Tween-20在免疫組化染色中的應(yīng)用

吳賽青

安徽省中醫(yī)院病理科 安徽 合肥 230031

Tween-20在免疫組化染色中的應(yīng)用

吳賽青竇紅漫邢學(xué)偉

安徽省中醫(yī)院病理科 安徽 合肥 230031

良好的免疫組化染色是正確判斷染色結(jié)果的基礎(chǔ)和前提，免疫組化技術(shù)是現(xiàn)代病理診斷領(lǐng)域中一項不可缺少的研究與診斷手段，尤其在臨床病理診斷中發(fā)揮著極其重要的作用。影響免疫組化染色結(jié)果的因素很多，包括組織前處理，抗原修復(fù)(時間、溫度、PH值、離子種類、離子濃度)，一抗，二抗，DAB等試劑的孵育時間和溫度等[1-4]. 在免疫組化實驗中，各實驗室會選擇不同的檢測系統(tǒng)。其操作方法亦不盡相同，而免疫組化染色過程中，每一步驟及環(huán)節(jié)都有可能影響染色結(jié)果。如何降低成本，保證染色質(zhì)量，提高工作效率？我科經(jīng)過反復(fù)探討摸索，發(fā)現(xiàn)在染色過程中，沖洗環(huán)節(jié)至關(guān)重要，將清洗試劑的緩沖液中加入Twenn20，即能節(jié)約試劑，又能減少背景染色和非特異性著色?，F(xiàn)將其方法介紹如下：

1 材料與方法

1.1 材料：選取安徽省中醫(yī)院病理科2013年1月至2014年6月需做免疫組織化學(xué)染色的標本。

1.2 所需設(shè)備：Leica ASP300S 全自動脫水機、Leica2235切片機(均購自德國徠卡公司)

1.3 主要試劑：一抗(即用型工作液)、二抗(即用型pv6000檢測試劑盒)、DAB顯色試劑盒(均購自北京中杉金橋試劑公司)、EDTA(PH8.0)抗原修復(fù)液、PBS磷酸鹽緩沖液(0.01mol/l、PH7.2-7.4)、表面活性劑吐溫20(Tween-20)

1.4 方法

(1)染色前處理，所選組織經(jīng)10%中性福爾馬林固定12-24h，規(guī)范取材，經(jīng)Leica ASP300S 全自動脫水機脫水處理；Leica2235切片機切2μm薄片，60℃烤箱烤片3h。(2)石蠟切片脫水至水，蒸餾水沖洗，需抗原修復(fù)的切片，用EDTA(PH8.0)抗原修復(fù)液高壓鍋高溫修復(fù)，自然冷卻，3%H2O2室溫孵育5-10min(3)實驗組用含Tween20的PBS磷酸鹽緩沖液沖洗，對照組用PBS磷酸鹽緩沖液沖洗；沖洗2min×3次；滴加相應(yīng)的一抗，4℃冰箱過夜孵育(4)緩沖液沖洗2min×3次，滴加即用型pv6000二抗15min，緩沖液沖洗2min×3次(5)DAB顯色試劑顯色，自來水終止顯色后充分沖洗(6)蘇木素復(fù)染，脫水、透明、封片

2 結(jié)果

實驗組均未發(fā)生邊緣效應(yīng)及干片現(xiàn)象，染色均勻，且無背景及非特異性染色，而對照組切片易干燥出現(xiàn)了邊緣效應(yīng)，偶見“陰陽臉”著色、易見背景及非特異性染色，試劑用量多于實驗組。

3 討論

免疫組化染色中，切片干燥會使抗體與組織發(fā)生非特異性結(jié)合，造成假陽性。尤其組織邊緣，如果抗體覆蓋不充分容易發(fā)生干片，造成非特異性染色，即“邊緣效應(yīng)”[5]。免疫組化染色步驟中，有多次沖洗過程，任何一步?jīng)_洗不徹底，都可能影響免疫組化染色結(jié)果，造成背景及非特異性著色，給病理診斷帶來干擾。試劑覆蓋組織不均勻、不充分，易造成 “陰陽臉”著色。“陰陽臉”著色 指組織一半著色一半無著色， 其成因是試劑僅覆蓋了部分組織而不是全部[6]。

Tween-20為聚氧乙烯去水山梨醇單月桂酸酯和一部分聚氧雙去水山梨單月桂酸酯的混合物，由于其分子中有較多的親水性基團(聚氧乙烯基)，故親水性強，具有乳化、擴散、增容、穩(wěn)定等性能,是一種常用的非離子性去垢劑、擴散劑和穩(wěn)定劑，用含有Tween20的緩沖液沖洗切片，由于其擴散作用既節(jié)約了試劑又使試劑均勻地分散在組織上，Tween20是親水性強的試劑，能有效鎖住水分，有效地防止切片干燥，避免邊緣效應(yīng)。另外，Tween20是去垢劑，能使組織切片沖洗得更干凈更徹底，避免因試劑沖洗不干凈而造成背景及非特異性著色。

綜上所述，Tween20在免疫組化染色中有以下幾點作用：(1)節(jié)約成本。用加Tween20的緩沖液沖洗切片，能使試劑迅速平鋪，減少試劑用量，尤其是較大的組織切片效果顯著；(2)避免“邊緣效應(yīng)”。Tween20是親水性強的試劑，能有效鎖住水分，有效地防止切片干燥；(3)減少背景及非特異性染色。Tween20是去垢劑，能使組織切片沖洗得更干凈更徹底。

鑒于Tween20無毒無害，價格便宜，配制方法簡單(1000ml沖洗液中加入0.2ml Tween20即可)，值得在免疫組化染色中推廣應(yīng)用。

[1]Shi SR，Imam SA,Young L，et al.Antigen retrieval immunohistochemistry under the influence of pH using monoclonal antibodies[J]． J Histochem Cytochem，1995，43(2)：193 -201．

[2]Shi SR，Cote RJ，Taylor CR.Antigen retrieval immunohistochemistry：past，present，and future[J]． J Histochem Cytochem，1997，45(3)：327 -343．

[3]McNicol AM，Richmond JA．Optimizing immunohistochemistry：antigen retrieval and signal amplification[J]． Histopathology，1998，32(2)：97 -103．

[4]李 慧． 免疫組織化學(xué)技術(shù)應(yīng)用的探討[J]． 臨床醫(yī)學(xué)，2013，26(2)：281．

[5]周小鴿． 免疫組化染色過程中存在的問題及對策[J]． 診斷病理學(xué)雜志，2004，11(4)：211 - 213．

[6]朱淑玲，楊清緒.免疫組化染色結(jié)果分析[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生，2007,45(10s):120-121

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1009-6019(2014)08-0225-01