HPLC測(cè)定參紅補(bǔ)血顆粒中紅景天苷的含量

初洪波，仇志凱，吳 迪，位 鴻，于秀華，段 青，黃曉巍*

（1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春 130117;2.白城市醫(yī)院，吉林白城 137000;3.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院，北京 100700）

HPLC測(cè)定參紅補(bǔ)血顆粒中紅景天苷的含量

初洪波1，仇志凱1，吳 迪2，位 鴻1，于秀華1，段 青3，黃曉巍1*

（1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春 130117;2.白城市醫(yī)院，吉林白城 137000;3.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院，北京 100700）

目的 利用高效液相色譜法測(cè)定參紅補(bǔ)血顆粒中紅景天苷的含量。方法 色譜柱選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為甲醇∶水（15∶85），檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為275 nm。結(jié)果 HPLC測(cè)定紅景天苷在0.478～9.560 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回收率為97.74%，RSD為1.42%。結(jié)論 高效液相色譜法測(cè)定含量方法具有專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，無(wú)明顯干擾等特點(diǎn)，可作為參紅補(bǔ)血顆粒的含量測(cè)定方法。

參紅補(bǔ)血顆粒;紅景天苷;高效液相色譜法;含量測(cè)定

中醫(yī)血虛證是由失血過(guò)多、脾胃虛弱、血液生化之源不足或因瘀血阻滯新血不生等原因所致的血液不足或血液營(yíng)養(yǎng)功能低下，臟腑組織器官失養(yǎng)的病理狀態(tài)，臨床以面色蒼白或萎黃、唇甲色淡、頭暈眼花、手足發(fā)麻等為主要表現(xiàn)的一組證候。見(jiàn)于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的再生障礙性貧血，腫瘤放化療后的貧血以及慢性消耗性疾病等造血功能障礙性疾病［1-3］。參紅補(bǔ)血顆粒由紅景天、紅參、黃精、白術(shù)、麥冬組成，有益氣滋陰、補(bǔ)血活血的功效，是在中醫(yī)理論指導(dǎo)下經(jīng)多年臨床實(shí)踐總結(jié)的經(jīng)方，對(duì)血虛證治療有明顯的療效［4］。本研究采用高效液相法建立參紅補(bǔ)血顆粒中紅景天苷含量測(cè)定方法［5-6］，確定其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保證臨床藥效。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-2010A型高效液相色譜儀（日本島津），CLASS-VP工作站;KQ-100型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;CP225D型雙量程電子分析天平（德國(guó)Sartoris公司）;Lambda 25型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（美國(guó)PE公司）。

1.2 試藥 紅景天苷對(duì)照品（批號(hào)110774-200206），購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;參紅補(bǔ)血顆粒（批號(hào):20130901，20130902，20130903，均由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中醫(yī)藥制劑中心生產(chǎn)提供）;甲醇為色譜純;水為超純水;其他試劑皆為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，島津 Wondasil C18（150 mm ×4.6 mm，5 μm），以甲醇-水（15∶85）為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為275 nm，柱溫為25℃，進(jìn)樣量為10 μL，理論塔板數(shù)按紅景天苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取紅景天苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取參紅補(bǔ)血顆粒適量，研細(xì)，取粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.5 g，精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加甲醇10 mL，稱定重量，超聲處理30 min，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例稱取除紅景天外的其他藥材按照制備工藝依法制得缺紅景天的陰性對(duì)照樣品。按“2.2.2”項(xiàng)下方法操作，制備紅景天陰性對(duì)照溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，所得陰性對(duì)照色譜圖中，在與供試品色譜圖中紅景天苷峰相同保留時(shí)間處無(wú)任何色譜峰出現(xiàn)，表明處方中其他藥材對(duì)紅景天苷的含量測(cè)定無(wú)影響。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下紅景天苷對(duì)照品溶液 1，2，5，10，15，20 μL，注入高效液相色譜儀，依法測(cè)定，以測(cè)得峰面積為縱坐標(biāo)，以紅景天苷對(duì)照品進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸。得回歸方程Y=317 490.98X+651 4.09（r=0.999 97），結(jié)果表明紅景天苷在 0.478～9.560 μg范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2 精密度考察 精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下紅景天苷對(duì)照品溶液10 μL，“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液10 μL，分別注入高效液相色譜儀，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，依法測(cè)定，記錄峰面值，結(jié)果表明:對(duì)照品溶液和供試品溶液測(cè)定的RSD分別為1.65%，2.24%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.3 穩(wěn)定性考察 精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下紅景天苷對(duì)照品溶液10 μL，“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液10 μL，分別于 0，2，4，8，12，24 h，依法測(cè)定，記錄峰面積值，結(jié)果表明:對(duì)照品溶液和供試品溶液在24 h內(nèi)測(cè)定結(jié)果RSD分別為2.50%，2.35%（n=6），表明紅景天苷的穩(wěn)定性良好，24 h內(nèi)測(cè)定結(jié)果可靠。

2.3.4 重現(xiàn)性考察 精密稱取同一批次的樣品（批號(hào)20130901）6分，分別按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，分別精密吸取10 μL，注入高效液相色譜儀，依法獨(dú)立測(cè)定，計(jì)算樣品含量，結(jié)果:平均含量為2.36 mg/g，RSD為1.85%（n=6），表明該方法的重現(xiàn)性良好。

2.3.5 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的供試品（批號(hào)20130901，含2.36 mg/g）6分，每分0.40 g，精密稱定。分別精密加入紅景天苷對(duì)照品溶液（濃度為0.478 mg/mL）2 mL，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果表明，平均回收率為97.74%，RSD為1.42%（n=6），結(jié)果表明該方法的回收率較好，準(zhǔn)確度高。

2.3.6 樣品含量測(cè)定 按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平行測(cè)定3批參紅補(bǔ)血顆粒中紅景天苷的含量。結(jié)果顯示，3批樣品中紅景天苷含量分別為2.32，2.28，2.32 mg/g，平均含量為 2.30 mg/g。

3 結(jié)論

3.1 流動(dòng)相的選擇 《中國(guó)藥典》［7］“紅景天”項(xiàng)下收載的流動(dòng)相為甲醇-水（15∶85），按此法操作，紅景天苷出峰的保留時(shí)間為20 min，分離效果良好，故選為本法的流動(dòng)相。

3.2 測(cè)定波長(zhǎng)選擇 取紅景天苷對(duì)照品加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，經(jīng)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在200～400 nm間進(jìn)行掃描，測(cè)得最大吸收波長(zhǎng)為274.94 nm，結(jié)果與《中國(guó)藥典》“紅景天”項(xiàng)下收載的檢測(cè)波長(zhǎng)275 nm相符合，故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為275 nm。

3.3 供試品溶液制備方法的選擇 對(duì)超聲提?。?］和回流提取工藝方法［9］進(jìn)行了比較，分別選擇超聲提取30 min、回流提取1 h進(jìn)行研究，以紅景天苷含量作為考察指標(biāo)，結(jié)果表明，超聲提取30 min比回流提取1 h的含量高，故選擇超聲提取30 min作為供試品溶液制備方法。

3.4 制劑中紅景天苷含量限度的規(guī)定 依據(jù)3批樣品的平均含量，下浮20%，制定參紅補(bǔ)血顆粒的含量限度，規(guī)定本品含有紅景天苷不得低于1.84 mg/g。

4 結(jié)論

方中君藥為紅景天，故在對(duì)制劑提取工藝的研究基礎(chǔ)上，建立了以高效液相色譜法測(cè)定參紅補(bǔ)血顆粒中紅景天苷含量的方法，該方法專屬性好，在精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、回收率等方面均符合要求，適合測(cè)定紅景天苷的含量，本標(biāo)準(zhǔn)可以作為參紅補(bǔ)血顆粒質(zhì)量控制方法。

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［1］高志芳，魯明源.血虛體質(zhì)研究概述［J］.山東中醫(yī)雜志，2010，29（12）:868-870.

［2］曾常春，梁毅，孔猛.血虛證的本質(zhì)初探［J］.浙江中醫(yī)雜志，2009，44（10）:706-708.

［3］李冬，李宏宇，黃曉巍，等.鹿皮膠對(duì)環(huán)磷酰胺所致血虛動(dòng)物模型影響的實(shí)驗(yàn)研究［J］.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，26（5）:652-653.

［4］黃曉巍，初洪波，位鴻，等.正交試驗(yàn)法優(yōu)選參紅補(bǔ)血顆粒提取工藝［J］.吉林中醫(yī)藥，2012，32（11）:1152-1153.

［5］文君，繆紅，王鮮俊，等.HPLC法測(cè)保健品中紅景天甙［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2007（2）:261-262.

［6］胡馨，張國(guó)明，童月建.紅景天片劑薄層鑒別及紅景天甙的含量測(cè)定［J］.中成藥，2000，22（11）:62-64.

［7］中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2009:144.

［8］陳良，張海燕，呂新明，等.紅景天中紅景天甙的超聲提取研究［J］.現(xiàn)代食品科技，2009，25（8）:952-953，943.

［9］曾慶華，王竹君，李燕.響應(yīng)面法優(yōu)化熱回流提取紅景天苷工藝［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（1）:309-313.

Using HPLC to determine the content of salidroside in Shenhong Buxue Granule

CHU Hongbo1，QIU Zhikai1，WU Di2，WEI Hong1，YU Xiuhua1，DUAN Qing3，HUANG Xiaowei1*
（1.Changchun University of Chinese Traditional Medicine，Changchun 130117，China;2.Baicheng Hospital，Baicheng 137000，Jilin Province，China;3.China Academy of Traditional Chinese Medicine，Beijing 100700，China）

ObjectiveUsing high performance liquid chromatography to determine the content of salidroside in Shenhong Buxue Granule.Method Octadecylsilane bonded silica is used as a filler of the chromatographic column with mobile phase as Methanol-water（15:85）and the UV detector with detect wavelength to be 275 nm is used.Result The sample quantity have good linear relationship in the range of 0.478 ～9.560 μg，and the average recovery was 97.74%，RSD=1.42%.ConclusionThe high performance liquid chromatography has strong specificity，good repeatability with no significant interference.So it can be used to determine the content of Shenhong Buxue Granule.

Shenhong Buxue Granule;salidroside;HPLC;content determination

R285.1

A

2095－6258（2014）05－0815－03

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.05.020

吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（20110903）。

初洪波（1973－），男，碩士，助教。研究方向:中藥化學(xué)。

黃曉巍，女，主任藥師，碩士研究生導(dǎo)師，電話:0431-86142281，電子信箱:1594800074@163.com。

2014－06－01）