葡萄霜霉病有效藥劑篩選及藥效評(píng)價(jià)

畢秋艷， 楊曉津， 馬志強(qiáng)*， 張小風(fēng)， 王文橋， 韓秀英

（1.河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所／河北省農(nóng)業(yè)有害生物綜合防治工程技術(shù)研究中心，保定 071000；2.中國(guó)地質(zhì)大學(xué)長(zhǎng)城學(xué)院，保定 071000）

葡萄霜霉病有效藥劑篩選及藥效評(píng)價(jià)

畢秋艷1， 楊曉津2， 馬志強(qiáng)1*， 張小風(fēng)1， 王文橋1， 韓秀英1

（1.河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所／河北省農(nóng)業(yè)有害生物綜合防治工程技術(shù)研究中心，保定 071000；2.中國(guó)地質(zhì)大學(xué)長(zhǎng)城學(xué)院，保定 071000）

摘要采用葉盤漂浮法測(cè)定了保護(hù)性殺菌劑二硫代氨基甲酸鹽類、咪唑類、吡啶類，內(nèi)吸性殺菌劑酰胺類、煙酰胺類、甲氧基丙烯酸酯類、三唑類、氨基甲酸酯類、惡唑類及多種復(fù)配劑等對(duì)葡萄霜霉病菌的毒力，并進(jìn)行了田間藥效試驗(yàn)。室內(nèi)藥劑測(cè)定結(jié)果表明，當(dāng)前生產(chǎn)上的主要藥劑和新投入到市場(chǎng)中的部分藥劑對(duì)葡萄霜霉病菌表現(xiàn)較高毒力；6種復(fù)配藥劑對(duì)葡萄霜霉病菌菌株的毒力高于單劑。田間試驗(yàn)結(jié)果表明試驗(yàn)藥劑均可有效地控制葡萄霜霉病的發(fā)生和危害。

關(guān)鍵詞葡萄霜霉病菌； 殺菌劑； 毒力； 防效

葡萄霜霉?。╣rape downy mildew）是葡萄種植中最重要的病害，在我國(guó)各葡萄產(chǎn)區(qū)均有分布，多發(fā)生在雨水較多的地區(qū)和年份，在5－6月份開(kāi)始發(fā)生，7－9月為發(fā)病盛期。主要危害葉片，也能侵染嫩梢、花序、幼果等幼嫩組織。病害流行年份，病葉焦枯早落，病梢扭曲，發(fā)育不良，對(duì)樹(shù)勢(shì)和產(chǎn)量影響嚴(yán)重，給葡萄生產(chǎn)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失［1］。

目前生產(chǎn)上主要依靠化學(xué)藥劑進(jìn)行防治。生產(chǎn)上防治葡萄霜霉病的藥劑主要有保護(hù)劑（波爾多液、代森錳鋅、氫氧化銅等）和內(nèi)吸性殺菌劑及其混劑三大類。某些化學(xué)藥劑由于作用位點(diǎn)單一，連續(xù)大量使用后產(chǎn)生抗藥性［2-3］，有些藥劑使用后還具有副作用、藥害、污染等問(wèn)題，已經(jīng)不能適應(yīng)現(xiàn)代葡萄產(chǎn)業(yè)的發(fā)展、不能保證葡萄生產(chǎn)的正常進(jìn)行，篩選新型高效、安全的殺菌劑并提供合理安全的用藥技術(shù)已是葡萄生產(chǎn)中的迫切需求。

本項(xiàng)研究旨在確定葡萄霜霉病有效藥劑以及對(duì)葡萄霜霉病的田間控制效果，確定其藥劑應(yīng)用技術(shù)，為生產(chǎn)中選擇防治葡萄霜霉病的高效藥劑提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

獲得田間連續(xù)用藥的甲霜靈抗藥菌株，用于新藥劑篩選試驗(yàn)。

1.2 供試品種

試驗(yàn)葡萄品種為‘玫瑰香’。

1.3 供試藥劑

85%丙森鋅（propineb）原藥，山東天成生物科技有限公司；80%代森錳鋅（mancozeb）可濕性粉劑，廣家農(nóng)藥廠；20%氰霜唑（cyazofamid）懸浮劑，山東海利爾化工有限公司；98%氟啶胺（fluazinam）原藥，浙江禾田化工有限公司；95%雙炔酰菌胺（mandipropamid）原藥，沈陽(yáng)化工研究院；97%甲霜靈（metalaxyl）原藥，沈陽(yáng)化工研究院；97.1%高效甲霜靈（metalaxyl-M）原藥，先正達(dá)（中國(guó)）投資有限公司；97.6%烯酰嗎啉（dimethomorph）原藥，河北冠龍農(nóng)化有限公司；92%氟嗎啉（flumorph）原藥，沈陽(yáng)化工研究院；95%氟吡菌胺（fluopicolide）原藥，德國(guó)拜耳作物科學(xué)公司；95%霜脲氰（cymoxanil）原藥，美國(guó)杜邦公司；96%啶酰菌胺（boscalid）原藥，巴斯夫歐洲公司；；95%嘧菌酯（azoxystrobin）原藥，南京金土地化工有限公司；250 g／L吡唑醚菌酯（pyraclostrobin）乳油，巴斯夫歐洲公司；50%醚菌酯（kresoxim-methyl）水分散粒劑，陜西省浦城美爾果農(nóng)化有限責(zé)任公司；30%氟菌唑（triflumizole）可濕性粉劑，山東天威農(nóng)藥有限公司；722 g／L霜霉威鹽酸鹽（propamocarb hydrochloride）水劑，拜耳作物科學(xué)有限公司；96%惡霜靈（oxadixyl）原藥，西安近代農(nóng)藥科技股份有限公司；60%吡唑醚菌酯·代森聯(lián)（pyraclostrobin·metiram）水分散粒劑，巴斯夫歐洲公司；75%苯酰菌胺·代森錳鋅（zoxamide· mancozeb）水分散粒劑，美國(guó)高文國(guó)際商業(yè)有限公司；69%烯酰嗎啉·代森錳鋅（dimethomorph· mancozeb）可濕性粉劑，江蘇新沂中凱農(nóng)用化工有限公司；50%烯酰嗎啉·嘧菌酯（dimethomorph· azoxystrobin）可濕性粉劑，湖南農(nóng)大海特農(nóng)化有限公司；60%霜脲氰·嘧菌酯（cgmoxanil·azoxystrobin）可濕性粉劑，美國(guó)世科姆公司；20%烯酰嗎啉（dimethomorph）懸浮劑，深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司；50%烯酰嗎啉（dimethomorph）可濕性粉劑，安徽豐樂(lè)農(nóng)化有限責(zé)任公司；20%嘧菌酯（azoxystrobin）水分散粒劑，美國(guó)世科姆公司；25%嘧菌酯（azoxystrobin）懸浮劑，先正達(dá)（中國(guó)）投資有限公司；20%烯酰嗎啉（dimethomorph）可濕性粉劑，山東科大生物創(chuàng)業(yè)有限公司。

1.4 室內(nèi)藥劑篩選

1.4.1 孢子懸浮液準(zhǔn)備

采集新鮮葡萄霜霉病葉，裝入放冰袋的保溫盒，帶回室內(nèi)，用壓力0.08 MPa的QWJ－150型空壓機(jī)帶動(dòng)喉頭噴霧器將病葉表面霜霉病菌層用蒸餾水沖洗掉，將其置于放有濕潤(rùn)濾紙的塑料盒中，用保鮮膜將塑料盒封口，18℃黑暗條件下保濕培養(yǎng)24 h［4］，至產(chǎn)生大量新生孢子囊，蒸餾水沖洗葉片，洗下新鮮孢子囊，2層紗布過(guò)濾，以2 000 r／min 5 min離心2次，配制成孢子囊含量1×105～1.5×105個(gè)／mL的懸浮液，于4℃［5］冰箱15 min低溫處理后用于接種。

1.4.2 葡萄霜霉病菌對(duì)不同類型殺菌劑毒力測(cè)定

保護(hù)劑測(cè)定采用葉盤噴霧法進(jìn)行［6］。根據(jù)葡萄霜霉病菌對(duì)藥劑的敏感程度將保護(hù)藥劑配成濃度為0.1、0.5、1、5、10、50、100μg／m L，將藥液均勻噴霧于選擇的健康葉片背面，使藥液分布均勻，以液珠不從葉片表面落下為宜。待葉片表面藥液風(fēng)干后，用打孔器將生長(zhǎng)健壯完好的葡萄葉片打成直徑1.5 cm的葉盤，將葉盤置于預(yù)先鋪有兩層濕潤(rùn)濾紙的培養(yǎng)皿中，用葡萄霜霉病菌株的孢子囊懸浮液接種葡萄葉盤（培養(yǎng)皿直徑9 cm），每皿15個(gè)葉盤，每葉盤接1滴（10μL），試驗(yàn)重復(fù)3次。在每天18℃、16 h光照和8 h黑暗條件下培養(yǎng)6～8 d，待對(duì)照葉盤發(fā)病均勻后進(jìn)行分級(jí)調(diào)查發(fā)病情況。

治療劑及復(fù)配劑測(cè)定采用葉盤漂浮法進(jìn)行［7］。根據(jù)葡萄霜霉病菌對(duì)藥劑的敏感程度不同，將藥劑配制成系列濃度的藥液，用丙酮將原藥溶解后，加入適量去離子水，將甲霜靈及其他藥劑配制成濃度為0.1、0.5、1、5、10、50、100μg／mL，每皿倒藥液20 mL。用打孔器將生長(zhǎng)健壯完好的葡萄葉片打成直徑1.5 cm的葉盤，將葉盤漂浮于藥液表面，再將葡萄霜霉病菌株的孢子囊懸浮液接種葡萄葉盤（培養(yǎng)皿直徑9 cm），每皿15個(gè)葉盤，每葉盤接1滴（10μL），試驗(yàn)重復(fù)3次。在每天18℃、16 h光照和8 h黑暗條件下培養(yǎng)6～8 d，待對(duì)照葉盤發(fā)病均勻后進(jìn)行分級(jí)調(diào)查發(fā)病情況。

葡萄霜霉病在葉片上的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)［8］：

0級(jí)，無(wú)病斑；1級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積的5%以下；3級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積的6%～25%；5級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積的26%～50%；7級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積的51%～75%；9級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積的75%以上。

病情指數(shù)計(jì)算方法：

病情指數(shù)＝［∑（各級(jí)病葉數(shù)×相對(duì)級(jí)數(shù)值）／（調(diào)查總?cè)~數(shù)×9）］×100；

防治效果（%）＝（對(duì)照病情指數(shù)－處理病情指數(shù)）／對(duì)照病情指數(shù)×100。

根據(jù)上述公式計(jì)算病情指數(shù)、相對(duì)防效，然后利用DPS數(shù)據(jù)處理軟件，將相對(duì)防效換算成幾率值，根據(jù)藥劑系列濃度的對(duì)數(shù)值及該濃度下相對(duì)防效的幾率值之間的線性回歸分析，求出藥劑對(duì)葡萄霜霉病菌的毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)及有效抑制中濃度（EC50）等。

1.5 田間藥效試驗(yàn)

發(fā)病前施藥，藥液用量1 800 L／hm2的條件下，發(fā)病前第一次用藥，隔7～10 d施一次，連續(xù)4次施藥。田間試驗(yàn)同一藥劑處理及其對(duì)照藥劑處理在同一地塊進(jìn)行，每處理設(shè)置4次重復(fù)。第4次施藥后進(jìn)行分級(jí)調(diào)查發(fā)病情況。葡萄霜霉病在葉片上的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)和防治效果計(jì)算方法同1.4.2所述。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同類型藥劑對(duì)葡萄霜霉病菌的抑制作用

測(cè)定結(jié)果表明，當(dāng)前生產(chǎn)上的主要藥劑和新投入到市場(chǎng)中的部分藥劑對(duì)葡萄霜霉病菌的甲霜靈抗藥性菌株表現(xiàn)較高毒力；6種復(fù)配藥劑對(duì)葡萄霜霉病菌菌株的毒力高于單劑，證明了合理復(fù)配藥劑的內(nèi)在關(guān)系；應(yīng)該根據(jù)各地抗藥性的狀況合理地用于防治。

藥劑EC50是用來(lái)衡量藥劑間毒力大小的重要指標(biāo)［9］，EC50越小，即該藥劑對(duì)病菌的反應(yīng)越靈敏，其抑制作用越強(qiáng)，反之抑制作用越差。供試藥劑EC50各不相同，毒力大小有很大差異。對(duì)病原菌的毒力大小整體趨勢(shì)依次為復(fù)配藥劑＞治療劑＞保護(hù)劑。

毒力回歸方程結(jié)果顯示，復(fù)配劑斜率值普遍大，即藥劑隨著濃度升高抑菌效果增強(qiáng)的幅度最大［10］，葡萄霜霉病菌對(duì)這種藥劑反應(yīng)敏感，藥劑用量或濃度稍有變化就可以使藥效直線上升或下降。斜率值越小，說(shuō)明該種藥劑隨著濃度的升高抑菌效果變化不大。復(fù)配劑隨著濃度的升高抑菌效果明顯。

表1 保護(hù)性殺菌劑對(duì)葡萄霜霉病菌的毒力1）Table 1 Toxicity of the protective fungicides to Plasmopara viticola

表2 內(nèi)吸性殺菌劑對(duì)葡萄霜霉病菌的毒力Table 2 Toxicity of the systemic fungicides to Plasmopara viticola

表3 復(fù)配殺菌劑對(duì)葡萄霜霉病菌的毒力Table 3 Toxicity of the mixtures to Plasmopara viticola

2.2 田間防治效果

試驗(yàn)藥劑均可有效地控制葡萄霜霉病的發(fā)生和危害。試驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)生產(chǎn)上用來(lái)防治葡萄霜霉病較頻繁的酰胺類殺菌劑烯酰嗎啉和甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑嘧菌酯仍具有較好的防效；新型復(fù)配藥劑60%吡唑醚菌酯·代森聯(lián)水分散粒劑在試驗(yàn)藥劑中防效表現(xiàn)突出。

表4 20%烯酰嗎啉懸浮劑防治葡萄霜霉病試驗(yàn)結(jié)果1）Table 4 Control efficacy of 20%dimethomorph SC on grape downy mildew by field trials

表5 20%嘧菌酯水分散粒劑防治葡萄霜霉病試驗(yàn)結(jié)果1）Table 5 Control efficacy of 20%azoxystrobin WG on grape downy mildew by field trials

表6 60%吡唑醚菌酯·代森聯(lián)水分散粒劑防治葡萄霜霉病試驗(yàn)結(jié)果1）Table 6 Field trials of 60%pyraclostrobin·metiram WG for controlling downy mildew

3 結(jié)論與討論

保護(hù)劑中丙森鋅、氰霜唑毒力最高，對(duì)病菌作用抑制最強(qiáng)；治療劑中雙炔酰菌胺、氟吡菌胺、霜脲氰、吡唑醚菌酯、惡霜靈毒力值小于1，對(duì)病菌抑制作用均較強(qiáng)；6種復(fù)配劑毒力值均小于1；對(duì)病菌抑制作用優(yōu)于單劑。

田間用藥防治葡萄霜霉病時(shí)，建議在發(fā)病前進(jìn)行預(yù)防用藥，隔7～10 d施1次，連續(xù)4次施藥，降低后期病害發(fā)生程度。

葡萄霜霉病菌在田間菌量大、繁殖快，易對(duì)殺菌劑產(chǎn)生抗藥性，為減緩葡萄霜霉病單一藥劑抗藥性的產(chǎn)生，不存在交互抗藥性或不同作用機(jī)理的藥劑進(jìn)行輪換、混合或替換使用才能從根本上解決藥劑的抗藥性。復(fù)配劑不易產(chǎn)生抗藥性。根據(jù)室內(nèi)篩選的結(jié)果，且考慮田間的防效成本，選擇復(fù)配劑在田間使用效果最好。建議生產(chǎn)中進(jìn)一步試驗(yàn)上述混劑的使用技術(shù)。

生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)，即使連續(xù)和高劑量使用藥劑防治，病菌仍可以再次侵染葡萄新生嫩梢，使病原菌得以生存。最好的管理方法是去除新葉，保護(hù)老葉，來(lái)減少用藥次數(shù)和用藥量。

將內(nèi)吸劑與保護(hù)劑或其他不同作用機(jī)理的內(nèi)吸劑混合使用能擴(kuò)大殺菌譜，兼治多種病害；延長(zhǎng)持效期，減少用藥次數(shù)；有時(shí)還能獲得增效作用，提高藥效；延緩防治對(duì)象對(duì)內(nèi)吸性殺菌劑的抗性產(chǎn)生。

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中圖分類號(hào)：S 436.631.1，S 482.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

DOI：10.3969／j.issn.0529-1542.2014.03.039

收稿日期：2013-06-26

修訂日期：2013-07-29基金項(xiàng)目： 公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)（201203035）

*通信作者E-mail：mazhiqiang304＠163.com

Evaluation of fungicides for control of grape downy mildew caused by Plasmopara viticola

Bi Qiuyan1， Yang Xiaojin2， Ma Zhiqiang1， Zhang Xiaofeng1， Wang Wenqiao1， Han Xiuying1
（1.IPM Centre of Hebei Province，Institute of Plant Protection，Hebei Academy of Agricultural and Forestry Sciences，Baoding 071000，China；2.China University of Geosciences Great Wall College，Baoding 071000，China）

AbstractEfficacy of fungicides，including the protective fungicides of dithiocarbamates，imidazoles，pyridines，the systemic fungicides of amides，nicotinamide，strobilurins，three azoles，carbamate，soxazoles，and 6 mixtures of fungicides，against grape downy mildew（Plasmopara viticola）was evaluated by leaf disc test and field trials. Leaf disc test showed that all selected fungicides had good efficacy and the mixtures were more efficient than single fungicide.Field trials demonstrated that all fungicides from pesticides market were effective against the grape downy mildew.

Key wordsPlasmopara viticola； fungicides； toxicity； control effect