微柱凝膠卡式法在臨床輸血中的應(yīng)用價(jià)值分析

葉巧國，張衛(wèi)良，盧德權(quán)，楊毓，何靜，李交，梁麗雯

(1、佛山市順德區(qū)第一人民醫(yī)院附屬陳村醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 佛山 528300；2、廣州市白云區(qū)中醫(yī)醫(yī)院；3、廣州醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院；4、佛山市順德區(qū)中心血站)

隨著輸血醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，輸血已經(jīng)成為了臨床一種特殊治療和搶救生命的重要措施，傳統(tǒng)的交叉配血方法有鹽水法、酶法、聚凝胺法等，這些方法靈敏度低，操作繁瑣，耗時(shí)長，影響因素多，嚴(yán)重影響了受血者的輸血安全，引起了臨床的高度重視。微柱凝膠技術(shù)是近年來國際公認(rèn)的安全輸血的推薦方法,該法克服了傳統(tǒng)方法的種種缺陷，安全、快速、靈敏，為臨床安全輸血提供了很好的保障,已成為許多發(fā)達(dá)國家血型血清學(xué)檢測(cè)的常規(guī)技術(shù)，我國目前已逐步推廣使用。我院自2009年引入該技術(shù)，現(xiàn)對(duì)2012年5月至2013年8月有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需多次輸血的備血、配血標(biāo)本932例，采用微柱凝膠卡式法進(jìn)行不規(guī)則抗體檢測(cè)和交叉配血，結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象 2012年5月至2013年8月我院有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需多次輸血者的備血和配血標(biāo)本932例，其中男529例，女403例，其中：有輸血史的681例，有妊娠史的87例，短期內(nèi)需多次輸血者6例，另外，有輸血史+妊娠史的有29例，有輸血史+短期內(nèi)需多次輸血的有127例，有輸血史+妊娠史+短期內(nèi)需多次輸血的共有2例，年齡為21d至92歲。

1.2 主要試劑與儀器 ABO、Rh(D)血型定型檢測(cè)卡、微柱凝膠抗人球蛋白檢測(cè)卡(中山市生科試劑儀器有限公司)；ABO血型反定型用紅細(xì)胞試劑盒、抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒、譜細(xì)胞(上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司,批號(hào)：20125704)；FYQ型免疫微柱孵育器，TD-2Y醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)多功能離心機(jī)。

1.3 標(biāo)本要求 抗體篩選、交叉配血采用EDTA抗凝的新鮮血樣，血量不少于3ml，不規(guī)則抗體鑒定血量至少5ml；疑難交叉配血要求送檢EDTA抗凝血和不抗凝血各一管，血量均不少于3ml(2～8℃，48h內(nèi))，不得使用溶血和高脂血標(biāo)本。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 對(duì)932例備血、配血標(biāo)本在交叉配血前先用微柱凝膠抗人球蛋白檢測(cè)卡進(jìn)行不規(guī)則抗體篩檢，篩檢結(jié)果的判定參照篩選紅細(xì)胞試劑盒說明書的結(jié)果判定示意圖，篩檢結(jié)果呈陰性的輸血者，進(jìn)一步做交叉配血實(shí)驗(yàn)。

1.4.2 不規(guī)則抗體篩檢呈陽性，或篩檢呈陰性但交叉配血主側(cè)凝集者，對(duì)患者血樣進(jìn)行抗體特異性鑒定，鑒定結(jié)果比對(duì)譜細(xì)胞的細(xì)胞反應(yīng)格局圖，分析出抗體類型，再選取抗體相應(yīng)抗原為陰性的同型供血者與患者進(jìn)行交叉配血實(shí)驗(yàn)。

1.4.3 交叉配血次側(cè)凝集者，對(duì)患者紅細(xì)胞加做直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)以檢測(cè)紅細(xì)胞是否被血型抗體致敏，同時(shí)對(duì)供血者血漿進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查。上述各操作步驟嚴(yán)格按照微柱凝膠卡說明書和 《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》進(jìn)行。

2 結(jié)果

在932例備血、配血標(biāo)本中，共篩檢出不規(guī)則抗體3例(0.32%)，經(jīng)特異性鑒定，檢出抗-E 2例(0.21%)，抗-c 1例(0.11%)，選取不規(guī)則抗體相應(yīng)抗原陰性的供血者與該3名患者進(jìn)行交叉配血，配血成功。同時(shí)交叉配血次側(cè)凝集的有3例，其中2例直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性，表明患者的紅細(xì)胞已被血型抗體致敏，另1例為血清蛋白紊亂及白/球蛋白比例倒置引起的假凝集；交叉配血主、次側(cè)均凝集的有2例，由患者自身抗體所引起。

3 討論

微柱凝膠卡式法是微柱凝膠技術(shù)與免疫血清學(xué)技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物，是近年發(fā)展起來的一種新型免疫檢測(cè)方法,與傳統(tǒng)方法相比，微柱凝膠法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、結(jié)果直觀準(zhǔn)確且可長期保存、能自動(dòng)化操作、影響因素少的特點(diǎn)。在靈敏度上，比聚凝胺法高出2～4個(gè)滴度，比抗人球蛋白、酶法高出3-6個(gè)滴度[1]。在特異性上，傳統(tǒng)的試驗(yàn)方法對(duì)一些弱的抗體檢出率較低，易漏檢，且對(duì)部分血型系統(tǒng)的抗體檢測(cè)不了，鹽水法甚至只能檢測(cè)IgM抗體，而微柱凝膠法則可同時(shí)檢測(cè)出IgM和IgG抗體，并能捕捉到傳統(tǒng)方法無法檢測(cè)到的微弱的抗原抗體反應(yīng)，很好地保障了臨床的輸血安全。

不規(guī)則抗體的產(chǎn)生多見于Rh系統(tǒng)，是引起遲發(fā)型溶血性輸血反應(yīng)、新生兒溶血病以及引起交叉配血不合的重要原因，據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，由不規(guī)則抗體導(dǎo)致的交叉配血不合占總數(shù)的60%以上[2]，而輸血、妊娠等是不規(guī)則抗體產(chǎn)生的主要原因。據(jù)報(bào)道，每輸1U血液使受血者紅細(xì)胞致敏的風(fēng)險(xiǎn)為1%～1.6%，多次輸血產(chǎn)生同種抗體的概率為15%～20%，約80%以上Rh陰性受血者在接受Rh陽性血液后的2～5個(gè)月內(nèi)能產(chǎn)生抗體，如經(jīng)再次免疫，因“回憶反應(yīng)”，3周內(nèi)抗體濃度即可達(dá)到高峰[3]。因此，對(duì)需輸血治療的患者、孕婦，尤其是有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需多次輸血者進(jìn)行不規(guī)則抗體的篩查，通過早期發(fā)現(xiàn)和確認(rèn)具有臨床意義的抗體并在配血前鑒定此抗體，一來可獲得充足的時(shí)間來選擇與患者相配合的血液，避免因?qū)ふ也坏较嗪系难炊诱`治療，二來孕婦可以在孕期進(jìn)行新生兒溶血病的預(yù)防和治療，這對(duì)優(yōu)生優(yōu)育具有重要價(jià)值。

在本研究中，筆者對(duì)有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需多次輸血者這些不規(guī)則抗體產(chǎn)生的主要因素進(jìn)行分析，共篩檢出不規(guī)則抗體3例，檢出率為0.32%，接近于鄭三等[4]采用微柱凝膠法得出的0.29%檢出率，在有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的正常人群中檢出率0.3%～2%[5]的范圍內(nèi)。此3例患者均有輸血史或妊娠史，在交叉配血時(shí)，均表現(xiàn)為主側(cè)凝集次側(cè)無凝集，經(jīng)鑒定抗體特異性，證實(shí)為抗-E 2例，抗-c 1例。雖然不規(guī)則抗體在正常人群中的檢出率很低，但不規(guī)則抗體陽性的患者一旦輸入具有相應(yīng)抗原紅細(xì)胞，抗原抗體發(fā)生免疫結(jié)合，在補(bǔ)體的參與下使輸入的紅細(xì)胞發(fā)生溶血，引起溶血性輸血反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)危及患者的性命，這應(yīng)引起臨床的高度重視。在輸血對(duì)策上，應(yīng)選取不規(guī)則抗體相應(yīng)抗原陰性的供血者與患者進(jìn)行交叉配血及輸注。

同時(shí)，在交叉配血實(shí)驗(yàn)中，有2例主、次側(cè)及自身對(duì)照均發(fā)生凝集，由患者自身抗體所引起。自身抗體分為溫抗體和冷抗體，前者主要見于自身免疫性疾病，后者則多見于冷凝集素綜合征、支原體肺炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥等。在輸血對(duì)策上，自身抗體患者應(yīng)盡量避免輸血，因?yàn)檩斞赡苷T發(fā)嚴(yán)重的溶血性輸血反應(yīng)，如確需輸血，溫抗體患者采取的方法是用多個(gè)供血者與之交叉，取相對(duì)凝集最弱的供血者紅細(xì)胞給予洗滌后輸注，且成人每次輸注不超過2個(gè)單位[6]。冷抗體患者須在溫暖環(huán)境中或使用輸血加溫器將同型洗滌紅細(xì)胞加溫后緩慢輸注。在輸注過程中，均需密切觀察患者病情，注意有無溶血現(xiàn)象發(fā)生，如發(fā)生輸血反應(yīng)，應(yīng)立即停止輸血，進(jìn)行有效的處理，以確保病人生命安全。

交叉配血次側(cè)出現(xiàn)凝集較為常見，原因也較為復(fù)雜，需結(jié)合臨床資料進(jìn)行分析。本文共有3例交叉配血僅次側(cè)發(fā)生凝集，對(duì)供血者的不規(guī)則抗體篩查均為陰性，這排除了由供血者引起凝集的可能性，對(duì)患者紅細(xì)胞進(jìn)行直接抗人球蛋白試驗(yàn)，其中2例直抗陽性，表明受血者的紅細(xì)胞已經(jīng)包被了血型抗體，這是引起次側(cè)凝集最常見的原因，主要見于溶貧、再障、多發(fā)性骨髓瘤以及反復(fù)輸血尤其是輸注大量血漿的患者，輸血時(shí)可輸注同型洗滌紅細(xì)胞。次側(cè)凝集直抗陰性的病例，為血清蛋白紊亂及白/球蛋白比例倒置引起的假凝集，多見于腎臟疾病、肝膽疾病的患者，一些腫瘤癌癥、白血病、上消化道出血、貧血的患者，在交叉配血時(shí)也易引起假凝集[7]。另外，藥物免疫性抗體、供血者血漿中存在針對(duì)病人紅細(xì)胞抗原的抗體，亦是引起次側(cè)凝集的常見原因。

不規(guī)則抗體篩查試驗(yàn)在臨床輸血中是很有價(jià)值的，但仍有其局限性：一是低頻率抗原的抗體或有劑量效應(yīng)的抗體，可能被漏檢，二是以往免疫的抗體已降到難以檢測(cè)的水平，因此抗體篩選試驗(yàn)不一定能檢出所有有臨床意義的抗體，受血者以往的抗體鑒定記錄有重要參考價(jià)值，或者安排抗原性更完全和特異性更強(qiáng)的篩選細(xì)胞或敏感度更高的技術(shù)做試驗(yàn)[8]。也有國外的一些學(xué)者認(rèn)為采用一組譜細(xì)胞進(jìn)行抗體鑒定有一定的局限性，有可能漏檢常見的組合抗體，建議采用兩組譜細(xì)胞以提高組合抗體的檢出率。同時(shí)，輸血安全涉及從獻(xiàn)血者靜脈到受血者靜脈整個(gè)輸血鏈各個(gè)環(huán)節(jié)的安全，必須采取各項(xiàng)綜合措施嚴(yán)格管理和監(jiān)控[9]，有條件的血液中心/血站，亦應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)對(duì)獻(xiàn)血者尤其是有輸血史或妊娠史的首次獻(xiàn)血者血清/血漿不規(guī)則抗體的篩選工作，以減少不規(guī)則抗體進(jìn)入受血者體內(nèi)的可能性，保障受血者的輸血安全。

綜上所述，不規(guī)則抗體篩查應(yīng)作為輸血前檢查的常規(guī)項(xiàng)目，尤其是對(duì)有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需多次輸血者非常重要，而微柱凝膠檢測(cè)技術(shù)作為國際公認(rèn)的安全輸血的推薦方法，使不規(guī)則抗體檢測(cè)理論金標(biāo)準(zhǔn)成為臨床金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)降低和避免溶血性輸血反應(yīng)、新生兒溶血病，保證臨床輸血安全具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

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