復(fù)方首烏蒺藜湯對蘑菇酪氨酸酶激活作用的研究

宋業(yè)強(qiáng)白 鵬

·中醫(yī)中藥·

復(fù)方首烏蒺藜湯對蘑菇酪氨酸酶激活作用的研究

宋業(yè)強(qiáng)1白 鵬2

目的: 確定復(fù)方首烏蒺藜湯水提取物對蘑菇酪氨酸酶活性的影響。方法: 采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法測定蘑菇酪氨酸酶活性。反應(yīng)物2 m L，37℃孵育10 min后，加0.15%DL－多巴1mL，再孵育2min，用分光光度計(jì)于475 nm處測定吸光度A值(A475)。結(jié)果: 觀察組復(fù)方首烏蒺藜湯水提取物對蘑菇酪氨酸酶的激活率為78.01%，對照組白靈片的激活率為10.49%(P＜0.01)。結(jié)論: 復(fù)方首烏蒺藜湯對蘑菇酪氨酸酶有激活作用，且優(yōu)于白靈片。

復(fù)方首烏蒺藜湯； 白癜風(fēng)； 蘑菇酪氨酸酶

白癜風(fēng)是一種以皮膚黏膜色素脫失、表皮黑素細(xì)胞減少為特征的色素障礙性皮膚病。筆者根據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)自擬復(fù)方首烏蒺藜湯治療白癜風(fēng)，臨床療效較好?，F(xiàn)通過復(fù)方首烏蒺藜湯對蘑菇酪氨酸酶活性影響的研究，揭示其治療白癜風(fēng)的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 DL－多巴(Sigma產(chǎn)品)；蘑菇酪氨酸酶(日本和光純藥工業(yè)株式會社產(chǎn)品)；8－甲氧基補(bǔ)骨脂素(大連醫(yī)藥科研所提供)；其它試劑均為市售分析純。7200型分光光度計(jì)由上海尤尼克儀器有限公司制造。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 觀察組(A):復(fù)方首烏蒺藜湯:何首烏、白蒺藜、當(dāng)歸、女貞子、旱蓮草、生地、浮萍、蒼耳子、威靈仙、防風(fēng)、沙苑子、甘草。上述藥物由山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥學(xué)部提供，符合《中華人民共和國藥典》規(guī)定。對照組(B):白靈片:當(dāng)歸、三七、紅花、牡丹皮、桃仁、防風(fēng)、蒼術(shù)、白芷、馬齒莧、赤芍、黃芪。由廣東省佛山馮了性藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(國藥準(zhǔn)字Z44022380)。

1.3 中藥提取方法 A組:稱取復(fù)方首烏蒺藜湯中藥飲片，稍加粉碎，加水適量，加熱回流提取30 min，濾過，殘?jiān)偌铀m量，加熱回流30 min，濾過。合并兩次提取液，濃縮至0.1 g/mL，用0.45μm濾膜濾過，濾液置冰箱貯存?zhèn)溆?。B組:白靈片(0.33 g/片)粉碎，加開水適量浸泡1～2 h，攪勻，藥物濃度為0.1 g/ mL，用0.45μm濾膜濾過，濾液置冰箱貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 酪氨酸酶活性測定方法 采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法測定蘑菇酪氨酸酶活性。反應(yīng)物2 mL，37℃孵育10min后，加0.15%DL－多巴1 mL，再孵育2 min，用分光光度計(jì)于475 nm處測定吸光度A值(A475)。

觀察組和對照組分別分為a、b、c、d共4組。其中a組為:pH 6.8磷酸緩沖液1.9 mL，蘑菇酪氨酸酶0.1 mL(80 u)。b組為:pH 6.8磷酸緩沖液2 mL。c組為:pH 6.8磷酸緩沖液1.8 mL，藥物0.1 mL(濃度0.1 g/mL)，蘑菇酪氨酸酶0.1mL(80 u)。d組為:pH 6.8磷酸緩沖液1.9 mL，藥物0.1 mL(濃度0.1 g/ mL)。

pH 6.8磷酸緩沖液根據(jù)2005版《中華人民共和國藥典》配制。

蘑菇酪氨酸酶激活率按下列公式計(jì)算:激活率(%)A＝[(c－d)－(a－b)]/(a－b)×100，其中，Aa＝A475－A藥＋A酶；Ab＝A475－A藥－A酶；Ac＝A475＋A藥＋A酶；Ad＝A475＋A藥－A酶。

兩組實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次，將3次結(jié)果輸入office2003 excel軟件作數(shù)據(jù)處理，取其平均值。

1.4.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 上述每一實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次。所測實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以ˉx±s表示，采用t檢驗(yàn)，使用office2003 excel和PEMS 3.1醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件作數(shù)據(jù)處理及分析。

2 結(jié)果

見表1。

表1 兩組藥物對蘑菇酪氨酸酶激活率的比較

3 討論

白癜風(fēng)為常見的色素障礙性皮膚病，中醫(yī)又稱之為“白癜”、“白駁風(fēng)”等?！吨T病源候論》云:“白癜者，面及頸項(xiàng)身體肉色變白，與肉色不同，亦不癢痛，謂之白癜。此亦是風(fēng)邪搏于皮膚，血?dú)獠缓退??！焙笫泪t(yī)家多采用養(yǎng)血、活血、祛風(fēng)等治法。

色素障礙性皮膚病如白癜風(fēng)、黃褐斑等的發(fā)病與酪氨酸酶關(guān)系密切。酪氨酸酶是一種多酚氧化酶，是皮膚黑素生物合成的關(guān)鍵酶、限速酶，它不僅決定黑素合成的速率，還是黑素細(xì)胞分化成熟的特征性標(biāo)志。1，2

近年來，關(guān)于中藥提取物對酪氨酸酶活性影響的研究逐漸增多。劉之力等3研究了6種中藥復(fù)方乙醇提取物對酪氨酸酶激活作用，其中I方養(yǎng)血祛風(fēng)，II方滋陰熄風(fēng)，III方行氣活血祛風(fēng)，IV方補(bǔ)陽祛風(fēng)，V方清熱柔肝熄風(fēng)，VI方為綜合組。結(jié)果顯示，I，II， III，VI方顯著激活酪氨酸酶活性，其中II，VI方作用較強(qiáng)。李洪武等4研究了復(fù)方白駁片、白癜風(fēng)丸、柴胡疏肝湯、通竅活血湯、白蝕丸5個(gè)復(fù)方的提取物對蘑菇酪氨酸酶活性的影響，結(jié)果具有活血祛風(fēng)的白癜風(fēng)丸對酪氨酸酶活性的激活作用最強(qiáng)，柴胡疏肝湯、白駁片次之，白蝕丸較弱。復(fù)方首烏蒺藜湯具有養(yǎng)血祛風(fēng)的作用，白靈片具有益氣活血祛風(fēng)的作用。本研究顯示二者均具有激活酪氨酸酶活性的作用，但復(fù)方首烏蒺藜湯優(yōu)于白靈片(P＜0.01)，這與上述學(xué)者的研究結(jié)果既有相同之處，又有一定差異。之所以會出現(xiàn)這種差異，可能與復(fù)方中藥成分復(fù)雜、中藥劑型的不同、實(shí)驗(yàn)方法的不統(tǒng)一等多種因素有關(guān)。

總之，本研究初步揭示了復(fù)方首烏蒺藜湯治療白癜風(fēng)的作用機(jī)制可能與其激活酪氨酸酶活性有關(guān)，而其對人體免疫功能調(diào)節(jié)等方面的作用需要進(jìn)一步研究。

1 Kubo I，Yokokawa Y，Kinst－Hori I.T yrosinase inhibit ors from Bolivian medicinal plants.JNat Prod，1995，58(5):739.

2Smith B，Selby P，Southgate J，et al.Detection of melanoma cells in peripheral blood by m eans of reverse transcriptase and polymerase chain react ion.Lancet，1991，338(8 777):1227.

3劉之力，李雅莉，劉俐，等.六種中藥復(fù)方乙醇提取物對酪氨酸酶激活作用及動物致色素作用的研究.中國皮膚性病學(xué)雜志，2005，19(10):588－591.

4李洪武，朱文元.治療白癜風(fēng)復(fù)方中藥體外對蘑菇酪氨酸酶活性的作用.臨床皮膚科雜志，2000，29(3):133－135.

(收稿:2012－11－16)

The effect of Com pound Radix Shouwu Jili Soup on the activity of mushroom tyrosinase

SONG Ye-qiang，BAIPeng.Department ofDermatology，Affiliated Hospital ofShandong University ofTraditional ChineseMedicine，Jinan，250033

Objective:To determine the effects of water extract of compound radix Shouwu Jili Soup on mushroom tyrosinase activity.Methods:Mushroom tyrosinase activity wasmeasured bymushroom tyrosinase oxidationmethod.Reagents，2 mL，37℃were incubated for 10 minutes，and then，0.15%DL－dopa 1mL was added，and was incubated for another 2minutes.absorbent valueswasmeasured with a spectrophotometer at 475nm(A475).Results:The activation rate was 78.01%in the experimental group and was 10.49% in the control group，with a significant difference(P＜0.01).Conclusion:Compound Radix Shouwu Jili Soup can activatemushroom tyrosinase and the activation was superior to Bai Ling tablet(P＜0.01).

Compound Radix Shouwu Jili Soup；vitiligo；mushroom tyrosinase

1山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院皮膚科，濟(jì)南，250011

2山東省職業(yè)病醫(yī)院皮膚科，濟(jì)南，250062