動物性食品中B-受體激動劑類殘留檢測方法研究進展

申惠敏 杜 娟 （山西省長治市畜牧獸醫(yī)局 046000）賈秀珍 （山西省長治市城區(qū)農(nóng)林委）

動物性食品中B-受體激動劑類殘留檢測方法研究進展

申惠敏 杜 娟 （山西省長治市畜牧獸醫(yī)局 046000）賈秀珍 （山西省長治市城區(qū)農(nóng)林委）

食品安全是當今中國乃至世界普遍關注的問題，食品安全尤其以農(nóng)產(chǎn)品中動物性食品最為引人注目?！笆萑饩睍r間的影響，已引起足夠的重視。畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測，在畜產(chǎn)品安全中起無可替代的重要作用，是保障人們吃的放心的一項強有力手段。B-受體激動劑類殘留檢測，現(xiàn)已提到了相當高度，在畜產(chǎn)品殘留檢測占較大份額，檢測方法發(fā)展也很快，相應快速檢測卡、試劑盒產(chǎn)品開發(fā)也能基本滿足檢測需求，B-受體激動劑確證方法也已建立，基本上形成了現(xiàn)場快速檢測、大批量篩查、實驗室儀器確證的完整體系，但B-興奮劑類殘留檢測不能避免地還存在這樣那樣的不足，方法有待改進、體系有待完善。本文就B-受體激動劑類殘留檢測方法進行了深入、細致研究，對各種方法的優(yōu)缺點、應用情況進行了論述，對其存在的問題進行了探討，希望在未來的工作中，進一步完善相關方法規(guī)程、制度體系、法律法規(guī)，為確保畜禽產(chǎn)品安全、保證畜牧業(yè)健康發(fā)展、保護廣大人民群眾身體健康和生命安全作出更大的貢獻。

我國是一個畜牧業(yè)生產(chǎn)大國，畜產(chǎn)品質(zhì)量安全關系著人民身體健康、社會穩(wěn)定，近年頻發(fā)的食品安全事件，大部分是肉蛋奶等與人們生活息息相關的畜產(chǎn)品。畜產(chǎn)品安全形勢緊迫，畜產(chǎn)品檢測能提高畜產(chǎn)品質(zhì)量，保護廣大消費者身體健康，促進畜產(chǎn)品出口等[1]。

1 畜產(chǎn)品質(zhì)量檢測存在的問題

畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測，通過例行監(jiān)測、監(jiān)督抽查、風險評估、監(jiān)測預警和日常檢測等，在畜產(chǎn)品質(zhì)量安全中具有舉足輕重的作用。為努力確保不發(fā)生重大畜產(chǎn)品質(zhì)量安全事件，必須建立健全畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗檢測體系。但是，我國的畜牧獸醫(yī)產(chǎn)品質(zhì)量檢測機構還普遍存在體系不健全、技術人員不足等問題，難以適應農(nóng)產(chǎn)品國內(nèi)外貿(mào)易對質(zhì)量安全檢驗檢測工作的需要，影響畜牧獸醫(yī)產(chǎn)品質(zhì)量安全水平的提高和擴大出口，還遠遠不能適應農(nóng)業(yè)和農(nóng)村經(jīng)濟發(fā)展雞國際貿(mào)易的需要。存在的主要問題：（1）部分大型儀器設備型號比較老化和陳舊，缺乏國際上通用的確證法所必須的儀器設備(如氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀等)；（2）樣品前處理所需要的中小型儀器設備不夠完善，缺乏快速、全面、安全可靠的提取和凈化手段和設備，工作效率低下，檢測范圍有限。（3）實驗室環(huán)境設施不夠完善，環(huán)境保護、人員保護設施相對缺乏或落后[2]。

2 檢測B興奮劑的方法

B興奮劑類，是指能夠促進瘦肉生長、抑制肥肉生長的一類藥物，也叫“瘦肉精”，瘦肉精添加于飼料中，可以增加動物的瘦肉量、使肉品提早上市、降低成本等。但因其對人體的各種毒副作用，各種已禁止使用，屬于違禁添加物。目前，檢測動物性食品中B興奮劑類殘留的方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLC-MS)、毛細管區(qū)帶電泳法(CZE)和免疫分析技術(IA)五大類。 其中20世紀80年代開始應用于獸藥殘留分析的免疫分析技術，類別最多，包括酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)、量子點熒光免疫分析法(cFLISA)、放射免疫分析法(RIA)、熒光偏振免疫分析法(FPIA)、熒光免疫分析法(FIA)、時間分辨熒光免疫分析法(TRFIA)、膠體金免疫層析法(GICA)及蛋白質(zhì)芯片技術等。廣泛應用于檢測實踐的方法有膠體金免疫層析法、酶聯(lián)免疫吸附法、高效液相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法、液質(zhì)聯(lián)用法。膠體金免疫層析法廣泛應用于快速檢測，酶聯(lián)免疫法多用于現(xiàn)場監(jiān)控和大批量樣本篩查，高效液相色譜法用于半確證，液質(zhì)、氣質(zhì)用于定量、確證、仲裁等[3]。

2.1 膠體金免疫層析法 膠體金免疫層析法，為競爭性抑制法。氯金酸還原制成一定直徑的金溶膠顆粒，標記抗體。利用硝酸纖維素微孔膜載體的毛細管作用，吸附液體向另一端滲移。移動過程中，樣本中的B受體激動劑與膠體金標記的特異性單克隆抗體結合，抑制了抗體和硝酸纖維素膜檢測線上B受體激動劑-BSA偶聯(lián)物的結合，檢測線不顯色，結果為陽性；反之，檢測線顯紅色，結果為陰性。主要用于快速檢測動物尿液中B受體激動劑。NY/T 933-2005規(guī)定了動物尿液中克倫特羅的測定，判定標準為不出現(xiàn)紅色條帶為陽性(≥3ng/ml)，陽性樣品應用質(zhì)譜方法進行確認。

2.2 酶聯(lián)免疫吸附法 目前大部分B受體激動劑類均可采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法進行測定(GB/T 5009.192-2003動物性食品中克倫特羅殘留量的測定)。ELISA法具有靈敏度高、快速、特異性強的特點，所需儀器化程度低，樣品前處理相對簡單。可定性、定量檢測動物組織(肌肉、肝臟)尿液等樣品中B受體激動劑類的殘留，適合基層大批量樣本篩查，ELISA法是快速篩選方法，會受到壞境溫度、樣品前處理誤差、樣品溶液與標準溶液的一致性、測定波長、試劑有效期、操作不當?shù)扔绊?，有可能引起假陽性出現(xiàn)，因此對于用該方法檢測到的陽性樣品一定要用其他方法進行確證，以排除假陽性結果[4]。

2.3 高效液相色譜法 高效液相色譜(HPLC)法，分離度好、專屬性強，應用成本相對較低，但需要專門儀器和熟練技術的分析人員，而且需要樣品前處理和高純度的化學試劑。樣品前處理及測定操作繁瑣、費用高，推廣普及受限制，較難檢測大批量樣品，同樣存在假陽性率偏高等問題。HPLC法為B受體激動劑類的半確證方法(GB/T 5009.192-2003動物性食品中克倫特羅殘留量的測定)[5]。

2.4 氣質(zhì)聯(lián)用法 氣相色譜(GC—MS)法把色譜高效快速的分離效果和質(zhì)譜高靈敏度的定性分析有機結合起來，能在多種殘留物同時存在的情況下對某種特定的殘留物進行定性、定量分析，與HPLC法相比，檢測靈敏度更高，假陽性率更低。但GC-MS多用于揮發(fā)性成分檢測，前處理需要衍生化，步驟繁瑣、樣品回收率得不到保證，檢測耗時較多，現(xiàn)已很少用于B受體激動劑類確證(GB/T 5009.192-2003動物性食品中克倫特羅殘留量的測定)。

2.5 液質(zhì)聯(lián)用法 GB/T 21313-2007動物源性食品中B-受體激動劑殘留檢測方法，規(guī)定了B-受體激動劑類獸藥殘留檢測的制樣方法和液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜確證方法，該方法因具有快速、準確、靈敏度高、分析周期短、適用范圍廣等優(yōu)點而被普遍使用，液質(zhì)聯(lián)用法被越來越多地用作動物源性食品中B-受體激動劑類殘留的確證方法。

3 總結

近年來，畜產(chǎn)品安全檢測方法、相關標準不斷完善，為檢測工作帶來了極大方便，也更有利于保障畜產(chǎn)品質(zhì)量安全，現(xiàn)場快速檢測(快檢卡法)及基層篩查檢測(試劑盒法) 優(yōu)點是操作簡單、時間短、成本低，適合在現(xiàn)場進行大量樣品的快速篩查，但結果受外在因素影響大，容易出現(xiàn)“假陽性”，不能作為確證、執(zhí)法依據(jù)，快速篩查法缺乏統(tǒng)一標準，試劑盒廠家所生產(chǎn)試劑盒靈敏度、檢測限、定量限等無統(tǒng)一規(guī)范，試劑盒批內(nèi)、批間變異較大，導致檢測結果穩(wěn)定性、重復性不好，檢測標準老舊、不完善等。沒有建立金標卡現(xiàn)場檢測、酶聯(lián)免疫法大批量篩查、液質(zhì)確證的檢測體系、機制，相關方法標準不健全。例行監(jiān)測、監(jiān)督抽查等檢測計劃制定不合理，不能很好地覆蓋廣大畜產(chǎn)品消費市場，起到風險評估、預警作用。

今后，相關部門需加快制定相應檢測方法、操作規(guī)程，完善相關法律法規(guī)，各級檢測機構科學分配監(jiān)測任務、合理分工配合、各負其責，共同為確保畜禽產(chǎn)品安全添磚加瓦，為保證畜牧業(yè)健康發(fā)展保駕護航，為保護廣大人民群眾身體健康和生命安全貢獻力量。

[1] 邢應壽等. ELISA技術在畜產(chǎn)品安全檢測中的應用[J]. 動物醫(yī)學進展, 2004,25(3): 19-22.

[2] 申惠敏. 影響畜產(chǎn)品質(zhì)量安全的因素及對策[J]. 中國動物保健. 2013(1): 1-3.

[3] 呂珍珍. 免疫分析技術在獸藥殘留檢測中的應用[J]. 農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全, 2012, 76-78.

[4] 萬美梅. ELISA法在畜產(chǎn)品安全檢測中的應用及其注意事項[J]. 廣東飼料. 2008, 1(17): 34-35.

[5] 劉平年. HPLC-DAD法測定豬肝中的鹽酸克倫特羅[J]. 化學分析計量. 2005,5(14): 33-35.

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