安中片中延胡索提取工藝的研究

余楚欽，方玉嬋，林華慶，邱五龍

（1.廣東藥學(xué)院藥物研究所，廣東廣州 510006；2.中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院，廣東廣州 510630；3.廣州固志醫(yī)藥科技有限公司，廣東廣州 510600）

安中片由桂枝、延胡索（醋制）、牡蠣（煅）等藥材組成，具有溫中散寒、理氣止痛、和胃止嘔之功效[1]，能較好地緩解上腹癥狀和改善胃黏膜營養(yǎng)狀態(tài)的功能[2]。延胡索為方中君藥，其有效成分為延胡索乙素[3]，現(xiàn)代藥理研究表明[4]，延胡索具有抗?jié)兒兔黠@鎮(zhèn)痛作用。《中國藥典》未明確安中片中延胡索滲漉提取法的工藝參數(shù)，不同工藝參數(shù)影響藥物的療效。本文在藥典規(guī)定制法的基礎(chǔ)上，通過正交試驗法確定延胡索的最佳提取條件。

1 儀器與材料

美國Waters高相液相色譜儀；Sartorus BS 110電子天平；延胡索藥材（廣州市健琪醫(yī)藥有限公司）；延胡索對照品（批號：100024-200805，中國藥品生物制品檢定所）；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 延胡索乙素的含量測定[5]

2.1.1 色譜條件 參照《中國藥典》2005年版一部，選用色譜柱為 Hypersil BDS C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），以甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺調(diào) pH 值至 6.0）（60∶40）為流動相；檢測波長為280 nm。理論板數(shù)按延胡索乙素峰計算不低于3000。

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取延胡索乙素對照品適量，加甲醇溶液制成約40 μg/ml的溶液。

2.1.3 藥材供試品溶液的制備 取藥材粉末約0.5 g，精密稱定，置平底燒瓶中，精密加入濃氨試液-甲醇（1∶20）混合溶液50 ml，稱量。冷浸1 h后回流1 h，放冷，稱量，用濃氨試液-甲醇（1∶20）混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過。精密吸取續(xù)濾液25 ml，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 滲漉液供試品溶液的制備 精密吸取樣品液25 ml，置平底燒瓶中，水浴上蒸干后，精密加入濃氨試液-甲醇（1∶20）混合溶液50 ml，稱量，其余操作按“2.1.3”項下的方法制備。

2.1.5 樣品測定 精密吸取“2.1.2”項下對照品溶液及“2.1.4”項下供試品溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀，測定，按外標(biāo)法以峰面積計算。

2.2 延胡索提取工藝的優(yōu)化

2.2.1 提取工藝 將藥材粉碎成粗粉，稱取100 g，參照《中國藥典》2005年版一部流浸膏與浸膏劑項下的滲漉法[6]，用70%乙醇作溶劑，進行滲漉，收集漉液，回收乙醇，得清膏。

2.2.2 正交試驗設(shè)計 根據(jù)經(jīng)驗和預(yù)試驗結(jié)果，設(shè)定浸漬時間（A）、乙醇用量（B）、滲漉速度（C）為考察因素，以 L9（34）設(shè)計正交試驗，方法和結(jié)果見表1、2、3。

表1 因素水平表Tab.1 Factors and levels of the orthogonal design experiments

延胡索中延胡索乙素含量為藥材量的0.08%，100 g藥材含延胡索乙素為80 mg

由直觀分析可知，對延胡索乙素轉(zhuǎn)移率影響大小順序依次為B＞A＞C。最佳工藝組合條件為A2B2C3，即采用以70%乙醇浸漬24 h，70%乙醇量進行滲漉，滲漉速度為0.5 ml/min，收集9倍漉液。

表2 正交設(shè)計結(jié)果分析Tab.2 Results analysis of orthogonal design experiments

表3 正交試驗結(jié)果方差分析Tab.3 ANOVA of orthogonal results

由方差分析可見，乙醇用量有極顯著影響，浸漬時間有顯著影響，滲漉速度無顯著影響。

2.3 優(yōu)選工藝的驗證

根據(jù)優(yōu)選工藝條件進行3次驗證試驗，并對延胡索乙素轉(zhuǎn)移率進行考察，結(jié)果延胡索乙素平均轉(zhuǎn)移率為71.30%，RSD為3.16%，可見該工藝方法穩(wěn)定可靠。

3 討論

根據(jù)滲漉法的工藝特點，藥材粉碎的粒度不宜太細(xì)，太細(xì)易造成填充不均勻，堵塞滲漉筒漉液流動不暢，不利于有效成分的提取，但也不宜太粗，否則亦影響浸出效果，據(jù)實際生產(chǎn)經(jīng)驗本文延胡索藥材粒度定為粗粉。

本文在藥典規(guī)定的工藝路線和工藝條件基礎(chǔ)上，通過正交試驗法對延胡索的提取工藝參數(shù)進行篩選，優(yōu)化出最佳工藝參數(shù)，有利于提高藥物療效，同時為規(guī)范安中片生產(chǎn)工藝提供合理性依據(jù)。

[1]鄧少偉,程顯隆,馬雙成.安中片的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)研究[J].藥物分析雜志,2006,26(8):1065-1066.

[2]簡曉岑.圣陽安中片加六味地黃丸治療慢性萎縮性胃炎60例療效觀察[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2006,22(16):2513.

[3]苗明三,李振國.現(xiàn)代實用中藥質(zhì)量控制技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:435.

[4]劉芳,羅躍娥.延胡索研究概況[J].天津中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2005,24(4):240-242.

[5]余楚欽,林華慶,邱五龍.康胃膠囊有效期的評價[J].中國實用醫(yī)藥,2008,3(14):3-4.

[6]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:附錄17.