可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體sFlt-1、Flt-1在妊娠期高血壓疾病患者中的水平和意義

王 芳

(河北大學附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北 保定071000)

妊娠期高血壓是產(chǎn)科常見疾患，占全部妊娠的5%～10%，所造成的孕產(chǎn)婦死亡約占妊娠相關死亡總數(shù)的10%～16%，是孕產(chǎn)婦死亡的第二大原因。其主要癥狀有高血壓、蛋白尿、水腫等[1]。妊娠期高血壓的發(fā)病機制尚不確定，目前文獻研究報告其機制可能是胎盤缺血缺氧，導致血管內(nèi)皮損傷造成的血壓升高[2]。該學說認為妊娠期高血壓疾病分為兩步，首先以滋養(yǎng)細胞侵入過淺為特點，導致胎盤淺著床[3]，此階段無臨床表現(xiàn)；第二階段胎盤缺血缺氧，釋放的可溶性因子進入母體循環(huán)，引起內(nèi)皮系統(tǒng)功能受損而出現(xiàn)血壓升高和蛋白尿等癥狀。本研究欲通過酶聯(lián)免疫吸附實驗、免疫組織化學法分別探討妊娠期高血壓患者和正常孕婦的血清可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體(sFlt-1)和胎盤可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體(Flt-1)蛋白的差異，尋找其內(nèi)在聯(lián)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2008年1月至2010年1月在河北大學附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科待產(chǎn)的產(chǎn)婦，排除與妊娠高血壓有相關性并發(fā)癥，如原發(fā)性高血壓、慢性肝炎、貧血、胎兒生長遲緩等。按是否發(fā)生妊娠期高血壓分為妊娠期高血壓組(妊娠高血壓組)40例，年齡24～32(26.1±3.2)歲，孕周未發(fā)生妊娠期高血壓組(無妊娠高血壓組)20例為無妊娠高血壓組，年齡24～32(27.4±2.8)歲，孕周34.2～42.4(38.4±2.7)周。妊娠高血壓組中按是否發(fā)生突然暈厥、四肢抽搐分為輕度子癇前期組18例，年齡25～31(28.6±2.0)歲，孕周35.1～42.4(37.7±1.8)周；重度子癇前期組22例，年齡24～32(37.7±1.8)歲，孕周37.2～41.7(39.3±1.9)周。年齡、孕周在輕度子癇前期組和重度子癇前期組間的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，妊娠高血壓組和無妊娠高血壓組之間存在可比性。

1.2方法

1.2.1實驗儀器和試劑 采用由上海藍基生物有限公司生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒檢測血清sFlt-1，上海億欣生物公司生產(chǎn)的Flt-1兔抗人單克隆抗體檢測胎盤Flt-1。在南京華東電子集團醫(yī)療裝備有限責任公司生產(chǎn)的DG5033A 酶聯(lián)免疫檢測儀下檢測結果。

1.2.2實驗方法 血清sFlt-1水平的測定采用酶聯(lián)免疫吸附實驗法:在條板中加入不同濃度標準品室溫孵育2 h后震動吸凈殘留物，每孔加入200 μL sFlt-1酶結合物再孵育2 h，震動吸凈，再孵育30 min，加入50 μL終止液，5 min內(nèi)酶標儀OD450(波長450 nm時的吸光度)進行吸光度定量測定。

胎盤Flt-1蛋白表達水平的測定采用免疫組織化學法?；瘜W處理消除內(nèi)源性過氧化物酶活性，用高壓鍋法冒氣2 min后滴加封閉液，室溫孵育10～15 min不洗片；滴加一抗兔抗人Flt-1(效價1∶50)，置于濕盒中4 ℃冰箱過夜，改良磷酸鹽緩沖液振洗3次，每次5 min；滴加二抗PV6001葡聚糖-酶復合物，37 ℃孵育60 min；改良磷酸鹽緩沖液振洗3次，每次5 min；滴加過氧化物酶顯色劑：改良磷酸鹽緩沖液4 mL，過氧化物酶5 g，H2O 25 μL，顯色10 min左右；蒸餾水充分沖洗5次；蘇木精復染1 min，酒精梯度脫水，二甲苯透明后中性樹膠封片；光鏡下觀察結果。

1.2.3胎盤組織Flt-1染色方法 從胎盤母體面中央(避開明顯纖維化、鈣化區(qū))切取胎盤組織1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm，充分漂洗，置10%甲醛溶液中固定24 h以上，石蠟包埋，連續(xù)切片，厚度2 μm，蘇木精-伊紅染色觀察胎盤組織學特征，再進行免疫組織化學染色。

1.2.4胎盤組織Flt-1免疫組織化學染色評分 以細胞胞質有棕褐色顆粒沉著為陽性細胞，計數(shù)每個視野所含細胞數(shù)，計數(shù)其中陽性細胞數(shù)及著色強度。根據(jù)陽性細胞所占比例及著色強度綜合制訂免疫組織化學半定量記分標準：①陽性細胞記分-無陽性細胞為0分；<25%為1分；25%～50%為2分；>50%為3分。②著色強度記分-細胞內(nèi)無染色或染色與背景一致為0分；細胞質內(nèi)可見少量淡黃色顆粒，明顯高于背景為1分；細胞質內(nèi)可見較多深棕色顆粒為2分；細胞質內(nèi)可見大量深棕色或褐色顆粒為3分。陽性細胞計分和著色強度計分相加為最終判定結果：0～1分(陰性)，1～3分(弱陽性)，3～5分(陽性)，5～6分強陽性。

2 結 果

2.1sFlt-1的檢測結果 妊娠高血壓組sFlt-1值為(9012.74±3892.12) ng/L顯著高于無妊娠高血壓組的(2012.46±401.23) ng/L，比較差異有統(tǒng)計學意義(t=17.86,P<0.05)。且輕度子癇20例sFlt-1為(5832.53±417.34) ng/L，重度子癇20例sFlt-1為(1243.15±278.37) ng/L，輕度子癇者的sFlt-1顯著高于重度子癇者(t=59.00,P<0.01)。

2.2胎盤組織Flt-1的檢測結果 妊娠高血壓組的絨毛膜滋養(yǎng)細胞出現(xiàn)增生，有血管內(nèi)皮細胞的損傷，其中滋養(yǎng)細胞增厚，基質出現(xiàn)纖維化，絨毛毛細血管內(nèi)膜增厚，宮腔不暢，血管內(nèi)皮損傷，出現(xiàn)紅細胞，而無妊娠高血壓組基本均表現(xiàn)正常(見表1)。

表1 無妊娠高血壓組與妊娠高血壓組胎盤組織蘇木精-伊紅染色結果

2.3胎盤組織中Flt-1蛋白表達強度(免疫組化染色評分)比較 在妊娠高血壓組中，輕度子癇組蛋白表達強度均值為(1.5±0.5)分，重度子癇組均值為(1.2±0.3)分，兩組數(shù)據(jù)比較有統(tǒng)計學意義(t=3.35，P<0.05)隨著病情的加重，胎盤組織中Flt-1蛋白表達強度依次下降，經(jīng)統(tǒng)計學檢驗，差異有統(tǒng)計學意義(Z=8.67，P<0.05)(表2)。

表2 無妊娠高血壓組和妊娠高血壓組胎盤組織中Flt-1蛋白表達強度比較

3 討 論

本研究結果與其他學者報道的研究結果基本一致[4]。關于Flt-1對妊娠高血壓的發(fā)病機制，可能涉及母體、胎盤和胎兒等多種因素，滋養(yǎng)細胞侵襲異常、免疫調節(jié)功能異常、內(nèi)皮細胞損傷、遺傳因素和營養(yǎng)因素[5]；血管痙攣、內(nèi)皮細胞激活、升壓反應增加、前列腺素、一氧化氮、內(nèi)皮素和血管生成和抗血管生成的蛋白質等。但是沒有任何一種單一因素能夠解釋所有子癇前期發(fā)病的病因和機制。相關研究鏡下觀察結果表明滋養(yǎng)細胞浸潤不足[6]，胎盤小動脈數(shù)量減少、深度過淺導致胎盤絨毛缺血缺氧[7-8]，導致血管內(nèi)皮細胞損傷，從而釋放大量活性細胞因子，進一步加劇妊娠高血壓的發(fā)生。

另有研究表明，妊娠高血壓是一種多因素多基因引發(fā)的疾病，有家族遺傳傾向?；甲影B前期的母親其女兒子癇前期發(fā)病率為20%～40%；患子癇前期的婦女其姐妹子癇前期發(fā)病率為11%～37%；雙胞胎中患子癇前期的婦女其姐妹子癇前期發(fā)病率為22%～47%[9-10]。但至今為止，其遺傳模式尚不清楚。故在有妊娠高血壓家族史的產(chǎn)婦中應特別關注子癇的發(fā)生。

本研究顯示，血清sFlt-1、胎盤組織Flt-1參與了上述病理生理過程。本試驗表明，血清sFlt-1和胎盤組織Flt-1蛋白可能對妊娠期高血壓疾病的發(fā)生、發(fā)展起到一定的促進作用。對孕婦檢測有助于妊娠高血壓的早期診斷。

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