五種深海魚提取蛋白的SDS-PAGE分析

劉順湖，王瑞韜

（濟(jì)寧學(xué)院生命科學(xué)與工程系，山東 曲阜 273155)

五種深海魚提取蛋白的SDS-PAGE分析

劉順湖，王瑞韜*

（濟(jì)寧學(xué)院生命科學(xué)與工程系，山東 曲阜 273155)

為了給深海魚類提取蛋白質(zhì)的深加工提供參考，以三文魚、狹鱈、比目魚、小黃魚和帶魚五種深海魚為試驗材料，采用酸堿法提取魚肉中蛋白質(zhì)，通過SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳）分析，研究了提取蛋白質(zhì)的亞基構(gòu)成及其相對含量．結(jié)果表明，（1）五種魚的提取蛋白質(zhì)電泳圖譜差異較大，分別由不同數(shù)量和不同分子量的亞基構(gòu)成．三文魚、狹鱈、比目魚、黃魚和帶魚的亞基數(shù)量分別為14、13、13、14和12個；（2）五種魚的提取蛋白質(zhì)的亞基相對平均含量變異范圍為7．15～8．35%，變異系數(shù)變異范圍為38．15～78．63%．亞基相對含量大于10%的較大亞基的數(shù)量和分子量因魚的種類而異．五種魚的提取蛋白質(zhì)亞基數(shù)量、分子量和相對含量均存在差異，說明其蛋白質(zhì)構(gòu)成不同，因而可能有不同的營養(yǎng)價值．

深海魚；提取蛋白質(zhì)；SDS-PAGE；亞基相對含量

中國海洋魚類有1700多種，經(jīng)濟(jì)魚類300多種，常見而產(chǎn)量較高的經(jīng)濟(jì)魚類約70多種[1]，分布于渤海、黃海、東海、南海等海域.其中，深海魚類是對水深超過200米的魚類的總稱，深海魚大多自然生長，深海污染少，生長時期長，具有很高營養(yǎng)價值[2,3].崔芳玲[4]對三文魚、狹鱈、比目魚、小黃魚和帶魚五種深海魚進(jìn)行蛋白質(zhì)含量的比較研究，發(fā)現(xiàn)比目魚中蛋白質(zhì)含量高于其它四種魚類.王可玲[5]等對真鯛、黑鯛、牙鲆、鱸和小黃魚這五種魚類進(jìn)行電泳分析，確定同工酶表達(dá)的組織特性.但對于三文魚、狹鱈、比目魚、小黃魚和帶魚五種深海魚提取蛋白質(zhì)的亞基研究尚未見報道.鑒于此，本研究通過SDS-PAGE方法分析這五種深海魚提取蛋白質(zhì)的亞基構(gòu)成及其相對含量，為深海魚類提取蛋白質(zhì)的深加工提供參考.

1 材料與方法

1.1 試驗材料與試劑

1.1.1 試驗材料

試驗材料為三文魚、狹鱈、比目魚、小黃魚和帶魚等五種深海魚，在青島團(tuán)島農(nóng)貿(mào)市場購得.

1.1.2 試驗試劑與儀器

試驗試劑與儀器由濟(jì)寧學(xué)院生命科學(xué)與工程系生命科學(xué)實驗中心提供.不連續(xù)體系SDS-PAGE有關(guān)試劑的配制,電泳貯存液的配制參照參考生物化學(xué)實驗的方法[6].試驗所用Marker為低分子量蛋白質(zhì)Marker（14.4kDa-97.4kDa），購買于北京索萊寶科技有限公司.

1.2 試驗方法

1.2.1 魚蛋白的提取方法

參照陳申如等人試驗[7,8]，利用酸堿法提取魚肉蛋白，試驗于2013年4月在濟(jì)寧學(xué)院南四湖濕地生物資源研究所進(jìn)行，平均室溫15-20℃.其中蛋白質(zhì)提取的流程如下：

（1）用分析天平準(zhǔn)確稱取4g魚肉放于研缽中.

（2）將研缽中加入1.0mol/L的鹽酸 2mL，研

碎魚肉并轉(zhuǎn)移至燒杯中.按料水比1∶9(M∶V, g/ml)的比例加入蒸餾水.

（3）用1.0mol/LNaOH調(diào)節(jié)PH到2.39，將蛋白液轉(zhuǎn)入離心管中.

（4）將上述離心管振蕩器中振蕩1.5h,達(dá)到時間后置于離心機(jī)中離心(轉(zhuǎn)速為4500 r/min),時間15min,待離心完畢,將上清液轉(zhuǎn)移到另一只同樣的離心管中.

（5）取上清液，再次置于4℃離心機(jī)中離心(轉(zhuǎn)速為4500 r/min),時間15min.再次得到上清液，即為待測魚蛋白.

1.2.2 魚蛋白亞基分析

將脫色后的電泳膠帶倒去脫色液，放置在Alpha imager儀器下通過連接電腦進(jìn)行拍照取樣.再用Quantity one軟件進(jìn)行分析.

1.2.3 數(shù)據(jù)分析

利用Quantity one軟件[9]對電泳圖片進(jìn)行分析整理數(shù)據(jù)，用Excel軟件進(jìn)行描述性統(tǒng)計分析，進(jìn)行平均值和變異系數(shù)的計算.變異系數(shù)的計算公式為：

2 試驗結(jié)果分析

2.1 五種魚提取蛋白的SDS-PAGE電泳圖譜

五種魚提取蛋白質(zhì)的電泳圖譜見圖1，蛋白質(zhì)亞基構(gòu)成見表1.

圖1 五種魚提取蛋白質(zhì)電泳圖譜

表1 五種魚提取蛋白質(zhì)亞基及其分子量（KDa)

S366.6761.5178.9078.3573.55 S443.8055.1064.4068.0962.65 S540.2841.8948.4560.3940.28 S636.9938.7340.0150.2633.97 S733.7531.8234.2041.3425.69 S825.1223.5128.6934.8820.89 S922.2421.8723.5129.3316.62 S1018.8519.7319.2824.3015.87 S1116.1519.1717.0017.0014.07 S1214.6516.7115.8715.6012.48 S1313.1414.6512.6213.91-S1412.58--10.88-

由圖1和表1可見，五種魚提取蛋白的電泳圖譜存在較大差異.其中，三文魚有14個亞基，亞基的分子量變異范圍為12.58～92.08KDa；狹鱈有13個亞基，亞基的分子量變異范圍為14.65～96.72KDa；比目魚有13個亞基，亞基的分子量變異范圍為12.62～99.47KDa；黃魚有14個亞基，亞基的分子量變異范圍為10.88～100.88KDa；帶魚有12個亞基，亞基的分子量變異范圍為12.48～99.47KDa.由此推斷，五種魚的蛋白質(zhì)種類不同，其營養(yǎng)價值可能存在差異.

2.2 五種魚提取蛋白的亞基相對含量

表2 五種魚提取蛋白質(zhì)亞基的相對含量(%)

由表2可見，五種魚提取蛋白質(zhì)亞基的平均相對含量差異較小，變異范圍為7.15～8.33%，其中，帶魚的提取蛋白質(zhì)亞基平均相對含量最高（8.33%），三文魚和黃魚的最低（均為7.15%）；但變異系數(shù)差異較大，變異范圍為38.15～78.63%，其中，帶魚的最低（38.15%），比目魚的最高（78.63%）.就每一種魚而言，各個亞基的相對含量差異較大.

三文魚各亞基相對含量變異范圍為2.6～14.7%，有4個亞基的相對含量大于10%，7

個亞基的相對含量低于5%，較高相對含量的亞基分子量集中在13.14～16.15KDa.狹鱈亞基相對含量變異范圍為2.8～14.5%，有4個亞基的相對含量大于10%，3個亞基的相對含量低于5%，較高相對含量的亞基分子量集中在14.65～19.17KDa.比目魚亞基相對含量變異范圍為2.3～25.7%，有2個亞基的相對含量大于10%，5個亞基的相對含量低于5%，較高相對含量的亞基分子量集中在19.28和12.62KDa.黃魚亞基相對含量變異范圍為2.7～13.7%，有3個亞基的相對含量大于10%，5個亞基的相對含量低于5%，較高相對含量的亞基分子量集中在34.88～41.34KDa.帶魚亞基相對含量變異范圍為3.9～16.0%，有3個亞基的相對含量大于10%，2個亞基的相對含量低于5%，較高相對含量的亞基分子量集中在20.89～25.69KDa.

3 討 論

通過對五種深海魚提取蛋白質(zhì)的SDS-PAGE分析獲得蛋白質(zhì)亞基譜帶，這五種魚的蛋白質(zhì)亞基譜帶共同點在于蛋白質(zhì)亞基在譜帶中從高分子量到低分子量分布均勻，即均存在高分子量的亞基，也存在低分子量的亞基；但亞基的相對含量差異較大，每種魚都有相對含量較高的亞基（大于10%），也有相對含量較低的亞基（低于5%）.對于每一種魚而言，這些亞基的分子量不同.這五種魚的譜帶不同點在于每種魚的譜帶含有的亞基數(shù)量不同，亞基的分子量不同，亞基的相對含量也不同.由此可見，這五種魚的蛋白質(zhì)種類及構(gòu)成不同，因而五種魚的蛋白質(zhì)營養(yǎng)價值不同，需要分別進(jìn)行不同的深加工，為此，需要對五種魚的提取蛋白質(zhì)分子構(gòu)成和營養(yǎng)價值繼續(xù)研究，以便開發(fā)出相應(yīng)的新產(chǎn)品，滿足消費者的更多需求.

標(biāo)*者為生命科學(xué)與工程系2013屆生物工程專業(yè)畢業(yè)生

[1]常志娟，張培旗.酶解海洋生物蛋白的生物活性物質(zhì)及開發(fā)功能食品的前景[J].食品工業(yè)，2010,6:63-66.

[2]李瑩.深海魚資源的深層次開發(fā)[J].中國油脂，2001，26(4):43-44.

[3]鄧君明，麥康森，艾慶輝，張文兵，王小潔.與類蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)代謝的研究進(jìn)展[J].中國水產(chǎn)科學(xué)，2007,14(1): 165-172.

[4]崔芳玲.五種深海魚類蛋白含量的比較研究[D].曲阜市：濟(jì)寧學(xué)院學(xué)士畢業(yè)論文，2012.

[5]王可玲，尤鋒，徐成，吳謖琦.5種海水魚同工酶表達(dá)的組織特性及其電泳的初步分析[J].海洋與湖沼,1996,27(6): 626-632.

[6]陳鈞輝，李俊，張冬梅，等.生物化學(xué)實驗（第四版）[M] .北京:科學(xué)出版社，2008.

[7]陳申如,張其標(biāo),倪輝.酸法提取鰱魚魚肉蛋白質(zhì)技術(shù)的研究[J].海洋水產(chǎn)研究, 2004,(5): 61- 64.

[8]劉安軍，王瑩,等.鱈魚鹽溶蛋白提取條件優(yōu)化及其在魚糜制品加工中的變化[J].現(xiàn)代食品科技,2010,26,(10):1107.

[9]李建中，陶敏，曾琛,等.四倍體魚促性腺激素a亞基cDNA的克隆與序列分析[J]湖南師范大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報，2007,30(3):84-88.

（責(zé)任編輯 尹春光）

Analysis on the Extracted Protein from Five Species of Deep-sea by SDS-PAGE

LIU Shunhu, WANG Ruitao*
(Department of Life Science and Engineering, Jining University, Qufu 273155,China)

In order to provide reference for deep processing of deep-fish extracted protein, the subunits content and compositions of extracted protein from five deep-sea fish which included salmon, pollock, halibut, yellow croaker and trichiurus japonicas by SDS-PAGE. The results showed that (a)there existed various subunits with amounts and molecular in electrophoresis map of protein extracted from five fish.(b)the various rang of average relative content of subunits and coefficient of variation(C.V) were from 7.15 to 8.35%, from 38.15 to 78.63%, respectively. Then, the nutrient value of five fish protein may be different for their subunit amount and molecular.

deep-sea fish；protein extracted；SDS-PAGE；relative content of protein subunits

Q51

A

1004—1877（2014）03—043—03

2014-01-18

劉順湖（1960-），男，山東招遠(yuǎn)人，濟(jì)寧學(xué)院生命科學(xué)與工程系教授，博士，研究方向：生物蛋白質(zhì)深加工.