H PLC測定神農(nóng)鎮(zhèn)痛膏中血竭素的含量

湯小燕 陳越 李炯

（1廣東恒誠制藥有限公司，廣東湛江 524022；2湛江市第二人民醫(yī)院，524003；3廣東湛江吉民藥業(yè)股份有限公司，524001）

H PLC測定神農(nóng)鎮(zhèn)痛膏中血竭素的含量

湯小燕1陳越2李炯3

（1廣東恒誠制藥有限公司，廣東湛江 524022；2湛江市第二人民醫(yī)院，524003；3廣東湛江吉民藥業(yè)股份有限公司，524001）

目的：建立神農(nóng)鎮(zhèn)痛膏中血竭素的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法（HPLC），色譜柱Kromasil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液（40∶60）；檢測波長440 nm。結(jié)果：血竭素進樣量在0.10～0.50 μg之間呈良好的線性關(guān)系（r＝0.9997），平均回收率為97.32%，RSD=1.6%。結(jié)論：測定方法簡便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，陰性對照無干擾，可用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

神農(nóng)鎮(zhèn)痛膏；血竭素；高效液相色譜法；含量測定

神農(nóng)鎮(zhèn)痛膏為國家中藥保護品種，收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)（中藥成方制劑第十一冊）》[1]，處方由25味藥物組成，其中血竭為方中主要藥材。血竭為棕櫚科植物麒麟竭果實滲出的樹脂，具有活血定痛，化瘀止血，生肌斂瘡的功效[2]。其主要有效成分為血竭素，為了確保產(chǎn)品質(zhì)量，本文對神農(nóng)鎮(zhèn)痛膏中血竭素的含量測定方法進行了研究。

1 儀器與試藥

惠普HP1100高效液相色譜工作站（安捷倫科技有限公司）；B320S-T超聲波清洗器（必能信超聲[上海]有限公司）；AG135電子天平（梅特勒-托利多儀器[上海]有限公司）。

供試品為廣東湛江吉民藥業(yè)股份有限公司實驗室留樣及近期產(chǎn)品；血竭素高氯酸鹽對照品（原中國藥品生物制品檢定所，批號1111-9302）。乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

色譜柱Kromasil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液（40∶60）；檢測波長440 nm；柱溫30℃；進樣量20 μL；按血竭素峰計算，理論板數(shù)應(yīng)大于2 000。

2.2 試驗溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備精密稱取血竭素高氯酸鹽對照品10 mg（血竭素=血竭素高氯酸鹽重/ 1.377），置50 mL棕色量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取2 mL，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（每1 mL含血竭素約11.6 μg）。

2.2.2 供試品溶液的制備取本品2片（9.5 cm× 11 cm），除去襯膜，膏面抹上少量滑石粉，剪碎，置250 mL錐形瓶中，加甲醇40 mL，浸泡12 h，超聲提取20 min，傾取提取液，藥渣再加甲醇30 mL，同法提取3次，合并提取液，濾過，濾液置水浴上蒸至近干，放冷，加3%磷酸甲醇溶液適量，分數(shù)次研磨使溶解，與不溶物一起定量轉(zhuǎn)移至10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，超聲處理5分鐘，再離心（4 000 r/min）5分鐘，取上清液用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備按處方比例制成不含血竭的陰性樣品，再按供試品溶液制備的方法制成陰性對照溶液。

2.3 專屬性試驗

分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各20 μL，注入液相色譜儀測定。結(jié)果顯示陰性對照溶液在血竭素保留時間處未出現(xiàn)吸收峰，表明在實驗條件下，其他藥材成分對測定結(jié)果無影響，專屬性強。（見圖1）

2.4 線性關(guān)系

圖1 血竭專屬性試驗結(jié)果

精密量取血竭素高氯酸鹽對照品溶液（含血竭素50.14 μg/mL）1，2，3，4，5 mL，分別置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為5.01、10.03、15.04、20.06、25.07 μg/mL的梯度溶液。分別精密吸取20 μL，注入液相色譜儀中測定，以血竭素對照品濃度C為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為

r=0.9997。結(jié)果表明，血竭素進樣量在0.10～0.50 μg之間與其峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度

2.5.1 重復(fù)性試驗取同一批樣品（111202）6份，按擬定方法測定，結(jié)果樣品中血竭素的含量（μg/100 cm2）分別為63.14，63.40，64.55，64.75，65.24，65.70，RSD為1.57%（n=6），說明重復(fù)性良好。

2.5.2 中間精密度試驗取同一批供試品6份，分別由3人，在不同的時間，用同一臺設(shè)備，按擬定方法測定。結(jié)果供試品中血竭素的峰面積分別為364.29，359.32，365.27，361.36，372.81，367.42，RSD= 1.3%（n=6），說明中間精密度良好。

2.6 加樣回收率試驗

取同一批已知含量（含量43.688 5 μg/100 cm2）的供試品6份，每份取樣量為供試品取量（210 cm2）的50%（即105 cm2），以當(dāng)前取樣含量（46.3979 μg）的1∶1，分別精密加入血竭素高氯酸鹽對照品溶液（血竭素11.596 1 μg/mL）4.0 mL，按2.2.2項下的方法制備溶液，精密吸取供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，測定，計算血竭素的回收率。結(jié)果平均回收率為97.32%，RSD=1.6%（見表1）。

表1 加樣回收試驗結(jié)果

2.7 穩(wěn)定性試驗

取同一批供試品溶液，按擬定的測定方法分別在0，30，60，90，120 min進樣測定一次，結(jié)果測得血竭素的峰面積為368.01，359.36，359.63，348.07，345.30，在60 min內(nèi)峰面積基本穩(wěn)定，90 min時峰面積開始明顯下降，120 min時峰面積下降了6%，表明供試品溶液在1h內(nèi)測定基本穩(wěn)定。

2.8 樣品含量測定

取樣品3批，分別按擬定的含量測定方法測定，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1橡膠膏劑的中藥產(chǎn)品，含量測定是以每片（面積）為計量單位，因劑型特點及工藝設(shè)備的局限，每片的含膏量差異較大，設(shè)置含量測定有助于產(chǎn)品質(zhì)量的進一步控制。本課題選擇血竭為含量測定的研究對象，曾比較了甲醇、乙醇回流法，甲醇、乙醇超聲法和大孔樹脂柱吸附法，結(jié)果以甲醇超聲法提取效果最好。

表2 樣品中血竭素測定結(jié)果（n=2）

3.2穩(wěn)定性試驗表明，血竭素經(jīng)分離后不穩(wěn)定，溶液放置顏色會逐漸加深。因此，供試品溶液制備后應(yīng)置棕色量瓶中，并盡快測定，否則會導(dǎo)致含量偏低，一般應(yīng)在1h內(nèi)測定。

3.3本實驗研究表明，采用HPLC對血竭進行定量分析，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好，不受其他藥材成分干擾。本研究所建立的含量測定方法可更有效地控制神農(nóng)鎮(zhèn)痛膏的質(zhì)量。

[1]國家藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)（中藥成方制劑第十冊）[S].北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：130.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2010年版）一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：133.

Content Determination of Dracorhodin in Shennong Analgesic Plaster by HPLC

Tang Xiaoyan1，Chen Yue2，Li Jiong3（1 Guangdong Hengcheng Pharmaceutical Co.Ltd.，Guangdong Zhanjiang 524022，China；2 The Second People’s Hospital of Zhanjiang City，524003；3 Jimin Pharmaceutical Co.Ltd.of Guangdong Zhanjiang，524001）

Objective：To establish a method for the content determination of dracorhodin in shennong analgesic plaster.Methods:Using high performance liquid chromatography（HPLC）and pharmaceutical C18column（150×4.6 mm，5 μm），a mobile phase was acetonitrile-0.05mol/L sodium dihydrogen phosphate（40∶60）and the detection wavelength was at 440nm.Results:The results of dracorhodin in 0.10～0.50 μg showed a good linear relationship（r=0.9997）and the average recovery was 97.32%，RSD=1.6%.Conclusion:The method is simple，accurate and reproducible，without interference of negative control，and can be used for the quality control of shennong analgesic plaster.

Shennong Analgesic Plaster；Dracorhodin；HPLC；Content Determination

10.3969/j.issn.1672-5433.2014.04.004

2013-07-11）

湯小燕，女，工程師。研究方向：藥物制劑工藝與藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。通訊作者E-mail：txy1968@163.com