運(yùn)脾溫陽顆粒對(duì)脾虛泄瀉大鼠胃黏膜結(jié)構(gòu)及血漿中CCK、PP濃度的影響

邵南齊 高青 朱萱萱 王海丹 付金芳 代永霞

（1.鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南鄭州 450064；2.江蘇省中醫(yī)院，江蘇南京 210029）

運(yùn)脾溫陽顆粒對(duì)脾虛泄瀉大鼠胃黏膜結(jié)構(gòu)及血漿中CCK、PP濃度的影響

邵南齊1高青1朱萱萱2王海丹2付金芳1代永霞1

（1.鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南鄭州 450064；2.江蘇省中醫(yī)院，江蘇南京 210029）

目的：探討運(yùn)脾溫陽顆粒對(duì)脾虛泄瀉大鼠胃黏膜結(jié)構(gòu)及血漿中膽囊收縮素（CCK）、胰多肽（PP）濃度的影響。方法：用大黃加飲食失節(jié)法制作大鼠脾虛泄瀉模型，將造模成功大鼠隨機(jī)分為模型組、思密達(dá)組和運(yùn)脾溫陽顆粒高、中、低劑量組，每組10只，另取同批次正常大鼠10只作為正常組，分別灌胃相應(yīng)藥物或生理鹽水10d后，檢測(cè)大鼠胃黏膜細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變和血漿中CCK、PP濃度。結(jié)果：脾虛泄瀉模型大鼠胃黏膜細(xì)胞受損，血漿CCK濃度下降，PP濃度升高；給予高、中劑量運(yùn)脾溫陽顆粒治療后，上述指標(biāo)均得以明顯改善而接近正常大鼠。結(jié)論：運(yùn)脾溫陽顆粒改善脾虛泄瀉大鼠癥狀可能是通過保護(hù)胃黏膜細(xì)胞，調(diào)整血漿中CCK、PP濃度而發(fā)揮作用的。

泄瀉脾虛 運(yùn)脾溫陽顆粒 胃黏膜 膽囊收縮素 胰多肽 實(shí)驗(yàn)研究

運(yùn)脾溫陽顆粒是由蒼術(shù)、山楂、炮姜、肉豆蔻、茯苓、澤瀉等六味藥（其質(zhì)量比為10∶10∶3∶6∶10∶10）采用現(xiàn)代工藝制成的顆粒劑，臨床上用于治療小兒遷延性腹瀉，總有效率達(dá)93%[1]。前期研究發(fā)現(xiàn)，運(yùn)脾溫陽顆粒能使脾虛小鼠的炭末推進(jìn)率減慢，可增強(qiáng)阿托品抑制腸蠕動(dòng)的作用，修復(fù)脾虛大鼠的小腸黏膜以及升高脾虛大鼠血液中NO和胃泌素濃度，從而改善胃腸功能[2-4]。本研究將進(jìn)一步觀察運(yùn)脾溫陽顆粒對(duì)脾虛模型大鼠的胃黏膜形態(tài)學(xué)和血漿中膽囊收縮素（CCK）、胰多肽（PP）濃度的影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物SD大鼠，雄性，體重200～220g，由南通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：scxk（蘇）2012-0008。

1.2 藥品及試劑運(yùn)脾溫陽顆粒：由江陰天江藥業(yè)有限公司提供（批號(hào)20120115）；思密達(dá)：由博福-益普生（天津）制藥有限公司提供（批號(hào)E15565）。膽囊收縮素（Cholecystokinin，CCK）試劑盒：美國(guó)BD公司生產(chǎn)，批號(hào)：201326KO；胰多肽（panoreatio polypeptide，PP）試劑盒：美國(guó)BD公司生產(chǎn)，批號(hào)：20130326TY。

1.3 器材FA1004型電子分析天平（上海菁海儀器有限公司），DD-5000型大容量低速離心機(jī)（長(zhǎng)沙英泰儀器有限公司），UV-2000紫外-可見分光光度計(jì)（尤尼科上海儀器有限公司）等。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 造模與分組、給藥造模組大鼠采用大黃苦寒瀉下結(jié)合飲食失節(jié)法制作脾虛大鼠模型，每日灌胃給予100%大黃水提液（0.2mL/10g，1次/d），灌胃前禁食8h，自由飲水，造成飲食失節(jié)，連續(xù)灌胃14d，出現(xiàn)類似臨床脾陽不足泄瀉的癥狀如便溏、納呆、體重減輕、體溫偏低、畏寒等作為脾虛指標(biāo)。造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型組、思密達(dá)組和運(yùn)脾溫陽顆粒高、中、低劑量組，每組10只。另取同批次正常大鼠10只為正常組。正常組、模型組大鼠給予等量生理鹽水，自由飲食；思密達(dá)組給予2.13g/kg思密達(dá)；運(yùn)脾溫陽顆粒高、中、低劑量組分別給予30.0g/kg、15.0g/kg、7.5g/kg運(yùn)脾溫陽顆粒。各組大鼠每日定時(shí)灌胃給藥，1次/d，連續(xù)10d。

2.2 取樣及檢測(cè)末次給藥2h后，大鼠眼眶取血4mL，注入試管中，3000r/min離心，取血漿，用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)CCK、PP，同時(shí)將大鼠脫頸椎處死，取胃，用10%福爾馬林固定胃，送病理檢查。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 一般狀態(tài)造模前，所有大鼠一般生理性自主活動(dòng)良好，活動(dòng)敏捷，飲食、二便、皮毛均正常，組間無顯著性差異。實(shí)驗(yàn)期間，與正常組比較，模型組動(dòng)物逐漸出現(xiàn)便溏、肛門污穢、消瘦、活動(dòng)逐漸減少、拱背、扎堆、瞇眼、毛發(fā)干枯無光澤等癥狀。各治療組大鼠每日體重緩慢增加，大便逐漸變稠到干，活動(dòng)增多，毛發(fā)蓬松有光澤接近正常組。實(shí)驗(yàn)?zāi)?，模型組大鼠體重嚴(yán)重下降，與正常組比較有非常顯著性差異（P＜0.01）；運(yùn)脾溫陽顆粒高、中劑量組大鼠體重比模型組顯著增加（P＜0.01）。提示運(yùn)脾溫陽顆粒對(duì)大黃和飲食失節(jié)致脾虛大鼠體重減輕有一定的改善作用，見表1。

3.2 胃黏膜組織學(xué)正常組：胃組織及小腸組織黏膜層黏膜上皮細(xì)胞及腺體排列整齊，無明顯變性壞死，無充血，黏膜下層無炎細(xì)胞浸潤(rùn)，無水腫。模型組：胃組織局部黏膜下層可見少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，無水腫。思密達(dá)組：胃部及小腸組織黏膜層黏膜上皮細(xì)胞及腺體排列整齊，無明顯變性壞死，無充血，黏膜下層無炎細(xì)胞浸潤(rùn)，無水腫。運(yùn)脾溫陽顆粒高劑量組：胃黏膜層黏膜上皮細(xì)胞及腺體排列整齊，無明顯變性壞死，無充血，黏膜下層無炎細(xì)胞浸潤(rùn)，無水腫。運(yùn)脾溫陽顆粒中劑量組：胃組織局部黏膜下層可見少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。運(yùn)脾溫陽顆粒低劑量組：胃組織局部黏膜下層可見少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。見圖1。

3.3 血漿中CCK和PP含量模型組大鼠血漿中CCK濃度明顯低于正常組（P<0.01），而PP的濃度明顯高于正常組（P<0.01）。運(yùn)脾溫陽顆粒高、中劑量組大鼠血漿中CCK明顯高于模型組（P＜0.01或P＜0.05），PP的濃度明顯低于模型組（P＜0.01或P＜0.05）。提示運(yùn)脾溫陽顆粒對(duì)大黃和飲食失節(jié)致脾虛大鼠的治療作用可能與調(diào)節(jié)血中CCK和PP的濃度有關(guān)。見表2。

4 討論

遷延性腹瀉是兒科臨床常見病，主要表現(xiàn)為稀便、大便次數(shù)增多，如不及時(shí)治療導(dǎo)致嚴(yán)重水電解質(zhì)紊亂可危及小兒生命。遷延性腹瀉屬于中醫(yī)久瀉、慢性腹瀉范疇。中醫(yī)兒科專家江育仁認(rèn)為脾虛失運(yùn)和氣虛陽虧是小兒遷延性腹瀉的基本病機(jī)[5]，遂提出運(yùn)脾溫陽法治療小兒遷延性腹瀉。運(yùn)脾溫陽顆粒方中蒼術(shù)運(yùn)脾燥濕為主藥，佐以山楂消積導(dǎo)滯，炮姜、肉蔻溫運(yùn)脾陽，茯苓、澤瀉健脾滲濕。全方具有運(yùn)脾溫陽、消積導(dǎo)滯滲濕的功能。

大黃苦寒，有較強(qiáng)的瀉下功用，久服可使機(jī)體元?dú)鈸p傷，脾胃功能減弱，從而影響水谷精微的吸收。本實(shí)驗(yàn)中，大鼠灌胃大黃后逐漸出現(xiàn)便溏、肛門污穢、消瘦、活動(dòng)逐漸減少、拱背、扎堆、瞇眼、毛發(fā)無光澤的現(xiàn)象符合中醫(yī)脾虛泄瀉癥候的特點(diǎn)[6]。

本實(shí)驗(yàn)中，脾虛大鼠出現(xiàn)泄瀉、消瘦，影響食物的消化吸收，胃組織局部黏膜下層見少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，給予大劑量運(yùn)脾溫陽顆粒后胃黏膜修復(fù)正常，說明運(yùn)脾溫陽顆粒可以修復(fù)胃黏膜結(jié)構(gòu)，有助于改善脾虛癥狀。

CCK和PP是重要的胃腸激素。CCK主要來源于十二指腸和上段空腸的I細(xì)胞，能促進(jìn)膽囊收縮，同時(shí)增加膽汁分泌，抑制胃排空，調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)，促進(jìn)胰腺腺泡分泌各種消化酶，提高消化能力[7]。PP是由胰腺和胃腸內(nèi)的PP細(xì)胞分泌的多肽激素，PP抑制食欲，減少攝食量，其分泌與體重呈負(fù)相關(guān)，目前研究發(fā)現(xiàn)PP抑制膽囊收縮素、胰酶和膽汁的釋放，同時(shí)收縮膽總管括約肌，但松弛膽囊平滑肌，影響脂質(zhì)的消化吸收[8-11]。因此，CCK和PP對(duì)膽汁分泌的影響作用相反。

本實(shí)驗(yàn)中脾虛大鼠胃排空加速，腸蠕動(dòng)加快，腹瀉，脂類物質(zhì)消化吸收受影響，血漿中CCK濃度下降，而PP濃度升高。經(jīng)運(yùn)脾溫陽顆粒治療后脾虛大鼠血漿中CCK濃度顯著升高，PP濃度顯著降低。因此我們可以推測(cè)，運(yùn)脾溫陽顆粒修復(fù)胃黏膜、減慢胃排空速度、改善胃腸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收、有效改善脾虛泄瀉大鼠的臨床癥狀等功效，可能是通過調(diào)節(jié)CCK和PP等胃腸激素水平而實(shí)現(xiàn)的。

表1 各組大鼠實(shí)驗(yàn)不同時(shí)期體重比較（±s）g

表1 各組大鼠實(shí)驗(yàn)不同時(shí)期體重比較（±s）g

注：與正常組比較，△△P＜0.01；與模型組比較，**P＜0.01。

組別動(dòng)物數(shù)（只）正常組劑量（g/kg）10實(shí)驗(yàn)前開始給藥（造模結(jié)束）時(shí)-實(shí)驗(yàn)?zāi)ńo藥10d后）208.0±7.1279.5±11.2324.5±10.1**模型組-212.0±7.9168.0±12.3△△189.5±17.6△△10思密達(dá)組102.13210.0±8.5162.5±8.9△△229.0±14.3△△**運(yùn)脾溫陽顆粒高劑量組1030.0212.0±7.5166.0±8.8△△233.5±8.8△△**運(yùn)脾溫陽顆粒中劑量組1015.0210.0±7.5174.0±10.7△△221.5±12.3△△**運(yùn)脾溫陽顆粒低劑量組107.5211.0±7.4170.0±8.89△△200.5±10.7△△

圖1 各組大鼠胃黏膜組織形態(tài)學(xué)改變（×100）

表2 各組大鼠血漿中CCK和PP含量比較（±s）

表2 各組大鼠血漿中CCK和PP含量比較（±s）

注：與正常組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別劑量（g/kg）CCK（pg/mL）正常組PP（pg/mL）-533.8±39.2**97.60±9.7**模型組117.5±7.8△△-454.7±18.8△△思密達(dá)組2.13524.2±38.1**98.2±7.7**運(yùn)脾溫陽顆粒高劑量組30.0540.8±52.7**99.9±3.2**運(yùn)脾溫陽顆粒中劑量組15.0498.1±44.9*109.1±3.8*△運(yùn)脾溫陽顆粒低劑量組7.5492.0±59.5114.4±8.4△△

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R256.340.5文獻(xiàn)識(shí)別碼A

1672-397X（2014）09-0075-03

邵南齊（1973-），男，碩士，講師，中藥藥理學(xué)專業(yè)。shaonanqi@126.com

2014-04-01

編輯：吳寧

澍青醫(yī)專重點(diǎn)科研項(xiàng)目（12001）