王際英李培玉宋志東,臧元奇李寶山喬洪金柳旭東馬晶晶張利民
(1. 山東省海洋資源與環(huán)境研究院, 山東省海洋生態(tài)修復重點實驗室, 煙臺 264006; 2. 山東升索漁用飼料研究中心,煙臺 265500)
飼料中添加絲蘭提取物對大菱鲆幼魚生長和生理及水環(huán)境的影響
王際英1李培玉2宋志東1,2臧元奇1李寶山1喬洪金1柳旭東2馬晶晶1張利民1
(1. 山東省海洋資源與環(huán)境研究院, 山東省海洋生態(tài)修復重點實驗室, 煙臺 264006; 2. 山東升索漁用飼料研究中心,煙臺 265500)
用絲蘭提取物添加量為0.00% (D0)、0.05% (D1)、0.10% (D2)、0.20% (D3)和0.40% (D4)的實驗飼料投喂大菱鲆幼魚[(42.20±0.06) g] 60d, 研究其對大菱鲆幼魚生長性能、體組成、血清免疫代謝指標及養(yǎng)殖水質指標的影響。結果顯示, 在飼料中添加絲蘭提取物對大菱鲆幼魚增重率(WGR)、特定生長率(SGR)、飼料系數(FCR)、臟體比(VSI)、肝體比(HSI)、肥滿度(CF)均無顯著影響(P>0.05)。全魚、肌肉及肝臟中水分、粗蛋白、粗脂肪含量變化無顯著性差異(P>0.05)。D3組幼魚血清溶菌酶顯著高于其他各組(P<0.05), 而D4組各免疫指標明顯低于對照組(P<0.05); D3和D4組幼魚血清的谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)活力顯著低于對照組。除A1-6h組外各實驗組水體氨氮含量均顯著低于對照組(P<0.05), 各實驗組亞硝酸鹽含量均顯著高于對照組(P<0.05), 各實驗組總氮、總磷、磷酸鹽含量均與對照組無顯著性差異(P>0.05)。研究證明, 在飼料中適量添加絲蘭提取物能夠顯著增強大菱鲆幼魚非特異性免疫能力, 并顯著降低養(yǎng)殖水體氨氮含量,對大菱鲆生長及體組成無顯著影響。以非特異性免疫及水體氨氮含量為綜合評定指標, 大菱鲆幼魚飼料中絲蘭提取物的適宜添加量為0.20%。
絲蘭提取物; 大菱鲆; 生長; 體組成; 生理指標; 水環(huán)境
絲蘭(Yucca schidigera)俗名洋菠蘿, 是龍舌科絲蘭屬植物, 主要分布于美國西南和墨西哥沙漠地區(qū), 為多年生常綠灌木[1,2]。目前在我國也有種植,主要用于城市綠化或觀賞植物。絲蘭屬植物種類有許多種, 其提取物(俗稱雅可)的主要成分是甾體皂苷、自由基皂苷、糖類復合物等[3]。在國外絲蘭提取物被廣泛應用畜禽養(yǎng)殖, 可減少動物氨氣排放,改善畜禽的飼養(yǎng)環(huán)境[4,5]; 增強機體免疫力, 提高動物的生產性能[4]; 還具有調節(jié)腸道微環(huán)境、促進細胞營養(yǎng)等功能[6]。
目前有關絲蘭提取物在水產養(yǎng)殖中的應用研究還比較少, 僅有少量關于絲蘭提取物在對蝦及個別淡水魚類養(yǎng)殖中的應用研究。Tidwell等1992年首次發(fā)現絲蘭提取物可明顯降低淡水魚養(yǎng)殖環(huán)境中的總氨氮水平[7]。Ho和Chien試驗表明, 和對照組相比, 絲蘭提取物能降低活魚運輸的海水和淡水中總氨氮水平[8]。在對蝦養(yǎng)殖中, 絲蘭提取物也被證實具有明顯的降低水體總氨氮的效果[9—11]。除降低水環(huán)境氨氮含量的作用之外, 絲蘭提取物也被證明對養(yǎng)殖動物具有生長促進效果。El-Saidy和 Gaber報道在尼羅羅非魚飼料中添加絲蘭提取物, 尤其是在高密度養(yǎng)殖環(huán)境中可作為生長促進劑來提高生長性能和飼料利用[12]。Gaber 報道在尼羅羅非魚飼料中補充添加絲蘭提取物可增加全魚蛋白含量[13]。
大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)屬鲆科(Bothidae)、菱鲆屬(Scophthalmus), 生長迅速、肉味鮮美、經濟價值高[14,15], 是我國重要的海水養(yǎng)殖品種[16,17]。隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴大以及養(yǎng)殖密度的增加,養(yǎng)殖環(huán)境惡化, 疾病發(fā)生率逐漸增加, 嚴重影響大菱鲆的生產, 因此如何提高大菱鲆免疫力、維持養(yǎng)殖環(huán)境健康友好顯得尤為重要。目前有關飼料添加劑在大菱鲆飼料中的應用研究已有諸多報道, 如肽聚糖[18,19]、葡聚糖等[20,21]。作為一種較新的添加物,絲蘭提取物在大菱鲆配合飼料中的研究尚未見報道。本文以大菱鲆幼魚為研究對象, 通過在配合飼料中添加不同水平的絲蘭提取物, 研究其對大菱鲆生長、生理及養(yǎng)殖水環(huán)境等的影響, 旨在為絲蘭提取物在大菱鲆飼料中的應用提供科學參考和理論依據。
1.1 實驗設計及飼料制作
以基礎飼料為對照組(D0), 用絲蘭提取物(商品名絲蘭寶, 由純絲蘭屬麟鳳藍植物提取物加工而成,主要活性成分為多糖、皂角苷及多酚, 上海亙泰實業(yè)集團提供, 墨西哥農工公司生產)按不同比例替代基礎飼料中0.05% (D1)、0.10% (D2)、0.20% (D3)和 0.40% (D4)的纖維素, 配制五種等氮等能的實驗飼料。飼料原料粉碎過80目篩, 按比例稱重、混勻,加入魚油及適量水再次混勻, 經螺旋擠壓機加工成粒徑4 mm的顆粒配合飼料, 烘干, 備用。飼料配方和營養(yǎng)組成見表1。
1.2 飼養(yǎng)管理
養(yǎng)殖實驗在山東省海洋資源與環(huán)境研究院海水循環(huán)系統(tǒng)內進行。大菱鲆幼魚[(42.20±0.06) g]在養(yǎng)殖系統(tǒng)中馴養(yǎng) 2周后隨機分至 15個圓形養(yǎng)殖桶(80 cm×70 cm)中, 每桶30尾魚, 進行為期60d的養(yǎng)殖實驗。在養(yǎng)殖期間, 定期進行水質檢測, 確保水質符合以下條件: 水溫(18.0±0.5) , ℃ 溶氧>7.0 mg/L,氨氮濃度<0.05 mg/L。實驗期間每天投喂兩次(08:00, 16:00), 日投喂量占魚體重 1.5%左右, 并根據攝食情況作適當調整。投喂30min后從排水口將殘餌排出, 數顆粒, 記錄殘餌數量。
1.3 樣品采集
全魚、組織樣品采集 采樣前禁食24h, 稱每桶魚總重。每桶隨機取12尾魚, 其中3尾用作全魚。剩余9尾經MS-222麻醉后, 稱體重、量體長, 尾靜脈處取血, 室溫靜置4h后分離血清(4 ℃, 4000 r/min, 10min)。取血后分離內臟、肝胰臟并稱重, 取背部肌肉。采樣結束后將樣品超低溫凍存(–78 ℃ ), 用于生理指標測定。
水質樣品采集 在養(yǎng)殖實驗結束后, 更換各養(yǎng)殖桶海水并保持容積相等, 每桶20尾魚進行18h封閉實驗, 分別于投餌后6h、12h、18h取各養(yǎng)殖桶水樣500 mL, 取樣后立即進行水質測定。
1.4 測定指標與方法
式中, W0為實驗開始時魚體重量(g), Wt為實驗結束時魚體重量(g), Wv為內臟重量(g), Wh為肝臟重量(g), F為攝食量(g), d為養(yǎng)殖周期(d)。
常規(guī)成分 全魚、肌肉及肝臟中常規(guī)成分的分析均采用AOAC(2000)方法。水分采用105℃烘干恒重法; 粗蛋白采用 FOSS半自動凱式定氮儀(KjeltecTM2100); 粗脂肪采用索氏抽提器; 粗灰分采用 550℃灼燒恒重法; 能量采用氧彈儀(PARR 6100)。
腸道消化酶指標 腸道脂肪酶(Lipase)采用比色法測定, 淀粉酶(Amylase)采用淀粉-碘比色法測定, 胰蛋白酶(Trypsin)采用紫外比色法測定, 以上試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。
血清免疫指標 血清溶菌酶(LZM)采用空白對照法比濁法測定, 一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)和總抗氧化能力(T-AOC)采用比色法測定, 以上測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所。谷丙轉氨酶(ALT)采用丙氨酸底物法測定, 谷草轉氨酶(AST)采用IFCC速率法測定, 試劑購于北京利德曼生化股份有限公司, 應用生化分析儀(7020型, Hitachi)測定。
水質指標 水體氨氮含量采用次溴酸鹽氧化法測定, 亞硝酸鹽含量采用奈乙二胺分光光度法, 總氮含量采用過硫酸鉀氧化法, 磷酸鹽含量測定采用抗壞血酸-磷鉬藍法, 總磷含量測定采用Aspila法[22]。
1.5 數據統(tǒng)計分析
采用SPSS 18.0軟件進行單因素方差分析(One-Way ANOVA), 差異顯著(P<0.05)時用Duncan’s檢驗進行多重比較分析。統(tǒng)計數據以平均值±標準差(Means±SD)或平均值±標準誤(Means±SE)的形式表示。
2.1 絲蘭提取物對大菱鲆幼魚生長性能的影響
絲蘭提取物對大菱鲆幼魚生長性能的影響見表2。飼料中添加絲蘭提取物對大菱鲆幼魚WGR、SGR、FCR、HIS、VSI及CF 均沒有顯著性影響(P>0.05)。
2.2 絲蘭提取物對大菱鲆幼魚體組成的影響
從表 3可以看出, 飼料中添加絲蘭提取物并不能改變大菱鲆幼魚全魚、肌肉及肝臟的基本營養(yǎng)組成(P>0.05)。
2.3 絲蘭提取物對大菱鲆幼魚腸道消化酶活力的影響
由表 4可知, 飼料中添加絲蘭提取物對大菱鲆幼魚脂肪酶活力無顯著影響(P>0.05), 而對淀粉酶、蛋白酶活力影響顯著(P<0.05)。隨著絲蘭提取物濃度的增加, 淀粉酶、蛋白酶活力逐漸升高, 并均于 D3組達到最高活力, 而后隨著絲蘭提取物濃度繼續(xù)升高, 酶活力迅速降至各實驗組最低(P<0.05)。
2.4 絲蘭提取物對大菱鲆幼魚血清免疫、代謝指標的影響
由表 5可知, 飼料中添加絲蘭提取物對大菱鲆幼魚血清免疫酶、代謝酶活力影響顯著 (P<0.05)。LZM、NO、NOS、T-AOC均在D4組出現最小值, 且與對照組及其他實驗組差異顯著(P<0.05); D3組LZM 最高且與對照組及其他實驗組差異顯著(P<0.05), NO、NOS、T-AOC活力D1-D3組均與對照組無顯著差異, 但在D3組出現最大值(P>0.05)。SOD活力在 D3組出現最大值, D4組出現最小值,但均與對照組無顯著性差異(P>0.05)。ALT、AST隨絲蘭提取物的增加活力逐漸降低, 在 D3、D4組顯著低于對照組(P<0.05)。
表2 絲蘭提取物對大菱鲆幼魚生長性能和飼料利用效率的影響Tab. 2 Effects of dietary Yucca extract on growth performance and feed utilization of juvenile turbot
表3 絲蘭提取物對大菱鲆幼魚常規(guī)成分的影響Tab. 3 Effects of dietary Yucca extract on proximate composition of juvenile turbot (%)
表4 絲蘭提取物對大菱鲆幼魚腸道消化酶活力的影響Tab. 4 Effects of dietary Yucca extract on intestinal digestive enzyme activities of juvenile turbot
表5 絲蘭提取物對大菱鲆幼魚血清免疫、代謝指標的影響Tab. 5 Effects of dietary Yucca extract on serum immunity and metabolic indices of juvenile turbot
圖1 絲蘭提取物對養(yǎng)殖水環(huán)境水質指標的影響Fig. 1 Effects of dietary Yucca extract on environmental water-quality index of juvenile turbot
2.5 絲蘭提取物對養(yǎng)殖水環(huán)境水質指標的影響
飼料中添加絲蘭提取物對養(yǎng)殖水質氨氮、亞硝酸鹽影響顯著(P<0.05), 對總氮、磷酸鹽、總磷無顯著影響(P>0.05)。在同一取樣時間下, 氨氮含量隨絲蘭添加物增加而呈現降低趨勢; 亞硝氮含量則呈現升高趨勢, 但最高值均出現在D3組。在同一添加濃度下, 氨氮、亞硝氮均基本呈現隨時間延長含量增加的趨勢。水環(huán)境中總氮、總磷、磷酸鹽含量保持穩(wěn)定, 均與對照組無顯著性差異。
3.1 絲蘭提取物對生長和飼料利用的影響
本實驗研究結果表明, 在飼料中添加絲蘭提取物對大菱鲆幼魚生長、飼料系數等生長性能無顯著影響, 這與黃臘鯧 Trachinotus blochii[23]、對蝦Marsupenaeus japonicus[24]、尼羅羅非魚Oreochromis rnossambicus×O. niloticus[25]的研究結果一致。目前關于絲蘭提取物在水生動物生長及飼料利用的報道不盡相同, Kelly和 Kohler研究結果表明飼料中添加絲蘭提取物可以顯著提高斑點叉尾Ictalurus punctatus幼魚的生長速度[24], El-Saidy和Gaber報道集約化養(yǎng)殖條件下以750 mg/kg添加絲蘭提取物可以刺激羅非魚Oreochromis niloticus (L.)提高生長及飼料利用率[12]。丁永敏等在飼料中添加一定量絲蘭提取物, 顯著提高了肉雞體質量?;士悼档妊芯勘砻? 飼料中添加絲蘭提取物對牛蛙(Rana catesbeiana)的質量增加率、特定生長率無顯著影響, 但顯著降低飼料效率和蛋白質效率。Tidwell等研究認為絲蘭提取物可用于養(yǎng)殖用水前處理, 但不應與魚類直接接觸, 且高濃度下對魚類生長具有明顯的抑制作用[7]。在本研究中, 不同處理組及對照組之間飼料系數無顯著性差異, 這與生長結果相一致, 表明在本實驗條件下添加絲蘭提取物對大菱鲆幼魚不具有促生長作用。Kelly和Kohler報道了在飼料中添加絲蘭提取物飼養(yǎng)兩種不同規(guī)格的斑點叉尾, 在 8周內不同添加處理組之間均無顯著性差異[24], 這與本研究結果相似, 而在第 12周處理組之間差異顯著。在飼料中添加絲蘭提取物在不同的養(yǎng)殖實驗中,對養(yǎng)殖魚類的生長性能影響不同, 可能是由于絲蘭提取工藝的不同或者養(yǎng)殖周期不同所致。絲蘭提取物包含三種以上皂苷[28], 但是不同提取過程會造成終產品中活性化合物明顯不同, 尤其是某些皂苷成分會在不降低產品氨氮處理能力的條件下被除去[7]。
3.2 絲蘭提取物對大菱鲆幼魚體組成的影響
一些研究顯示一定量的植物提取物添加到飼料中并沒有改變羅非魚[29]、異育銀鯽Carassius auratus gibelio[30]等魚類的體組成, 但在飼料中添加黃芪多糖能改變齊口裂腹魚Schizothorax prenanti體粗蛋白以及粗脂肪含量[31]。在溝鯰和雜交羅非魚的飼料中添加0.05%—1%的絲蘭提取物改變了其體成分組成[25]; 另有研究顯示以魚粉為主要蛋白源的飼料中添加0.075%的絲蘭提取物能顯著提高全魚中蛋白和灰分的含量, 顯著降低脂肪的含量[3]。在本實驗中, 飼料中添加絲蘭提取物并不影響全魚、肌肉及肝臟的體成分組成。導致這些實驗產生不同的結論可能與實驗所選用的魚類以及飼料的組成有關,需要進一步的實驗來對絲蘭的營養(yǎng)學角色進行研究,以闡明其對機體組成的影響機理。
3.3 絲蘭提取物對大菱鲆幼魚消化酶活力的影響
目前還未見絲蘭對魚類的消化酶影響的相關報道, 但是一些研究發(fā)現添加絲蘭能夠提高腸絨毛的高度和黏膜的厚度, 增加成熟上皮細胞的數量[32,33],而小腸上皮細胞是分泌蛋白酶的重要部位[34]。另外絲蘭的提取物可以影響到腸道微生物的組成, 從而可能提高產蛋白酶和淀粉酶的有益菌的數量, 起到增加外源酶的效果[35]。本實驗的結果顯示, 添加0.1% 和0.2%的絲蘭能提高蛋白酶和淀粉酶的活力,然而高水平的添加(0.4%)卻降低了蛋白酶和淀粉酶活力, 過高的絲蘭提取物可能反而干擾了腸道菌群, 對腸道的正常功能也產生影響。要弄清絲蘭影響魚體消化酶的機制, 需要進行更為深入和具體的研究。
3.4 絲蘭提取物對大菱鲆幼魚血清免疫、代謝指標的影響
就魚類非特異性免疫機制而言, 溶菌酶在疾病防御中行使著廣泛的非特異性免疫功能, 是重要的水解酶類[36,37], NO亦具有殺菌和抑菌作用, 在NOS的催化下能增強機體對真菌、病原菌及原生動物的殺傷力[38]。SOD在清除氧自由基, 防止自由基對生物分子損傷方面具有十分重要的作用, 其活性的變化反映了機體抵制自由基損傷的能力[39,40]??偪寡趸芰?T-AOC)是用于衡量機體抗氧化系統(tǒng)功能狀況的綜合性指標, 其大小可代表和反映機體抗氧化酶系統(tǒng)和非酶促系統(tǒng)對外來刺激的代償能力以及機體自由基代謝的狀態(tài)[41]。本研究選取以上指標來反映絲蘭提取物對大菱鲆幼魚免疫狀態(tài)影響。在絲蘭提取物添加濃度為0.1%—0.2%, 隨添加水平的增加血清免疫指標呈現不同程度的增強; 而當0.4%添加水平時, 各免疫指標呈現較低水平。研究表明在飼料中添加適當的絲蘭提取物不僅可以提高大菱鲆幼魚水解系統(tǒng)功能, 同時對抗氧化系統(tǒng)也具有明顯增強的效果, 因而對大菱鲆幼魚具有免疫增強的作用;而當添加水平為 0.4%, 機體免疫水平較低, 不利于抵御病原入侵以及機體氧化修復。
ALT、AST主要參與體內的轉氨基作用。在正常情況下, 血漿 ALT、AST的活性較低, 而當組織細胞受損或通透性增加時, 大量的AST、ALT進入血液, 造成活性升高, 因此血液中這兩種酶可反映肝臟損傷情況[42]。目前大菱鲆血清生化指標含量范圍尚無標準, 研究結論大多依據實驗結果與對照的差異進行比較而得出。在本實驗中, 添加絲蘭提取物各處理組ALT、AST活力均低于或與對照組無顯著差異, 說明了添加絲蘭提取物的實驗組大菱鲆肝臟比較正常。
3.5 絲蘭提取物對大菱鲆幼魚養(yǎng)殖水環(huán)境的影響
在飼料中添加絲蘭提取物對水環(huán)境氨氮含量具有顯著的影響, 本研究證實氨氮濃度不僅與絲蘭提取物添加水平有關, 也與取樣時間有關。低水平的添加即可對氨氮含量產生明顯的降低效果, 并能夠維持較長時間, 這與Santacruz-Reyes和Chien的研究結果一致[9—11]。這可能是由于絲蘭提取物中的某些成分可以結合氨氮, 或者參與其轉化為亞硝酸鹽及硝酸鹽。除此之外, 研究證實絲蘭提取物中的皂苷成分及糖蛋白均具有減少動物胃腸道產生氨氮的作用[43,44]。但是, 絲蘭提取物中參與除氨過程的確切成分及參與程度目前仍有待進一步研究闡明。在水體氨氮含量降低的同時, 亞硝酸鹽的含量則呈現隨添加絲蘭提取物水平升高的趨勢, 這與對黃臘鯧的研究結果一致[23], 可能是由于絲蘭提取物參與轉化氨氮為亞硝酸鹽, 并可能引發(fā)亞硝化作用[23]。氨氮對養(yǎng)殖水環(huán)境具有重要影響, 目前對水環(huán)境中降低氨氮的研究主要集中于化學途徑, 在淡水養(yǎng)殖系統(tǒng)中采用沸石可以降低氨氮含量, 但在海水中存在大量的陽離子(比如 Na+)使得的交換效率降低[45];另外采用福爾馬林降低海水養(yǎng)殖系統(tǒng)的氨氮含量,但其對養(yǎng)殖動物具有一定毒性[46]。因而, 本研究證實絲蘭提取物可以有效降低大菱鲆養(yǎng)殖水體氨氮含量, 這在大菱鲆工廠化養(yǎng)殖生產中具有重要的應用前景。
本實驗研究證明, 飼料中適量添加絲蘭提取物能夠顯著增強大菱鲆幼魚非特異性免疫能力, 并顯著降低養(yǎng)殖水體氨氮含量, 且對大菱鲆生長及體組成無顯著影響。以非特異性免疫及水體氨氮含量為綜合評定指標, 大菱鲆幼魚飼料中絲蘭提取物的適宜添加量為0.20%。
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EFFECTS OF DIETARY YUCCA SCHIDIGERA EXTRACT ON THE GROWTH PERFORMANCE, BLOOD PHYSIOLOGICAL AND BIOCHEMICAL INDICES OF TURBOT (SCOPHTHALMUS MAXIMUS) AND WATER ENVIRONMENT
WANG Ji-Ying1, LI Pei-Yu2, SONG Zhi-Dong1,2, ZANG Yuan-Qi1, LI Bao-Shan1, QIAO Hong-Jin1,
LIU Xu-Dong2, MA Jing-Jing1and ZHANG Li-Min1
(1. Shandong Provincial Key Laboratory of Restoration for Marine Ecology, Shandong Marine Fisheries Institute, Yantai 264006, China; 2. Shengsuo Fishery Feed Research Centre of Shandong Province, Yantai 265500, China)
In order to assess the effect of Yucca extract on growth performance, nutritional composition, serum immune of juveniles and aquaculture water environment, five formula feeds contained Yucca Extract at levels of 0.00% (D0), 0.05% (D1), 0.10% (D2), 0.20% (D3) and 0.40% (D4) were fed with juvenile Turbot (Scophthalmus maximus). The result showed that, no significant difference occurred in weight gain, specific growth rate, feed conversion ratio, viscerosomatic index, hepatosomatic index and condition factor of fish among all dietary treatments (P>0.05). Water, crude protein and crude lipid content of whole fish, muscle and liver exhibited no significant difference among groups (P<0.05). Serum lysozyme was enhanced in fish fed diet D3 significantly, while all immune indices were reduced in fish fed diet D4. The activities of alanine transaminase and aspartate aminotransferase of fish fed diet D3 and D4 were lower than that of the control dietary treatment (P<0.05). Except D1-6h, Ammonia content of all dietary treatments were significantly lower than that of the control treatment (P<0.05). Nitrite content of all dietary treatments were higher than that of the control treatment (P<0.05), while total nitrogen, total phosphorus and phosphate content showed no significant difference to the control treatment (P>0.05). The optimum content of Yucca Extract for juvenile turbot was 0.20% of weight based on the consideration of non-specific immunity and ammonia nitrogen content in aquaculture water.
Yucca extract; Scophthalmus maximus; Growth performance; Body composition; Physiological index Water environment
S965.3
A
1000-3207(2014)06-1117-10
10.7541/2014.163
2013-07-19;
2014-03-12
國家海洋公益性行業(yè)科研專項(20120525); 海洋生物產業(yè)水生動物營養(yǎng)與飼料創(chuàng)新研發(fā)示范平臺(201303002); 山東省水生動物營養(yǎng)與飼料泰山學者崗位資助
王際英(1965—), 女, 山東招遠人; 研究員; 主要從事水生動物營養(yǎng)與飼料研究。E-mail: ytwjy@126.com
張利民, 研究員; E-mail: zhanglimin@126.com