頸痛舒貼片對(duì)大鼠神經(jīng)根性疼痛的影響

師 彬， 王 平， 司淑媛

（1.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院， 北京 100102； 2.山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院， 山東 濟(jì)南 250003；3.山東省中醫(yī)藥研究院， 山東 濟(jì)南 250014； 4.濟(jì)南市槐蔭人民醫(yī)院， 山東 濟(jì)南 250014）

頸痛舒貼片對(duì)大鼠神經(jīng)根性疼痛的影響

師 彬1，2， 王 平3， 司淑媛4

（1.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院， 北京 100102； 2.山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院， 山東 濟(jì)南 250003；3.山東省中醫(yī)藥研究院， 山東 濟(jì)南 250014； 4.濟(jì)南市槐蔭人民醫(yī)院， 山東 濟(jì)南 250014）

目的 研究頸痛舒貼片對(duì)大鼠神經(jīng)根性頸椎病疼痛反應(yīng)的影響。方法 制作動(dòng)靜力結(jié)合頸椎病大鼠模型，術(shù)后給頸痛舒貼片，觀察大鼠自主活動(dòng)狀況和壓足痛閾值，測(cè)定血清谷氨酸，以及頸神經(jīng)根病理組織學(xué)觀察。結(jié)果 頸痛舒貼片明顯促進(jìn)模型大鼠行為學(xué)改變的恢復(fù)，提高模型大鼠壓足痛閾值，降低血清谷氨酸水平，改善神經(jīng)根病變程度。結(jié)論 頸痛舒貼片能夠有效治療大鼠神經(jīng)根性疼痛。

頸痛舒貼片；神經(jīng)根型頸椎??；疼痛

隨著生活節(jié)奏的加快和人口老齡化的到來(lái)，頸椎病已成為一種常見(jiàn)病，其中神經(jīng)根型屬于最常見(jiàn)、 危害性最大的一種［1］。 神經(jīng)根型頸椎病 （ Cervical spondylotic ridiculopathy） 是頸椎間盤退行性病變，為繼發(fā)性椎間關(guān)節(jié)退行性病變所致頸脊神經(jīng)根受累而發(fā)生的一種臨床綜合癥候群，受神經(jīng)根支配區(qū)域會(huì)出現(xiàn)刀割樣疼痛或過(guò)電樣竄麻［2］， 患者疼痛難忍，嚴(yán)重影響了生活質(zhì)量。

中藥外敷是一種由外向內(nèi)標(biāo)本兼治的治療方法， 具有幾千年的悠久歷史［3］， 遵從 “內(nèi)病外治”的原則［4］。 頸 痛 舒 貼 片 （ 淫 羊 藿、 黃 芪、 赤 芍、紅花、當(dāng)歸等）是在臨床驗(yàn)方的基礎(chǔ)上，采用國(guó)內(nèi)領(lǐng)先的透皮吸收技術(shù)制成的治療神經(jīng)根型頸椎病的有效制劑。本實(shí)驗(yàn)采用大鼠神經(jīng)根型頸椎病動(dòng)物模型，研究頸痛舒貼片對(duì)大鼠神經(jīng)根性疼痛的影響，為開(kāi)發(fā)新型創(chuàng)新藥物奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 材料

1.1.1 受試藥物 頸痛舒貼片由山東省中醫(yī)藥研究院制劑室提供， 批號(hào) 20120427， 每日一貼。 頸痛舒貼片由淫羊藿、黃芪、赤芍、紅花、當(dāng)歸等組成。制備方法：①水提部分：淫羊藿、赤芍、黃芪等加 12 倍量水， 回流提取 2 次， 每次 1.5 h， 濾過(guò)，合并濾液并濃縮，并與提油后水煎濃縮液合并后醇沉； 三七粉碎過(guò) 10 目篩，以 10 倍量 70%乙醇提取 3 次， 每次 1.5 h。 合并濾液， 回收乙醇，濃縮成稠膏。②提取揮發(fā)油部分：乳香、當(dāng)歸等加4倍量水，提取揮發(fā)油。揮發(fā)油及提油后的水液另器保存，藥渣水煎2次，濾過(guò)，合并濾液成濃縮液，并與水提部分藥材水煎濃縮液合并后醇沉成稠膏。③龍血竭、冰片分別研細(xì)后與混合稠膏混勻。將稠膏加入甘油、 氮酮、 THY-01 丙烯酸酯乳液固定在壓敏膠上，制備成頸痛舒貼片。

1.1.2 對(duì)照藥物 萬(wàn)通筋骨貼由通化萬(wàn)通藥業(yè)股份有限公司出品， 批號(hào) 111021， 每日 1 貼。

1.1.3 受試藥物與劑量設(shè)置 70 kg人日用藥量為一貼 （大小為 35 cm2）， 按體表面積折算， 確定大鼠 高、 中、 低 劑 量 分 別 為 12.6、 6.30、3.15 cm2/kg， 每日一貼， 相當(dāng)于70 kg人日給藥量的 4、 2、 1 倍， 每天給藥一次， 連續(xù) 15 d。

1.1.4 受試動(dòng)物 Wistar大鼠，雌雄各半， 體質(zhì)量180 ～220 g， 購(gòu)自山東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心， 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)： SCXK （魯） 2009-0001。 置于不銹鋼鼠籠內(nèi)飼養(yǎng)， 自由攝食飲水， 室溫控制在23～25℃， 通風(fēng)良好。

1.1.5 儀器與試劑 SANCO 318MC型酶標(biāo)儀，上海三科儀器有限公司生產(chǎn)； YLS-3E電子壓痛儀， 由山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站生產(chǎn)； UV-265FW 紫外-可見(jiàn)光光度計(jì)由 Corporation Kyoto Japan 提供。 谷氨酸檢測(cè)試劑盒，南京建成生物工程研究所生產(chǎn)。

2 神經(jīng)根型頸椎病動(dòng)物模型的制備［5-6］

取 Wistar品系大鼠， 雌雄各半， 分為動(dòng)靜力結(jié)合頸椎病動(dòng)物模型組和假手術(shù)組，大鼠背部脫毛后備用。首先將模型組大鼠用戊巴比妥鈉麻醉，用眼科剪刀和小鑷子逐層分離棘突兩側(cè)的肌肉，暴露棘突，用手術(shù)鉗分離六，七兩側(cè)橫突以上椎板，暴露脊髓，暴露神經(jīng)，逐步分離出頸七神經(jīng)根，將浸漬過(guò)福爾馬林的定量濾紙片貼到頸七神經(jīng)根下。逐層縫合，消毒手術(shù)周圍的皮膚。假手術(shù)組按上述方法進(jìn)行，暴露出右側(cè)頸七神經(jīng)根后不貼濾紙片。

將造模后的大鼠分為模型組、頸痛舒貼片組和對(duì)照藥物組。 將大鼠背部剃毛， 面積約為4 cm× 4 cm， 每天各組大鼠貼敷不同受試物， 按下列方法給藥：①假手術(shù)組，假手術(shù)組大鼠給予空白膏藥劑， 共15 d。 ②模型組， 模型大鼠給予空白膏藥劑， 共15 d。③頸痛舒貼片組， 動(dòng)靜力結(jié)合頸椎病模型大鼠分別給予頸痛舒貼片，按照高、中、低劑量給于 12.60、 6.30、 3.15 cm2/kg的標(biāo)準(zhǔn)貼敷藥膏， 每天給藥 1 次， 連續(xù) 15 d。 ④對(duì)照藥物組 （萬(wàn)通筋骨貼組），動(dòng)靜力結(jié)合頸椎病模型大鼠給予萬(wàn)通筋骨貼，按照6.30 cm2/kg的標(biāo)準(zhǔn)貼敷藥膏， 每天給藥一次， 連續(xù)15 d。給藥后檢測(cè)大鼠的行為學(xué)改變和壓足痛閾值［7］改變情況。 測(cè)定完畢后， 處死大鼠，取血清，測(cè)定谷氨酸。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 行為學(xué)變化［6]模型組動(dòng)物于手術(shù)后次日均表現(xiàn)為右上肢緊貼胸前，不敢觸地，腳趾緊縮，肘、腕關(guān)節(jié)不能活動(dòng)。給藥7 d后，頸痛舒貼各劑量組大鼠均可肘關(guān)節(jié)可觸地爬行，模型組及萬(wàn)通筋骨貼組大鼠仍然表現(xiàn)為上肢緊貼胸前，不敢觸地。治療 10 d后，頸痛舒貼高劑量組8只大鼠可用腕關(guān)節(jié)觸地爬行，中劑量組6只大鼠可用腕關(guān)節(jié)觸地爬行，低劑量組5只大鼠可用腕關(guān)節(jié)觸地爬行；萬(wàn)通筋骨貼組3只可用肘關(guān)節(jié)觸地爬行，模型組1只動(dòng)物可用肘關(guān)節(jié)觸地爬行。 治療 15 d后，頸痛舒貼各劑量組大鼠均可用腕關(guān)節(jié)觸地爬行，萬(wàn)通筋骨貼組6只動(dòng)物可用腕關(guān)節(jié)觸地，模型組3只大鼠肘關(guān)節(jié)可觸地爬行，顯示頸痛舒貼可以有效改善模型動(dòng)物行為學(xué)方面的變化。

3.2 痛閾值變化 給藥 15 d 時(shí)用壓尾儀壓迫大鼠右前掌中央部位，以大鼠掙扎、嘶叫時(shí)的壓力作為該大鼠的痛閾值。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 頸痛舒貼片對(duì)頸椎病動(dòng)物模型的治療作用 （，n=10）Tab.1 Treatment of Jingtongshu Patch on rats model of cervical spondylosis（， n=10）

表1 頸痛舒貼片對(duì)頸椎病動(dòng)物模型的治療作用 （，n=10）Tab.1 Treatment of Jingtongshu Patch on rats model of cervical spondylosis（， n=10）

注： 與模型對(duì)照組比較，###P＜0.001

組別 劑量/（ cm2·kg-1）痛閾值/g提高率/%模型組 — 3.0 ±0.7—假手術(shù)組 — 8.2 ±1.0 173.3頸痛舒貼高劑量組 12.60 5.6 ±0.9### 86.7頸痛舒貼中劑量組 6.30 5.2 ±1.3### 73.3頸痛舒貼低劑量組 3.15 5.3 ±0.9### 76.7萬(wàn)通筋骨貼組 6.30 5.0 ±0.9###66.7

表 1 可見(jiàn)， 痛閾值呈模型組-萬(wàn)通筋骨貼組-頸痛舒貼組-假手術(shù)組依次遞增趨勢(shì)。 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理表明，與模型對(duì)照組相比，頸痛舒貼各劑量組痛閾值有極其顯著性差異 （P＜0.001）， 提高率優(yōu)于萬(wàn)通筋骨貼組。

3.3 與神經(jīng)傳導(dǎo)密切相關(guān)的血清谷氨酸水平［8]大鼠 取 血 后，用 3 000 r/min 離 心 機(jī) 低 溫 離 心10 min， 分離血清， 采用南京建成生物工程研究所提供測(cè)試盒測(cè)定谷氨酸水平［9］。 取上清加入測(cè)定管，同時(shí)設(shè)空白管和標(biāo)準(zhǔn)管 （加入谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)液），上述各管依次加入試劑盒中的試劑二、試劑三、 試劑四和雙蒸水混勻， 340 nm處測(cè)定各管的OD值， 得到A1值。 各管加入試劑盒中試劑五， 混勻， 37 ℃水浴 40 min 后， 于 340 nm處測(cè)定各管OD值，得到 A2值。 將 OD值與對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線比對(duì)，得到樣品谷氨酸水平。對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行組間t檢驗(yàn)， 結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 頸痛舒貼片對(duì)頸椎病動(dòng)物模型谷氨酸水平的影響（， n=10）Tab.2 Effect of Jingtongshu Patch on glutam ic acid to animalmodels（， n=10）

表2 頸痛舒貼片對(duì)頸椎病動(dòng)物模型谷氨酸水平的影響（， n=10）Tab.2 Effect of Jingtongshu Patch on glutam ic acid to animalmodels（， n=10）

注： 與模型對(duì)照組比較，#P＜0.05

組別 劑量 /（ cm2·kg-1） 谷氨酸 /（ μmol·g-1）模型對(duì)照組 —795.1 ±69.9假手術(shù)組 — 668.8 ±41.8頸痛舒貼高劑量組 12.60 716.4 ±56.0#頸痛舒貼中劑量組 6.30 731.7 ±37.8#頸痛舒貼低劑量組 3.15 769.2 ±56.8萬(wàn)通筋骨貼組6.30 741.2 ±55.7

表2 可見(jiàn)， 谷氨酸水平呈假手術(shù)組-頸痛舒貼高劑量組-頸痛舒貼中劑量組-萬(wàn)通筋骨貼組-頸痛舒貼低劑量組-模型對(duì)照組依次遞增趨勢(shì)。 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理表明，與模型對(duì)照組相比，頸痛舒貼高劑量和中劑量組痛閾值有顯著性差異 （P＜0.05）。

3.4 神經(jīng)組織病理切片觀察結(jié)果 光學(xué)顯微鏡下觀察正常對(duì)照組大鼠的頸神經(jīng)切片，可見(jiàn)頸神經(jīng)神經(jīng)纖維細(xì)胞排列整齊、規(guī)則，神經(jīng)細(xì)胞無(wú)變性、壞死情況。模型對(duì)照組大鼠的頸神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)松散，排列紊亂，部分神經(jīng)細(xì)胞變性壞死、溶解、消失，有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，顯示出明顯的炎癥反應(yīng)；頸痛舒貼片組大鼠的病理切片與模型對(duì)照組相比，病變程度較輕，個(gè)別大鼠頸神經(jīng)有輕度充血、水腫、輕度炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。萬(wàn)通筋骨貼組頸神經(jīng)血管擴(kuò)張減輕，有輕度充血、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。光學(xué)顯微鏡下觀察模型的主要病理特征是頸神經(jīng)根的炎癥反應(yīng)。由于各組病變程度不同，采用半定量的方法，對(duì)炎細(xì)胞浸潤(rùn)程度進(jìn)行分級(jí)。分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為：0級(jí)，炎細(xì)胞偶見(jiàn)或無(wú)；Ⅰ級(jí)，炎細(xì)胞散在；Ⅱ級(jí)，炎細(xì)胞浸潤(rùn)呈灶簇狀。對(duì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見(jiàn)表 3、 圖1。

表3 頸痛舒貼片對(duì)頸椎病動(dòng)物模型的組織學(xué)影響 （，n=10）Tab.3 Effect of Jingtongshu Patch on histology to anim al models of cervical spondylosis（， n=10）

表3 頸痛舒貼片對(duì)頸椎病動(dòng)物模型的組織學(xué)影響 （，n=10）Tab.3 Effect of Jingtongshu Patch on histology to anim al models of cervical spondylosis（， n=10）

注： 與模型對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組別 動(dòng)物數(shù)/只 劑量/（ cm2·kg-1）炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度0級(jí) Ⅰ級(jí) Ⅱ級(jí)模型對(duì)照組 10 —0 1 9假手術(shù)組 10 — 8 2 0頸痛舒貼高劑量組 10 12.60 4 6 0##頸痛舒貼中劑量組 10 6.30 2 6 2#頸痛舒貼低劑量組 10 3.15 1 6 3#萬(wàn)通筋骨貼組 10 6.30 1 5 4#

圖1 頸痛舒貼片組織學(xué)病理照片F(xiàn)ig.1 H istological pathology images of Jingtongshu Patch

4 討論

祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為神經(jīng)根型頸椎病屬 “痹癥” 范疇， 《素問(wèn)·痹論》中指出 “風(fēng)、 寒、 濕三氣雜至合而為痹”，多因肝腎虧虛， 氣血不足，風(fēng)寒濕邪乘虛客于血脈，以致氣血閉阻，氣機(jī)不暢，不通則痛， 筋失所養(yǎng)， 而成此癥［10］。 素體虛弱、 肝腎虧虛、精虧不能濡養(yǎng)筋骨是引起神經(jīng)根型頸椎病的主要原因，臨床上多見(jiàn) “肝腎虧虛、氣血不足型”神經(jīng)根型頸椎病患者［11］。 西醫(yī)認(rèn)為， 神經(jīng)根型頸椎病主要是由頸椎骨質(zhì)增生、頸椎間盤退行性病變、椎間隙變窄、特別是患椎鉤突關(guān)節(jié)處骨贅深入椎間孔，壓迫或刺激脊神經(jīng)根，出現(xiàn)嚴(yán)重的疼痛現(xiàn)象［12］。 治療藥物分為西藥和中藥。 西藥尚無(wú)專屬藥物，多采用止痛劑、非甾體類消炎藥、甾體類消炎藥等藥物。但由于副作用較多，胃腸道副反應(yīng)明顯，限制了藥物的長(zhǎng)期應(yīng)用。尋找成本低，毒副作用小的治療神經(jīng)根型頸椎病的藥物，是一個(gè)迫切需要解決的課題。

中醫(yī)根據(jù)神經(jīng)根型頸椎病的發(fā)病機(jī)理，采用辨證施治法治療此病取得了顯著的療效，使中醫(yī)藥在治療此病方面逐漸發(fā)揮出明顯優(yōu)勢(shì)，特別是中藥的經(jīng)皮吸收制劑獲得廣泛應(yīng)用。經(jīng)皮給藥系統(tǒng)（Transdermal drug delivery system，TDDS） 系指經(jīng)皮膚敷貼方式給藥，藥物透過(guò)皮膚吸收進(jìn)入血液循環(huán)并達(dá)到有效血藥濃度，從而實(shí)現(xiàn)治療疾病的目的［13］。 它可以避免肝臟的首過(guò)效應(yīng)； 穩(wěn)定持久的維持血藥濃度，減少對(duì)胃腸道給藥刺激作用；用藥方便，適用于溶解度小，難以被機(jī)體吸收的藥物。頸痛舒貼片是課題組優(yōu)選處方、精心研制的一種新型的巴布膏劑，具有制劑穩(wěn)定，載藥量大，對(duì)皮膚無(wú)致敏性優(yōu)點(diǎn)［14］。 臨床上具有補(bǔ)肝腎、 活血通絡(luò)止痛的功效，用于治療神經(jīng)根型頸椎病引起的頸項(xiàng)僵硬、肩酸背痛、手足麻木等癥狀，效果顯著。處方中君藥淫羊藿補(bǔ)腎陽(yáng)，強(qiáng)筋骨，祛風(fēng)濕；臣藥赤芍清熱涼血，散瘀止痛；其他藥物中黃芪補(bǔ)氣固表，桂枝溫經(jīng)通脈，紅花可通行血脈。諸藥配伍，使得肝腎得以滋補(bǔ)，筋骨得以強(qiáng)健，寒濕得以清除，氣機(jī)調(diào)達(dá)，諸癥皆除，臨床治療 “肝腎虧虛型”神經(jīng)根頸椎病具有很好的療效。

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，頸痛舒貼片可以明顯提高神經(jīng)根頸椎病大鼠模型的壓足痛閾值。神經(jīng)根頸椎病發(fā)生后，谷氨酸水平增高，引起谷氨酸受體活性發(fā)生異常，進(jìn)而導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞的損傷，頸痛舒貼能夠降神經(jīng)根型頸椎病動(dòng)物模型谷氨酸水平，從而保護(hù)頸神經(jīng)功能，減輕疼痛發(fā)生。改善神經(jīng)根病變程度，有效改善模型動(dòng)物行為學(xué)方面的變化，具有消除炎癥、消腫止痛，促進(jìn)頸神經(jīng)功能恢復(fù)的作用［15］， 符合中醫(yī)理論對(duì)于 “ 肝腎虧虛型” 頸椎病的辨證分 析［16-17］， 為 進(jìn)一 步 開(kāi) 發(fā)治 療 神 經(jīng)根 型 頸椎病的中藥新藥奠定基礎(chǔ)。

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Effect of Jingtongshu Patch on rat’s radiculopathy pain

SHIBin1，2， WANG Ping3， SIShu-yuan4
（1.Wangjing Hospital of China Academy of ChineseMedicine Sciences， Beijing 100102， Chiana； 2.Hospital Affiliated to Shandong Academy of Medical Sciences， Jinan 250003， China； 3.Shandong Academy of Chinese Medicine， Jinan 250014， China； 4.The People’ s Hospital of Huaiyin， Jinan 250014， China）

AIM To study effects of Jingtongshu Patch on cervical spondylotic ridiculopathy pain response in rats.M ETHODS The static-dynamic couplingmodel of rats with cervical spondylosis was established.Jingtongshu Patch was given to rats， their pathological and histological observation of cervical nerve rootwere performed. Rats autonomic activity status and the therapeutic effecton nerve root inflammation were recorded， and the change of glutamic acid was recorded， because itwas relevant to nerve conduction.RESULTS Jingtongshu Patch significantly enhanced the rat’ s behavior recovery， improved the models’ foot pain threshold， reduced serum glutamic acid content， and improved the degree of nerve root lesions.CONCLUSION Jingtongshu Patch can treat the nerve root pain in rats.

Jingtongshu Patch； cervical spondylotic ridiculopthy； pain

R285.5

： A

： 1001-1528（2014）05-0913-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.05.006

2013-04-20

山東省科技攻關(guān)計(jì)劃 （2010GSF10278）； 山東省自主創(chuàng)新重大專項(xiàng) （012ZHZX1C0405）； 濟(jì)南市科技明星計(jì)劃 （2012）

師 彬 （1969—）， 男， 博士， 主任醫(yī)師， 博士生導(dǎo)師。 研究方向： 脊源性疾病的藥物及手法治療。 Tel： 13173056999，Email： sdyky-shibin@163.com