)果與分析

治療組奶牛在治療的第2天臨床癥狀開始減輕，第3天部分消失，采食量、產(chǎn)奶量與陽性對照組相比均明顯恢復(fù)，而陽性對照組奶牛臨床癥狀稍有緩解或持續(xù)不變。治療第4天，治療組奶牛所有臨床癥狀基本消失，采食量、產(chǎn)奶量穩(wěn)步上升；而陽性對照奶牛臨床癥狀消失緩慢，采食量、產(chǎn)奶量變化不明顯；健康對照奶牛治療前后均未出現(xiàn)酮病臨床癥狀，采食量、產(chǎn)奶量等情況正常。繼續(xù)進(jìn)行穩(wěn)定治療，共5 d。

2.1 應(yīng)用“酮康”前后對血酮和血糖的影響

由表1可知，治療前，治療組和陽性對照組的血糖含量明顯低于健康對照組，血酮?jiǎng)t明顯高于健康對照組，差異均極顯著（P<0.01）。治療后，治療組與健康組的血糖接近，均在正常范圍以內(nèi)，差異不顯著，血酮?jiǎng)t存在一定差距，差異顯著，但小于亞臨床酮病范圍（Ket>10 mg/dl）。陽性對照組在治療后的時(shí)間點(diǎn)上，其血糖明顯低于健康對照組，血酮明顯高于健康對照組，并都在正常范圍之外，差異均極顯著。治療組在治療后其血糖和血酮均明顯好轉(zhuǎn)，治療前后差異極顯著；陽性對照組的血糖在治療后的時(shí)間點(diǎn)上明顯升高，差異極顯著，但仍低于健康對照組，其升高可能與機(jī)體自我代償性調(diào)節(jié)有關(guān)；血酮?jiǎng)t變化不明顯，差異不顯著。健康對照組的血糖和血酮在治療前后的變化都不明顯，差異不顯著。

從圖1可以看出，治療前治療組和陽性對照組的血糖相近，均低于健康對照組；治療后，治療組的血糖升高，與健康對照組基本一致；陽性對照組血糖含量雖然有所上升，但仍與健康對照組相差甚遠(yuǎn)。

圖2血酮的MEASURE-1的估算邊際值

從圖2可以看出，治療前治療組和陽性對照組的血酮均高于健康對照組，并都在10 mg/dl以上，且治療組明顯比陽性對照組高，但治療后治療組已經(jīng)低于10 mg/dl，并且很接近健康對照組水平，而陽性對照組則前后變化不大。

2.2“酮康”對抗氧化酶活性的影響

由表2可知，治療組奶牛對比治療前后其血漿GPX和SOD的活性均明顯上升，差異極顯著（P<0.01），但與健康對照組差異不顯著（P>0.05）；治療后治療組奶牛的MDA含量稍有下降，但差異不顯著（P>0.05），比健康對照組奶牛稍高，差異也不顯著（P>0.05），VE含量明顯低于健康對照組奶牛，差異極顯著（P<0.01），表明“酮康”對酮病牛的抗氧化性能有一定的提高作用；健康對照組奶牛和陽性對照組奶牛在治療組治療后的時(shí)間點(diǎn)上GPX活性、CAT活性和VE含量均明顯比治療前高，差異極顯著（P<0.01）。陽性對照組奶牛在治療組治療后的時(shí)間點(diǎn)上其TAC和CAT活性均明顯高于治療組奶牛，差異極顯著（P<0.01），而MDA、GPX、SOD和VE則差異不大，差異不顯著（P>0.05）。這表明陽性牛雖然轉(zhuǎn)歸順利，但體內(nèi)抗氧化應(yīng)激依然持續(xù)。

3討論與結(jié)論

3.1酮病奶牛在治療前后的血糖、血酮和臨床癥狀變化

奶牛產(chǎn)后酮病發(fā)生的原因是機(jī)體糖、脂代謝紊亂，攝入的能量不及產(chǎn)出，從而造成能量代謝負(fù)平衡，進(jìn)而出現(xiàn)消瘦、產(chǎn)奶量下降、疾病高發(fā)等情況[5]。臨床型酮病牛的食欲減少、產(chǎn)奶量下降、瘤胃蠕動遲緩、精神沉郁麻木等典型癥狀在試驗(yàn)治療組和陽性對照組奶牛中都得到一定體現(xiàn)。治療組中有1個(gè)酮病牛（血酮含量高達(dá)46.76 mg/dl）治療前每日產(chǎn)奶量甚至不足8 kg，極度消瘦，灌服“酮康”治療并減少擠奶一段時(shí)間后體況才有所改善。

亞臨床病牛治療前采食較少、不愿活動、產(chǎn)奶量也不高，灌藥治療后產(chǎn)奶量逐步提高，3 d后臨床癥狀基本消失，采食量增加，活動性提高。陽性對照組病牛瘤胃蠕動遲緩延續(xù)數(shù)日后才逐步改善（平均每3 min 1次），精料攝入依然較少，并且嗜睡，但消瘦逐步得到控制，試驗(yàn)期間因奶牛場全場加強(qiáng)護(hù)理，酮病癥狀基本得到控制，發(fā)病狀態(tài)緩慢，處于發(fā)病初期的奶牛因嚴(yán)重能量負(fù)平衡而表現(xiàn)有所惡化的狀況。所有健康對照組奶牛采食正常，產(chǎn)奶量日漸增加，并無異常發(fā)病情況出現(xiàn)；治療組奶牛經(jīng)過治療后酮病病癥都得到改善，陽性對照牛緩慢逐步轉(zhuǎn)歸正常，這表明灌服“酮康”對奶牛酮病治療臨床效果明顯，預(yù)后理想。另外，增加產(chǎn)后奶牛食量、適當(dāng)限制擠奶等措施是科學(xué)的，對奶牛酮病的治療起著重要作用。

該試驗(yàn)中在灌服酮康前，治療組和陽性對照組的血酮均高于健康對照組，并都在10 mg/dl以上，且治療組明顯比陽性對照組高，但灌服酮康后治療組已經(jīng)低于10 mg/dl，并且很接近健康對照組水平，而陽性對照組則在灌服酮康前后的時(shí)間點(diǎn)上變化不大。綜上所述，沒有采取灌服酮康等治療措施的酮病牛其病情沒有明顯好轉(zhuǎn)，有些甚至病情加重，灌服酮康確能使酮病牛的血糖升高，血酮降低。

3.2灌服“酮康”對酮病奶牛抗氧化能力的影響

奶牛通過體內(nèi)的酶抗氧化系統(tǒng)（如GPX、SOD、CAT等）對抗、清除機(jī)體氧化代謝所產(chǎn)生的多余自由基，協(xié)同VC、VE和微量元素Zn、Cu等非酶抗氧化系統(tǒng)共同抑制活性氧的生成，保護(hù)機(jī)體組織不受損傷[6]。自由基對細(xì)胞的氧化傷害最大，多不飽和脂肪酸等脂質(zhì)氧化代謝終產(chǎn)物MDA等的累積，又導(dǎo)致了過氧根離子等多余自由基的積聚[7]。

GPX是一種多存在于肝細(xì)胞和紅細(xì)胞中的保護(hù)性酶，它催化H2O2和其他有機(jī)物氧化兩分子GSH（還原型谷胱甘肽）至GSSG（氧化型谷胱甘肽）來保護(hù)細(xì)胞，防止脂質(zhì)過氧化物進(jìn)一步水解生成MDA等[8]。SOD歧化過氧根離子形成H2O2，最后經(jīng)存在于過氧化物酶體中的CAT分解成H2O和O2。SOD、CAT、GPX協(xié)同清除氧化自由基，保護(hù)細(xì)胞免受過氧化損害。

試驗(yàn)前酮病牛外周血血漿抗氧化酶活性很低，氧化應(yīng)激激烈，與雷金龍等的研究結(jié)果相一致；“酮康”不僅含有抗氧化類維生素，在酮病牛治療后明顯使血漿中SOD、CAT、GPX活性升高，而使MDA 含量大幅下降?？傊巴怠笨梢燥@著提高酮病奶牛的抗氧化能力，降低自由基等對細(xì)胞的損傷，改善氧化應(yīng)激狀態(tài)，治療效果明顯。

綜上所述，灌服“酮康”明顯起到升糖降酮和改善酮病奶牛的外周血抗氧化性能的作用，能明顯降低自由基等對細(xì)胞的損傷，改善氧化應(yīng)激狀態(tài)，對酮病的治療有良好效果。對于奶牛酮病，配合增加產(chǎn)后奶牛食量、適當(dāng)限制擠奶等科學(xué)措施，再灌服“酮康”，能得到良好的轉(zhuǎn)歸。

42卷28期

宿孝奇等酮病復(fù)方制劑對奶牛酮病抗氧化性能影響的研究

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