槲皮苷對實驗性高脂血癥大鼠血脂代謝的影響

邢影，孫繼澤，牟鳳輝，李文麗，劉銀燕，楊錦竹※

(吉林大學(xué) a．中日聯(lián)誼醫(yī)院； b．藥學(xué)院，長春 130021)

槲皮苷(Quercitrin)的藥理活性研究多集中在槲皮苷的保肝、抗炎、抗病毒[1，2]等方面，對槲皮苷的降血脂作用研究未見報道；而黃酮類化合物大多在預(yù)防和治療腦血栓、冠心病、降血脂等方面具有很好的生物活性；因此，對槲皮苷的降血脂作用研究必將填補槲皮苷藥理活性方面的空白。本課題組前期實驗已經(jīng)證明，槲皮苷在體外能有效清除羥自由基、超氧陰離子自由基以及二苯代苦味肼基(DPPH)自由基等多種自由基，但作為抗氧化劑對高脂血癥大鼠的機體氧化應(yīng)激損傷是否具有保護作用尚未見報道。本實驗采用實驗性高脂血癥大鼠為模型，探討其對實驗性高脂血癥大鼠抗氧化能力和血脂代謝的影響，為槲皮苷的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

健康Wistar大鼠50只，體重180g～200g，雌、雄各半(吉林大學(xué)實驗動物中心提供)。

1.2 實驗原料與試劑

槲皮苷(吉林大學(xué)藥學(xué)院藥物化學(xué)實驗室自制)；總膽固醇(TC)檢測試劑盒、甘油三酯(TG)檢測試劑盒、高密度脂蛋白(HDL-C)檢測試劑盒、低密度脂蛋白(LDL-C)檢測試劑盒(北京九強生物技術(shù)有限公司)；丙二醛(MDA)檢測試劑盒、超氧化物岐化酶(SOD)檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)；膽固醇(上海新興化工試劑研究所)；膽酸鈉(Sigma公司)。

1.3 實驗儀器

DY 89-Ⅱ型電動玻璃勻漿機(寧波新芝生物科技股份有限公司)；KUBOTA KR/200A低溫高速離心機(日本KUBOTA SEISAKUSHO公司)；TGL-16 B型離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠)；WFZ UV-2100型紫外可見分光光度計(尤尼柯上海儀器有限公司)；592型電熱三用水箱(北京醫(yī)療設(shè)備廠)；YKH-Ⅱ型液體快速混合器(江西醫(yī)療器械廠)。

2 實驗方法

2.1 高脂飼料的配方

基礎(chǔ)飼料87.6%、豬油10%、膽固醇2%、膽酸鈉0.4%。

2.2 造模與分組

健康Wistar大鼠隨機分成5組，每組10只。其中1組為正常對照組(NC)，其余為高脂飲食組。分別給予普通飼料和高脂飼料15d，第15天采血測血脂，與正常對照組比有明顯差異，即造模成功。再按血脂水平將形成高血脂模型的40d大鼠隨機分成4組，即高脂對照組(MC)、槲皮苷低劑量組[高脂飼料+槲皮苷10mg/(kg·d)]、槲皮苷中劑量組[高脂飼料+槲皮苷20mg/(kg·d)]、槲皮苷高劑量組[高脂飼料+槲皮苷40mg/(kg·d)]。

除正常對照組和高脂對照組，其余各組于實驗第16天開始，按組別灌胃給予槲皮苷，每天1次，共21d。試驗前1晚，大鼠禁食不禁水。次日上午，將大鼠用3%戊巴比妥鈉腹腔麻醉，頸動脈采血，并取肝臟。

2.3 指標(biāo)測定

2.3.1血液指標(biāo)血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、SOD、MDA的測定均按試劑盒說明書方法操作。

2.3.2組織指標(biāo)肝組織SOD、MDA的測定均按試劑盒說明書方法操作。肝組織TG和TC的測定[101]：稱取肝組織100mg，加提取液(氯仿∶甲醇=1∶1)2.0mL，研成勻漿，再補加提取液3.0mL，混勻。24h抽提，不斷振搖，然后3000r/min離心5min，得提取液，按血清脂質(zhì)測定方法測定。

2.4 統(tǒng)計方法

3 實驗結(jié)果

3.1 槲皮苷對高脂血癥大鼠血脂水平的影響

與正常對照組比較可見，高脂對照組血清TC、TG和LDL-C含量均顯著升高(P<0.01)，HDL-C含量顯著下降(P<0.01)，表明大鼠高脂血癥模型復(fù)制成功。與高脂對照組相比，槲皮苷40mg/kg組可明顯降低血清TC、TG和LDL-C含量(P<0.05或P<0.01)，并明顯升高血清HDL-C含量；槲皮苷20mg/kg組也可使血清TC和LDL-C含量明顯降低，HDL-C含量明顯升高(P<0.05或P<0.01)，但對血清TG含量無明顯影響；槲皮苷10mg/kg組則對血清TC、TG、HDL-C和LDL-C含量無明顯影響(表1)。

表1槲皮苷對高脂血癥大鼠血脂水平的影響

組別 Group劑量 Dose[mg/(kg·d)]TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)NC—168±015076±013096±014091±013MC—683±097??098±017??077±014??603±025??10618±066087±015083±010593±024槲皮苷20540±064△086±008090±015△398±018△△40482±049△△079±015△092±014△362±020△△

注：**P<0.01 vs NC；△P<0.05、△△P<0.01 vs MC，下表同。

根據(jù)上述測定的結(jié)果，按公式AI=(TC-HDL-C)/HDL-C計算動脈硬化指數(shù)(AI)以及TC/HDL-C比值和LDL-C/HDL-C比值，結(jié)果見表2。從表中可以看出，與高脂對照組相比，槲皮苷20mg/kg組、40mg/kg組可明顯降低AI以及TC/HDL-C和LDL-C/HDL-C比值(P<0.01)；槲皮苷10mg/kg組則對AI以及TC/HDL-C和LDL-C/HDL-C比值無明顯影響。

表2槲皮苷對高脂血癥大鼠動脈粥樣硬化指數(shù)的影響

組別 Group劑量 Dose[mg/(kg·d)]TC/HDL-CLDL-C/HDL-CAINC—177±019097±021077±019MC—912±198??808±154??812±198??10754±114726±099654±114槲皮苷20621±134△△455±074△△521±134△△40537±099△△403±068△△437±099△△

3.2 槲皮苷對高脂血癥大鼠肝脂水平的影響

與高脂對照組相比，槲皮苷10mg/kg組、20mg/kg組、40mg/kg組均可明顯降低高脂血癥大鼠肝臟TC水平(P<0.01)，同時，還可使高脂血癥大鼠肝臟TG水平顯著降低(P<0.05或P<0.01)；槲皮苷10mg/kg組對高脂血癥大鼠肝臟TG水平無明顯影響(表3)。

表3槲皮苷對高脂血癥大鼠肝脂水平的影響

組別Group劑量 Dose[mg/(kg·d)]TC(mmol/L)TG(mmol/L)NC—185±031563±088MC—317±055??831±058??10208±065△△756±074槲皮苷20194±039△△732±072△40182±050△△697±097△△

3.3 槲皮苷對高脂血癥大鼠血清及肝組織中MDA含量和SOD活性的影響

3.3.1槲皮苷對高脂血癥大鼠血清中MDA含量和SOD活性的影響與正常對照組比較，高脂對照組血清中MDA含量明顯升高(P<0.01)，SOD活性明顯降低(P<0.01)。與高脂對照組相比，槲皮苷20mg/kg組、40mg/kg組可明顯降低血清中MDA含量(P<0.01或P<0.05)，升高SOD活性(P<0.01)；槲皮苷10mg/kg組對高脂血癥大鼠血清MDA含量和SOD活性無明顯影響，見表4。

表4槲皮苷對高脂血癥大鼠血清中MDA含量和SOD活性的影響

組別Group劑量 Dose[mg/(kg·d)]MDA(mmol/L)SOD(U/mL)NC—611±12428688±5893MC—911±109??21323±2183??10781±15623851±3812槲皮苷20733±128△26743±3429△△40721±130△△29626±3153△△

3.3.2槲皮苷對高脂血癥大鼠肝組織中MDA含量和SOD活性的影響與正常對照組比較，高脂對照組肝組織中MDA含量明顯升高(P<0.01)，SOD活性明顯降低(P<0.01)。與高脂對照組相比，槲皮苷20mg/kg組、40mg/kg組可明顯降低肝組織中MDA含量(P<0.01或P<0.05)，升高SOD活性(P<0.01或P<0.05)；槲皮苷10mg/kg組對高脂血癥大鼠肝組織中MDA含量和SOD活性無明顯影響(表5)。

表5槲皮苷對高脂血癥大鼠肝組織中MDA含量和SOD活性的影響

組別Group劑量 Dose[mg/(kg·d)]MDA(mmol/gpro)SOD(U/mgpro)NC—275±0786104±850MC—418±118??4030±695??10334±0734728±805槲皮苷20307±052△4806±690△40268±067△△5961±663△△

4 討論

動脈粥樣硬化(AS)的病因和發(fā)病機制雖未明了，但研究表明，脂質(zhì)代謝異常是AS形成的重要因素之一[3]?，F(xiàn)已證實，血清TC、TG、LDL水平與AS形成呈正相關(guān)[4，5]，HDL水平與AS的形成呈負(fù)相關(guān)[6，7]。本實驗結(jié)果表明，高劑量的槲皮苷能顯著降低高脂血癥大鼠TC、TG、LDL-C水平，明顯升高HDL-C水平，這表明槲皮苷具有調(diào)血脂作用。

近年來的研究表明，引起AS的主要因素除了高TC、高TG、高LDL-C、低HDL-C以外，TG/HDL-C、LDL-C/HDL-C比值和AI等血脂綜合指數(shù)也是與AS具有獨立相關(guān)的危險因素，而且能更準(zhǔn)確地反映血脂水平與AS之間的關(guān)系，更具可靠性、敏感性和臨床意義[8～11]。在本實驗中，槲皮苷能明顯降低高脂血癥大鼠的TG/HDL-C、LDL-C/HDL-C比值和AI，這進一步說明了槲皮苷具有良好的調(diào)血脂作用，可防止AS的形成。

SOD是一種存在于生物體內(nèi)的重要氧自由基清除劑，具有清除氧自由基和保護機體細(xì)胞免受自由基損傷的作用。當(dāng)SOD含量不足或活性降低時，會導(dǎo)致氧自由基堆積，使脂質(zhì)氧化產(chǎn)生脂質(zhì)代謝的終產(chǎn)物MDA。而過氧化脂質(zhì)的增多和(或)SOD活性的降低，可直接或繼發(fā)性地導(dǎo)致機體的各種損傷，引發(fā)AS。研究表明，與正常對照組相比，高脂血癥動物血清MDA含量明顯增高，同時發(fā)現(xiàn)血清MDA含量與血清TG和TC含量呈正相關(guān)。本實驗的結(jié)果表明，中劑量和高劑量的槲皮苷可使血清和肝組織SOD活性明顯升高，MDA含量明顯降低，提示槲皮苷可通過提高自由基清除酶的活性以及抑制脂質(zhì)的過氧化而發(fā)揮抗AS作用。

5 結(jié)論

槲皮苷具有防止動脈粥樣硬化的形成的作用，此作用與槲皮苷能調(diào)整實驗性高脂血癥大鼠的血脂代謝、提高機體清除自由基的能力、糾正自由基紊亂、抑制自由基所導(dǎo)致的損傷有關(guān)。

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