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    microRNA-21在老年肝細胞癌中的表達及臨床意義

    2014-04-08 11:39:18陸振華周亞星
    中國腫瘤外科雜志 2014年5期
    關(guān)鍵詞:癌基因乙肝肝細胞

    陸振華,周亞星

    肝細胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是最常見的惡性腫瘤之一,其中80%~90%為原發(fā)性肝細胞肝癌,全世界每年大約有1 000 000人死于肝癌,其中老年人是高發(fā)人群[1]。目前認為,肝癌最主要是由病毒感染所致[2]。當(dāng)前,肝癌的發(fā)病機制尚未十分明了,人們普遍認為抑癌基因的異常失活或癌基因的激活是導(dǎo)致肝癌發(fā)生的主要原因。microRNA(miRNA)是一類新近發(fā)現(xiàn)的長度為17~25個核昔酸的非編碼小分子RNA。研究發(fā)現(xiàn),miRNA在腫瘤致病過程中起著及其重要的調(diào)節(jié)功能,且其與腫瘤分化有密切關(guān)系[3]。miRNA-21是較早發(fā)現(xiàn)的的人類miRNA之一,其在胰腺癌、卵巢癌等惡性腫瘤血漿中明顯上調(diào),但是,miRNA-21在原發(fā)性肝細胞癌患者組織以及血漿中的報道尚少。本研究對比了miRNA-21在老年肝細胞癌及對應(yīng)癌旁組織與乙肝肝硬化患者中的表達,分析其在肝細胞癌中的表達水平及其與臨床病理特征的聯(lián)系,探討其在老年肝細胞癌診治及預(yù)后方面的意義。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料 所有組織來源于2011年8月至2013年8月期間在泰州市人民醫(yī)院治療的老年患者的手術(shù)切除標(biāo)本。其中,研究組30例,其中男13例,女17例,年齡62~78歲,平均年齡(68.12±7.20)歲。HbsAg均為陽性,術(shù)前均未經(jīng)任何介入或化療等任何處理,所有患者均接受肝癌根治性切除手術(shù)處理,所有組織標(biāo)本經(jīng)術(shù)后病理學(xué)證實為肝細胞癌,分別取肝癌及對應(yīng)癌旁組織待用。HCC組織根據(jù)Edmondson標(biāo)準(zhǔn)分級:Ⅰ級8例;Ⅱ級12例;Ⅲ級10例;Ⅳ級10例。對照組為同期乙肝肝硬化患者30例,其中男15例,女15例,年齡64~79歲,平均年齡(69.23±7.16)歲,HbsAg均為陽性,經(jīng)病理診斷為肝硬化。兩組的性別、年齡等臨床資料相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05),具有可比性。所有標(biāo)本于術(shù)中離體30 min內(nèi)取材,經(jīng)10%福爾馬林溶液固定,石蠟包埋、切片備用。

    1.2 主要試劑 RNA提取試劑盒Trizol購于Gibco公司;逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購于Femantes公司;DNA Marker、PCR試劑盒、焦碳酸二乙脂(DEPC)均購于生興生化科技(南京)有限公司。miRNA-21及U6內(nèi)參的引物均由廣州銳博生物科技有限公司設(shè)計并提供。

    1.3 組織及血漿標(biāo)本總RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng) 研究組術(shù)中取肝癌及對應(yīng)癌旁組織;對照組取肝硬化組織。此外,清晨空腹時抽取各研究對象的外周靜脈血5 ml,加入EDTA抗凝劑,2 h內(nèi)予高速離心,離心條件為:4 ℃,4 000 g,5 min。離心后提取上層血漿置EP管中放入-80 ℃保存?zhèn)溆?。取約100 mg組織或250 μl血漿,加入1 ml Trizol,充分勻漿,抽提總RNA,所得RNA溶于20 μl DEPC處理水。提取的總RNA經(jīng)紫外分光光度計進行定量及檢測純度。進一步用Femantes逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進行逆轉(zhuǎn)錄,cDNA產(chǎn)物-20 ℃保存?zhèn)溆?。PCR反應(yīng)條件:95℃變性20 s,然后60℃ 20 s和70℃ 1s進行40個循環(huán)。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行分析,本組資料以表示,組間比較采用t檢驗,相關(guān)分析采用Spearman相關(guān)分析,以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 肝癌組織及對應(yīng)癌旁以及乙肝肝硬化組織中miRNA-21的表達水平 具體數(shù)據(jù)見表1。由表1可見,與乙肝肝硬化組織比較,miRNA-21在癌旁組織中的mRNA表達水平顯著增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=15.72,P<0.05);與癌旁組織比較,miRNA-21在肝癌組織中mRNA的表達水平顯著增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=9.66,P<0.05)。

    表1 肝癌及對應(yīng)癌旁及乙肝肝硬化組織中miRNA-21 mRNA的表達水平

    2.2 肝癌以及乙肝肝硬化患者血漿中miRNA-21 mRNA的表達水平 具體數(shù)據(jù)見表2。由表2可見,miRNA-21在肝癌患者血漿中mRNA表達水平顯著高于乙肝肝硬化患者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=17.98,P<0.05)。

    表2 肝癌患者以及乙肝肝硬化患者血漿中microRNA-21 mRNA的表達

    2.3 肝癌組織及血漿中miRNA-21表達水平與肝癌組織病理分級的相關(guān)性 進一步采用相關(guān)分析結(jié)果顯示肝癌組織中miRNA-21 mRNA表達水平與HCC分化程度顯著正相關(guān)(r=0.685,P<0.05),而肝癌患者癌旁組織中miRNA-21 mRNA表達水平與與HCC分化程度均無顯著相關(guān)(r=0.125,P>0.05),見表3。血漿中miRNA-21 mRNA表達水平與HCC分化程度顯著正相關(guān)(r=0.603,P<0.05),見表4。

    表3 組織中miRNA-21 mRNA表達強度與HCC分化程度的關(guān)系

    表4 血漿中miRNA-21 mRNA表達強度與HCC分化程度的關(guān)系

    3 討論

    miRNA廣泛的存在于組織、血漿或血清以及其他體液中,由于不易被內(nèi)源性的核糖核酸酶所降解,其在體內(nèi)表達比較穩(wěn)定。研究發(fā)現(xiàn)miRNA既具有抑癌基因又具有癌基因的特性,其可對一系列重要的抑癌或者促癌基因的起著重要的調(diào)控作用[4]。研究發(fā)現(xiàn)miRNA-21與乳腺癌、胰腺癌、肺癌、多形性惡性膠質(zhì)瘤、胃癌、結(jié)直腸癌等存在高度相關(guān)性,在惡性腫瘤中起著癌基因的重要功能[5-7]。進一步說明了miRNA-21在多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)后中具有及其重要的作用。

    原發(fā)性肝細胞癌的發(fā)生發(fā)展是一個涉及到多基因、多通路、多步驟的復(fù)雜過程。一般認為導(dǎo)致肝癌發(fā)生的主要原因為抑癌基因的異常失活或者致癌基因的激活,然而其具體機制尚不清楚。本研究通過檢測miRNA-21在老年肝癌患者肝組織及對應(yīng)癌旁組織中的表達發(fā)現(xiàn),miRNA-21在肝癌組織中的表達水平均顯著高于對應(yīng)的癌旁組織以及肝硬化患者,其在肝癌組織中的表達與肝癌Edmonson分級顯著相關(guān)。此外,患者血漿中miRNA-21表達水平亦與肝癌的臨床分期顯著正相關(guān),均說明了miRNA-21在肝癌患者癌組織以及血漿中的表達程度與肝癌的細胞的增殖能力和惡性程度有著密切的聯(lián)系,從而提示了miRNA-21在肝癌的診斷、分級以及預(yù)后評價可能起著重要的作用。Meng等[8]在分析肝癌組織表達譜時發(fā)現(xiàn)miRNA-21較對照組顯著上調(diào),并從體外實驗進一步發(fā)現(xiàn)miRNA-21能增強肝癌細胞的增殖及侵襲能力,這與本研究研究結(jié)果一致。

    綜上所述,miRNA-21在肝細胞癌的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用,老年肝癌患者癌組織以及血清中miRNA-21的檢測對于對患者臨床個體化治療以及預(yù)后可能具有一定的指導(dǎo)意義。

    參考文獻:

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    [5] 張益,周總光,王玲,等.miR-21和miR-125在結(jié)直腸癌中的表達及其與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系[J].中華胃腸外科雜志,2009,12(6):623-626.

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