牛尾菜乙醇提取物抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用研究

陳人萍，張英華，劉衛(wèi)，王琳

(1．吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，長春 130012； 2．長春醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，長春 130031)

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種病因尚未明了的慢性全身性炎癥性疾病，以慢性、對稱性、多滑膜關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)外病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)，急性活動期常伴有劇烈的晨僵、疼痛、腫脹等。許多細(xì)胞因子在RA發(fā)病過程中起著重要的作用[1，2]。白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的骨侵蝕和軟骨破壞中發(fā)揮重要作用；白細(xì)胞介素-6(IL-6)在炎癥細(xì)胞因子和免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中具有關(guān)鍵性的作用[3]；腫瘤壞死因子(TNF-α)能刺激滑膜細(xì)胞和軟骨細(xì)胞合成并釋放前列腺素E2(PGE2)和膠原酶，引起骨和軟骨的吸收破壞[4]。因此，降低血清中此類細(xì)胞因子的水平也是治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的途徑之一。

牛尾菜為百合科植物牛尾菜(Smilax.riparia.A.DC.)的根及根莖，異名金剛豆藤、馬尾伸根等，在全國分布較廣，民間常用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[5]，但鮮見其藥理作用的研究報道。為進(jìn)一步證實(shí)牛尾菜抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用，本試驗(yàn)采用佐劑性關(guān)節(jié)炎模型[6]研究其乙醇提取物的抗炎作用及其對炎性細(xì)胞因子的影響；采用醋酸扭體和福爾馬林模型[7]研究其鎮(zhèn)痛作用。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥品與試劑

牛尾菜乙醇提取物(吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院植物化學(xué)研究所提供)；阿司匹林腸溶片(石家莊康力藥業(yè)有限公司)；雷公藤多苷片(浙江得恩德制藥有限公司)；弗氏完全佐劑(美國sigma公司)；IL-6、IL-1β和TNF-α ELISA試劑盒(上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司)。

1.2 試驗(yàn)動物

Wistar大鼠(98只，雌、雄各半，體重150g～200g，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院試驗(yàn)動物研究所提供)；昆明種小鼠(50只，雌、雄各半，體重20g～24g，吉林大學(xué)試驗(yàn)動物中心提供)。

1.3 試驗(yàn)儀器

680型全自動酶標(biāo)儀(美國BIO-RAD公司)；DH-360型電熱恒溫培養(yǎng)箱(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 牛尾菜乙醇提取物抗炎作用研究

2.1.1牛尾菜乙醇提取物對佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠足腫脹的影響取大鼠48只，雌、雄各半，隨機(jī)分為6組，每組8只。第1組為空白對照組，第2組為模型對照組，第3組為陽性對照組(雷公藤多苷組，給藥劑量為0.025g/kg)，第4組、第5組、第6組分別為牛尾菜乙醇提取物的高劑量組、中劑量組、低劑量組(給藥劑量分別為0.6g/kg、0.3g/kg、0.15g/kg)，空白對照組大鼠右后足跖皮下注射0.1mL液體石蠟，其他組注射弗氏完全佐劑0.1mL致炎。致炎后第10天開始每天灌胃給藥1次，對照組給予同體積蒸餾水，共給藥12d。預(yù)先測量大鼠的正常右后足跖部周徑，再分別于致炎后第13天、第17天和第21天測量大鼠右后足跖部周徑，并以其與正常值的差作為足跖腫脹度，結(jié)果見表1。

表1牛尾菜乙醇提取物對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠足腫脹的影響

Table1EffectsofethanolextractfromS.ripariaonadjuvant-inducedpawswellinginrats

注：與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01Note： Compared with the model control group,*P<0.05,**P<0.01

結(jié)果表明，牛尾菜乙醇提取物0.6g/kg劑量組、0.3g/kg劑量組能夠顯著抑制大鼠的佐劑性關(guān)節(jié)炎繼發(fā)性炎癥。

2.1.2牛尾菜乙醇提取物對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠炎性細(xì)胞因子的影響致炎后第21天，從大鼠腹腔主動脈采血，3000r/min離心5min，采用ELISA法測定IL-6、IL-1β和TNF-α含量，結(jié)果見表2。

表2牛尾菜乙醇提取物對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清IL-6、IL-1β和TNF-α的影響

Table2EffectsofethanolextractfromS.ripariaonIL-6，IL-1β，andTNF-αintheserumofadjuvant-inducedarthritisrats

組 別Group劑量(g/kg)DoseIL-6IL-1βTNF-α(pg/mL，X±SD)空白對照組Blankcontrol—506±363470±064327±034模型對照組Modelcontrol—664±452#592±445#346±047#陽性對照組Positivecontrol0025520±281?473±081?325±049??牛尾菜乙醇提取物EthanolextractfromSmilaxriparia06485±218??470±088?326±058?03574±730488±094?329±063?015654±344501±092331±054

注：與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與空白對照組比較，#P<0.05

Note:Compared with the model control group,*P<0.05，**P<0.01;compared with the blank group,#P<0.05

結(jié)果表明，與空白對照組比較，模型對照組佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清中IL-6、IL-1β和TNF-α含量顯著升高；與模型對照組比較，牛尾菜乙醇提取物0.6g/kg和0.3g/kg劑量組大鼠血清中IL-6、IL-1β和TNF-α含量顯著降低，并且與陽性對照組比較無顯著性差異。

2.2 牛尾菜乙醇提取物鎮(zhèn)痛作用研究

2.2.1牛尾菜乙醇提取物對醋酸所致小鼠疼痛反應(yīng)的影響取小鼠50只，雌、雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只。第1組為模型對照組，第2組為陽性對照組(阿司匹林組，給藥劑量0.1g/kg)，第3組、第4組、第5組分別為牛尾菜乙醇提取物的高劑量組、中劑量組、低劑量組(給藥劑量分別為0.8g/kg、0.4g/kg、0.2g/kg)，連續(xù)灌胃6d，每天給藥1次，對照組給予同體積蒸餾水。于末次給藥后1h，腹腔注射0.8%醋酸溶液0.2mL，記錄15min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)，結(jié)果見表3。

結(jié)果表明，牛尾菜乙醇提取物0.8g/kg劑量組和0.4g/kg劑量組能顯著抑制醋酸所致小鼠疼痛反應(yīng)，和陽性對照組比較，無顯著性差異，并且0.8g/kg劑量組作用強(qiáng)于0.1g/kg陽性對照組。

2.2.2牛尾菜乙醇提取物對福爾馬林所致大鼠疼痛反應(yīng)的影響取大鼠50只，雌、雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只。第1組為模型對照組，第2組為陽性對照組(阿司匹林組，給藥劑量0.1g/kg)，第3組、第4組、第5組分別為牛尾菜乙醇提取物的高劑量組、中劑量組、低劑量組(給藥劑量分別為0.6g/kg、0.3g/kg、0.15g/kg)。連續(xù)灌胃6d，每天給藥1次，對照組給予同體積蒸餾水。于末次給藥后1h，右側(cè)后跖皮下注射2.0%的福爾馬林溶液0.1mL，記錄注射后0min～5min(第1時相)和15min～30min(第2時相)大鼠舔致炎足(即疼痛反應(yīng))的累積時間，結(jié)果見表4。

表3牛尾菜乙醇提取物對醋酸所致小鼠疼痛反應(yīng)的影響

Table3EffectsofethanolextractfromS.ripariaonaceticacid-inducedwrithingreactioninmice

組 別Group劑量(g/kg)Dose扭體次數(shù)Writhingtimes(X±SD)模型對照組Modelcontrol—171±132陽性對照組Positivecontrol01103±139??牛尾菜乙醇提取物EthanolextractfromSmilax．riparia0881±104??04119±184?02137±161

注：與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。下表同。

Note:Compared with the model control group,*P<0.05，**P<0.01.The same as in the following table.

表4牛尾菜乙醇提取物對福爾馬林所致大鼠疼痛反應(yīng)的影響

Table4EffectsofethanolextractfromS.ripariaonFormalin-inducedpainreactioninrats

組 別Group劑量(g/kg)Dose疼痛反應(yīng)持續(xù)時間 Durationofpainreaction(s，X±SD)第1時相Firstphase(0min～5min)第2時相Secondphase(15min～30min)模型對照組Modelcontrol—626±6412515±1559陽性對照組Positivecontrol01430±481?1998±1427?牛尾菜乙醇提取物EthanolextractfromSmilax．riparia06331±389??1633±980??03370±561??1995±1419?015387±650?1948±1587?

結(jié)果表明，牛尾菜乙醇提取物0.6g/kg、0.3g/kg和0.15g/kg劑量組均能顯著抑制福爾馬林所致大鼠疼痛反應(yīng)，且對疼痛的2個時相均有顯著的抑制作用。

3 結(jié)論

在牛尾菜乙醇提取物抗炎作用研究試驗(yàn)中，牛尾菜乙醇提取物0.6g/kg劑量組、0.3g/kg劑量組能夠顯著抑制大鼠的佐劑性關(guān)節(jié)炎繼發(fā)性炎癥；對炎性細(xì)胞因子影響的試驗(yàn)中，與模型對照組比較，牛尾菜乙醇提取物0.6g/kg劑量組和0.3g/kg劑量組對大鼠血清中IL-6、IL-1β和TNF-α含量有顯著的抑制作用，并且與陽性對照組比較無顯著性差異。

在牛尾菜乙醇提取物鎮(zhèn)痛作用中，牛尾菜乙醇提取物0.8g/kg劑量組和0.4g/kg劑量組對醋酸所致小鼠疼痛反應(yīng)有顯著的抑制作用，且0.8g/kg劑量組作用強(qiáng)于陽性對照組0.1g/kg(P<0.01)；而牛尾菜乙醇提取物各個劑量組均能顯著抑制福爾馬林所致大鼠疼痛反應(yīng)的2個時相。

疼痛和炎癥是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的兩大主要癥狀，試驗(yàn)結(jié)果表明，牛尾菜乙醇提取物具有抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用，可望為治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎提供新的藥物。

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