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    KIR3DL1分子遺傳多態(tài)性及其與疾病關聯(lián)的研究進展

    2014-04-04 11:15:58陳達香鄧志輝綜述喻瓊審校
    實驗與檢驗醫(yī)學 2014年4期
    關鍵詞:配體等位基因結(jié)構域

    陳達香,鄧志輝綜述,喻瓊審校

    (1、大連醫(yī)科大學,遼寧大連116044;2、深圳血液中心,廣東深圳518035)

    ·綜述·

    KIR3DL1分子遺傳多態(tài)性及其與疾病關聯(lián)的研究進展

    陳達香1,鄧志輝2綜述,喻瓊2審校

    (1、大連醫(yī)科大學,遼寧大連116044;2、深圳血液中心,廣東深圳518035)

    殺傷細胞免疫球蛋白樣受體(KIRs)是表達于人類NK細胞和部分T細胞表面的一類重要受體,KIR分子配體主要為HLA-I類分子,二者共同調(diào)節(jié)NK細胞的活性。KIR基因家族包含了14個功能性框架基因和2個假基因。功能性KIR3DL1框架基因編碼抑制型受體,該受體與靶細胞表面的HLA-Bw4-80I結(jié)合,傳導抑制信號;其分子遺傳多態(tài)性主要體現(xiàn)在等位基因、單倍型組成、群體差異等不同水平層次。當前KIR3DL1常規(guī)檢測方法包括序列特異性引物-PCR(PCR-SSP)、流式磁珠序列特異性寡核苷酸探針(Flow-rSSO)分析及測序分型技術(PCR-SBT)。迄今已發(fā)現(xiàn)KIR3DL1框架基因與乙型肝炎、HIV-1感染等病毒感染性疾病相關聯(lián)。

    KIR3DL1;框架基因;多態(tài)性;病毒感染性疾病

    天然殺傷細胞(natural killer cell,NK)是機體固有免疫系統(tǒng)的重要組成部分,近年來NK細胞的免疫調(diào)節(jié)作用受到人們的廣泛關注。殺傷細胞免疫球蛋白樣受體(killer cell immunoglobulin-like receptors,KIRs)是表達于人類NK細胞表面和部分T細胞表面的一類重要受體,通過與靶細胞表面相應的HLA-I類分子結(jié)合,傳導激活或抑制信號,調(diào)節(jié)NK細胞活性。KIR3DL1是其中的一員,與特異配體結(jié)合后傳遞抑制信號,抑制NK細胞的殺傷作用。KIR3DL1基因具有高度多態(tài)性,本文就KIR3DL1基因結(jié)構、配體、等位基因命名方式、分子遺傳多態(tài)性、分型方法及其與疾病的關聯(lián)等方面的研究進展作一綜述。

    1 KIR3DL1的分子結(jié)構

    KIR3DL1分子為I型跨膜糖蛋白,包括胞內(nèi)區(qū)、跨膜區(qū)及胞外區(qū)。KIR3DL1胞質(zhì)區(qū)的胞漿結(jié)構域較長,有2個免疫受體酪氨酸抑制性基序(ITIM),當ITIM發(fā)生磷酸化時,可募集磷酸酶SHP-1和SHP-2,導致細胞活化底物的去磷酸化,從而下調(diào)NK細胞的活性。胞外區(qū)含有3個免疫球蛋白樣結(jié)構域,分別為D0、D1和D2。D0在細胞膜的遠端,D2在細胞膜近端,D1介于D0與D2之間;D0、D1、D2分子分別由95、102、98個氨基酸殘基組成[1,2]。人類KIR3D L1的D1和D2結(jié)構域選擇性表達,形成9個與HLA分子作用的結(jié)合基序(motif)[3]。

    2 KIR3DL1的基因結(jié)構

    KIR3DL1框架基因位于人類19號染色體(19ql3.4)的LRC區(qū)(Human Leukocyte Receptor Complex,LRC),從5’-啟動子到3’-UTR區(qū)全長序列約為14 kb,已知的KIR3DL1中除了KIR3DL1 *059、*060、*061和*065外,其余的KIR3DL1等位基因的cDNA長度為1335 bp。KIR3DL1基因含有9個外顯子、8個內(nèi)含子;其中外顯子1和2編碼引導肽,外顯子3、4、5分別編碼胞外D0、D1、D2免疫球蛋白樣結(jié)構域,外顯子6和7分別編碼胞外結(jié)構域與膜之間的連接區(qū)和跨膜區(qū)段,外顯子8和9則編碼胞內(nèi)段。

    3 KIR3DL1分子的配體

    KIR3DL1的配體為含有Bw4表型的HLA-B分子。Bw4表型取決于HLA-B分子α1螺旋體77~83位氨基酸殘基的組成。目前一致認為HLA~Bw4-80I(I為異亮氨酸)為KIR3DL1的配體;有學者認為HLA-Bw4-80T(T為蘇亮氨酸)也是KIR3DL1的配體,但存在爭議。二者之間的作用模式:KIR3DL1的D1和D2結(jié)構域的氨基酸殘基與HLA-I類分子相互作用,D0域加強二者間的結(jié)合[3],受體、配體間相互作用,傳導抑制信號,下調(diào)NK細胞的活性。

    4 KIR等位基因的命名

    KIR基因的命名方式,以KIR前綴開始,緊接著是KIR框架基因的名稱,其后接“*”號,“*”之后的前3位數(shù)表示等位基因,即編碼區(qū)的非同義突變;第4、5位數(shù)表示編碼區(qū)的同義突變;第6、7位數(shù)表示非編碼區(qū)的堿基取代。

    5 KIR3DL1分子遺傳多態(tài)性及其表達水平的差異

    5.1 KIR3DL1的遺傳多態(tài)性KIR3DL1的遺傳多態(tài)性主要體現(xiàn)在等位基因、群體遺傳、單倍體組成等不同水平層次,本文主要對前兩方面進行闡述。

    5.1.1 等位基因水平的多態(tài)性KIR3DL1等位基因的多態(tài)性體現(xiàn)在序列組成的差異。截止2013年10月,IPD-KIR Database公布了78個KIR3DL1等位基因(http://www.ebi.ac.uk/ipd/kir/stats.html,Realse 2.5.0),其中KIR3DL1*024N為無效不表達等位基因。Gardiner等[4]在對19名個體(包括13個高加索人、2個印度人、2個非裔美國人、1個中國人和1個日本人)的研究中檢測到10種KIR3DL1等位基因。Jiang等[5]對100個非裔美國人的研究中檢測到30種KIR3DL1等位基因。隨著研究的不斷深入和檢測樣本量的增加,發(fā)現(xiàn)的KIR3DL1新等位基因的數(shù)量也將不斷增多。

    5.1.2 群體水平的差異KIR3DL1等位基因的分布及其頻率具有地域性的特點,不同遺傳背景、不同種族之間差異也較大[6,7]。Norman等[3]對28個人群中的448個個體的KIR3DL1進行等位基因檢測,共檢出50種等位基因。并發(fā)現(xiàn)等位基因高表達組在細胞表面表達頻率由高到低的人群分布依次是:非洲人群>東亞/東南亞人群>南亞人群>南美人群≈歐洲/中東人群;中表達組的表達頻率由高到低的人群分布依次是:東亞/東南亞人群>歐洲/中東人群>非洲人群>南美人群≈南亞人群;不表達組的頻率由高到低的人群分布依次是:歐洲/中東人群>南亞人群>非洲人群>南美人群≈東亞/東南亞人群。

    不同的遺傳背景、不同種族之間KIR3DL1的檢出頻率也存在一定的差異。研究顯示中國漢族人群的3DL1檢出頻率為94.2%[8],日本人的為97%[9],越南人的為88%[10],希臘人的為90%[11],澳大利亞土著人的為55%[4],巴勒斯坦人的為88%[12],泰國人的為93%[10],高加索人的為94~95.8%[13-15],非裔美國人的為99%[5]??梢姲拇罄麃喭林说念l率偏低,其他研究人群的KIR3DL1檢出頻率比較接近。

    Jiang等[5]對100個非裔美國人的研究中檢測到30種3DL1等位基因(包括7個新等位基因),其中3DL1*01501和3DL1*01502最常見,

    3DL1*00101、*00401、*00501、*007、*01701、*020、*022和*031較為常見,KIR3DL1*002、*00402、*008、*019和*029較少見。然而Norman等[16]對非洲人群的研究中未檢出上述較少見型的等位基因,該結(jié)果可能是由于非洲人群與歐裔美國人或土著美國人的通婚所造成的。在高加索人群中3DL1*001、*002、*004和*005是最常見的四種等位基因[16,17],在日本人群中3DL1*01502最常見[18],3DL1*01501僅在非洲人群中發(fā)現(xiàn)[19]。不同人群中KIR3DL1等位基因的種類及其頻率分布存在差異,同一等位基因在不同的人群中分布也存在差異。

    5.2 表達水平的差異

    5.2.1 轉(zhuǎn)錄水平的差異并非所有的KIR3DL1等位基因都具有相同的轉(zhuǎn)錄能力,McErlean等[20]對KIR3DL1轉(zhuǎn)錄能力進行研究分析,發(fā)現(xiàn)其mRNA表達水平由高到低依次為:KIR3DL1*007>*004>*00101>*002>*005>*01502>*008。KIR3DL1基因與KIR基因家族其它成員的5′側(cè)翼區(qū)序列同源性高達91.11%~99.16%[21],但它們的功能卻有顯著的差異。Li等[22]首次證明啟動子的多態(tài)性影響KIR3DL1分子在NK細胞表面的表達頻率。啟動子核苷酸序列的多態(tài)性影響其與RNA聚合酶的親和力,從而影響轉(zhuǎn)錄起始的頻率。但是KIR3DL1/S1等位基因中的E2F、YY1和Sp1轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的單核苷酸多態(tài)性影響著這些等位基因的啟動子活性。E2F位點的改變(A→G),可減弱該結(jié)合位點的結(jié)合作用,從而抑制正向啟動子的活性[23]。YY1能抑制正反向啟動子的活性,當其發(fā)生改變(T→C)時,則增強正反向啟動子的活性[24,25]。因此啟動子的多態(tài)性及轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的多態(tài)性決定轉(zhuǎn)錄水平。

    5.2.2 在細胞膜上表達水平的差異Yawata等[26]研究發(fā)現(xiàn)KIR3DL1各等位基因在細胞膜上表達水平由高到低依次為:KIR3DL1*01502>*020>*001>*007>*005。Gardiner等[11,22-28]通過DX9和Z27 mAbs與NK細胞受體作用,根據(jù)檢測到的NK細胞表面的平均熒光強度將其受體分為四類:①低表達組:包括KIR3DL1*028和*053。②中表達組:KIR3DL1*005、*006、*007。③高表達組:KIR3DL1*001、*002、*003、*008、*015、*020。④不表達組:KIR3DL1*004(由于編碼D0結(jié)構域的第86位堿基和編碼D1結(jié)構域的第182位堿基的取代,導致了其在NK細胞表面幾乎不表達[27])。

    5.2.3 介導的抑制作用的差異Yawata等[26]研究發(fā)現(xiàn)KIR3DL1各等位基因編碼的受體蛋白介導的抑制性作用強弱依次為:KIR3DL1*001>*005> *01502>*020>*007。

    6 KIR的檢測方法

    目前,常用的KIR檢測方法包括序列特異性引物-PCR(PCR-SSP)、流式磁珠序列特異性寡核苷酸探針(Flow-rSSO)雜交分析及測序分型技術(PCR-SBT)。KIR框架基因的測序分型,通常是采用二步法,首先用PCR-SSP或Flow-rSSO方法,鑒定受檢者KIR框架基因的有無,然后針對檢出了的KIR框架基因進行測序。因此,第一步KIR框架基因的有、無的鑒定,對KIR等位基因水平檢測結(jié)果的準確性至關重要。美國國立衛(wèi)生研究院癌癥研究所建立的KIR PCR-SSP方法[29]與常規(guī)使用的商品化KIR PCR-SSP試劑盒的最大的不同之處在于:前者每個KIR模架基因采用2對KIR框架基因特異性的PCR引物進行擴增,以防止KIR框架基因的漏檢,減少假陰性的結(jié)果。Flow-rSSO商品化檢測試劑盒,簡化了KIR3DL1的分型操作過程,具有快速、高通量的特點。但KIR PCR-SSP和Flow-rSSO方法的局限性在于僅能檢測框架基因的有無,目前尚達不到等位基因水平的檢測。

    PCR-SBT法為基因分型的國際金標準,可以鑒定等位基因,還可以發(fā)現(xiàn)新等位基因。國際上已有文獻報道[30]采用PCR-SBT法對KIR3DL1測序分型,但是擴增的目的序列較長(exon 1-3:3.4kb,exon 4:3.2 kb,exon 5-9:8.7 kb,exon 4-5:1.7kb),對DNA的濃度和純度的要求高,耗費的時間長,對酶的活性和高保真性要求高。至今尚無商品化KIR測序分型試劑盒及配套的分析軟件應市,限制了KIR測序分型技術在骨髓和實體器官移植組織配型、惡性腫瘤、病毒感染性疾病等領域的廣泛應用。

    7 KIR3DL1與疾病的關聯(lián)

    KIR3DL1與艾滋病、乙肝、強直性脊柱炎、黑色素瘤等多種疾病相關,其中以KIR3DL1與HIV相關聯(lián)的文獻報道最多。

    NK細胞是天然免疫系統(tǒng)重要的效應細胞,通過分泌細胞因子和細胞毒作用在機體抗HIV感染中發(fā)揮重要的防御作用[31]。近年來多項研究報道KIR3DL1與降低HIV-1病毒載量和延緩AIDS疾病進程有關。Martin等[32]通過對歐裔美國人及非裔美國人中的1500多例HIV攜帶者研究表明KIR3DL1的不同等位基因與其配體相互作用,在不同程度上明顯地影響了AIDS的病程進程和血清中HIV病毒載量。其中,KIR3DL1*004+Bw4在延緩AIDS的進程中起著重要作用,KIR3DL1其它等位基因在AIDS中保護作用的強度由強到弱依次是:KIR3DL1*h/*y+Bw4-80I>KIR3D L1*l/x+ Bw4-80I>Bw6/Bw6;KIR3DL1*h/*y+Bw4-80I在減緩AIDS的進程中起到保護作用;研究還發(fā)現(xiàn)3DL1*h/*y+Bw4-80I、KIR3DL1*004+Bw4、3DL1*h/ *y+B57、3DL1*l/*y+B27基因組合型能有效控制血清病毒載量,其中3DL1*h/*y+Bw4-80I和3DL1*h/ *y+B57基因組合型的HIV攜帶者的病毒載量明顯低于其它組,這兩種基因型在AIDS進程中起到重要的保護性作用。Lopez等[33]對88名贊比亞HIV-1感染者的研究顯示HLA-B*57可以延緩AIDs進展,抑制型KIR3DL1和HLA-B*57聯(lián)合表達對AIDs有顯著的保護作用。

    Pelak等[34]通過對2102例歐裔HIV-1感染的患者進行研究,發(fā)現(xiàn)在KIR3DL1的配體存在時,KIR3DL1拷貝數(shù)的增加與病毒載量呈負相關;功能學研究發(fā)現(xiàn)具有多拷貝數(shù)KIR3DL1基因的NK細胞抑制HIV-1復制的能力更強。

    以上學者從不同的方面對KIR3DL1與AIDS進行相關性研究,闡述了KIR3DL1在AIDS的疾病進程中起到的保護性作用,但是KIR3DL1基因與AIDS相關性的深層次分子機制,目前仍知之甚少。在全球范圍內(nèi)艾滋病患者的基數(shù)大并在逐年增長,目前尚未找到治愈的方法,其嚴重危害著人類健康。進一步深入研究KIR-HLA受/配體復合物的分子作用機制,調(diào)節(jié)NK細胞的活性,對AIDS的預防和治療具有重要意義。

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    R392.13

    A

    1674-1129(2014)04-0405-04

    10.3969/j.issn.1674-1129.2014.04.014

    2014-02-11;

    2014-04-23)

    深圳市科技計劃重點項目(201101023)

    陳達香,女,1991年1月,畢業(yè)學校:大連醫(yī)科大學,

    醫(yī)學學士,醫(yī)學檢驗專業(yè)。

    喻瓊,主任技師。

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