幾種中草藥提取物對(duì)念珠菌體外抑菌作用研究

倪 萍，牛婷婷

(1.新疆醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 形態(tài)中心，新疆 烏魯木齊 830011；2.新疆伊寧縣中醫(yī)院 檢驗(yàn)科，新疆 伊寧 835100)

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幾種中草藥提取物對(duì)念珠菌體外抑菌作用研究

倪 萍1，牛婷婷2

(1.新疆醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 形態(tài)中心，新疆 烏魯木齊 830011；2.新疆伊寧縣中醫(yī)院 檢驗(yàn)科，新疆 伊寧 835100)

目的：探討黃芩、薄荷、薰衣草等中草藥提取物對(duì)念珠菌體外抑菌作用。方法：采用水提醇沉法提出黃芩、薄荷、薰衣草的提取液，利用微量稀釋法體外測(cè)定不同草藥中提取物對(duì)念珠菌最低抑菌濃度(MIC)。結(jié)果：黃芩、薰衣草提取物對(duì)臨床念珠菌菌株均有一定的抑菌效果，其中薰衣草的抑菌效果最好，黃芩其次，薄荷不具備抑制念珠菌作用。結(jié)論：黃芩、薰衣草提取物具有一定的抑制白色念珠菌作用。

中草藥；白色念珠菌；抑菌作用

白色念珠菌是條件致病性真菌，存在于腸道、上呼吸道以及口腔中，一般情況下不會(huì)引起疾病，但當(dāng)人體免疫力下降時(shí)就會(huì)侵入細(xì)胞引發(fā)疾病。近年來(lái)因皮質(zhì)類(lèi)固醇藥物、抗生素的濫用導(dǎo)致念珠菌感染的概率增加。鑒于此研究黃芩、薄荷、薰衣草3種中草藥提取液對(duì)念珠菌的體外抑菌作用，現(xiàn)將具體情況報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

黃芩、薄荷、薰衣草中草藥各500g(烏魯木齊中藥房)；白色念珠菌標(biāo)準(zhǔn)菌株(新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院形態(tài)中心微生物實(shí)驗(yàn)室，經(jīng)培養(yǎng)獲得2代典型菌落)。從新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床白帶、膿汁中分離出4株念珠菌菌株分別編號(hào)臨床1～4號(hào)。從微生物試劑公司購(gòu)買(mǎi)沙氏培養(yǎng)基，培養(yǎng)基經(jīng)高壓蒸汽滅菌后待其溫度降至50℃左右時(shí)根據(jù)無(wú)菌操作要求注入內(nèi)徑為8cm的平皿中，輕輕搖晃使其在平皿底部均勻平鋪以備用；將2個(gè)制作好的沙氏平板放置于37℃孵箱中培養(yǎng)48h，未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌表明合格。

1.2 方法

(1)配置中藥提取液。

分別取50g黃芩、薄荷、薰衣草進(jìn)行粉碎處理，添加8倍蒸餾水浸泡30min，強(qiáng)火煮沸，改文火保持微沸狀態(tài)1h，同時(shí)進(jìn)行攪拌操作趁熱進(jìn)行過(guò)濾。向藥渣中添加適量蒸餾水煎煮30min，過(guò)濾后合并濾液。將水煎液濃縮至100mL后添加200mL的95%乙醇，添加過(guò)程中不斷地?cái)嚢鑼⒑剂靠刂圃?7%，進(jìn)而析出雜質(zhì)。靜置24h過(guò)濾，水浴蒸發(fā)至無(wú)醇味。向其中添加蒸餾水定容50mL，在55.6kPa條件下滅菌處理后備用[1]。

(2)測(cè)定抑菌效果。

待測(cè)菌株接種于沙氏培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng) 24～48h，選取直徑2～3mm 的2～3個(gè)獨(dú)立菌落混懸于0.9% 鹽水中，用散射光細(xì)菌濁度儀，使其濃度為 0.5麥?zhǔn)蠞舛?，然后用沙氏液體培養(yǎng)基將菌懸液分別稀釋50倍、20倍使試驗(yàn)細(xì)菌密度為(1×103～5×103)CFU/mL,每個(gè)測(cè)試孔的菌液量為100μL。

(3)藥敏測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)。

標(biāo)準(zhǔn)酵母菌菌株對(duì)黃芩、薄荷、薰衣草單味中藥煎劑藥物敏感性測(cè)定( MIC測(cè)定) 均采用微量稀釋法，參照NCCLS(美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì))1997版M27-A方案[2]。

(4)MIC終點(diǎn)的判定。

培養(yǎng)48h后觀察結(jié)果，在不攪動(dòng)的情況下與對(duì)照孔按下列標(biāo)準(zhǔn)比較，0: 肉眼觀察清晰; 1: 略模糊; 2: 濁度顯著減低；3:濁度輕度減低; 4 : 濁度未減低。取1 略模糊為判定終點(diǎn)。

2 結(jié)果

通過(guò)中藥煎劑藥敏試驗(yàn)提示，黃芩、薰衣草等中草藥提取物均起到了抑制念珠菌的作用，薄荷提取物未見(jiàn)明顯抑菌作用，其中薰衣草的MIC值最低，抑菌效果最好。

標(biāo)準(zhǔn)株中，不同念珠菌對(duì)以上3種中藥的MIC值見(jiàn)表1。

3 討論

近年來(lái)臨床上免疫抑制劑、激素、抗生素等藥物的廣泛應(yīng)用，導(dǎo)致致病真菌的耐藥性增強(qiáng)，一定程度上提高了念珠菌等真菌感染疾病的發(fā)病率。因此，研究副作用小、對(duì)真菌有較好治療作用且適宜免疫力低下患者的藥物顯得尤為重要。

表1 黃芩、薄荷、薰衣草提取物對(duì)念珠菌體外抑制MIC值比較 (μg/mL)

通過(guò)研究黃芩、薄荷、薰衣草提取物對(duì)念珠菌的抑菌作用，發(fā)現(xiàn)黃岑、薰衣草單味中草藥提取物對(duì)念珠菌均有一定的抑制作用，其中薰衣草提取物對(duì)念珠菌的抑菌作用稍好于黃芩。而其他文獻(xiàn)資料曾報(bào)道[3],甘草、知母等也能起到抑制念珠菌的作用，要想探究其和本文中不同中藥提取物念珠菌抑菌效果需做進(jìn)一步的試驗(yàn)。另外，王文花等[4]通過(guò)研究不同中草藥配伍情況發(fā)現(xiàn)。有些中草藥配伍后和單味藥對(duì)念珠菌的抑制作用有所差別，因此要想對(duì)比黃芩、薄荷、薰衣草等不同中草藥配伍和單味藥對(duì)念珠菌的抑制作用，仍需進(jìn)一步研究。不過(guò)通過(guò)本研究明確了黃芩、薰衣草等中草藥提取物對(duì)念珠菌具有一定的抑制作用，而薄荷提取物無(wú)抑制念珠菌作用，此結(jié)論是否與中草藥產(chǎn)地或提取工藝有關(guān)，有待于進(jìn)一步證實(shí)。

[1] 王柱華.10種中草藥乙醇提取物抗真菌作用研究[J].遼寧師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版,2013(1):120-123.

[2] WANGER A,MILLS K,NELSON P W,et al.Comparison of Etest and National Committee for Clinical Laboratory Standards broth macrodilution method for antifungal susceptibility testing: enhanced ability to detect amphotericin B-resistant Candida isolates[J].Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1995, 39(11): 2520-2522.

[3] 馬廉蘭,張文平,曾祥鳳,等.116種中草藥對(duì)白念珠菌的抑菌實(shí)驗(yàn)[J].贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1998(3):4-7.

[4] 王文花,李勁松,肖晴晴,等.5種中藥體外抗白色念珠菌的實(shí)驗(yàn)研究[J].廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2010,13(3):54-55.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

2014-01-22

倪萍(1978-)，新疆醫(yī)科大學(xué)講師，研究方向?yàn)槲⑸锼幬锼幚怼?/p>

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