血清腫瘤標(biāo)志物診斷早期卵巢癌的相關(guān)研究進(jìn)展△

涂彬彬 吳令英李寧

中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院腫瘤醫(yī)院婦瘤科，北京 100021

#通信作者（corresponding author），e-mail：wulingying@csco.org.cn

卵巢癌是女性生殖道常見的惡性腫瘤之一，其死亡率位居?jì)D科惡性腫瘤首位[1]。Ⅰ、Ⅱ期卵巢癌的5年生存率較高，分別達(dá)90%和70%，Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌的5年生存率分別僅為40%和20%，而卵巢癌的總體5年生存率不足50%。卵巢癌總體生存率低的主要原因是卵巢癌難以在早期發(fā)現(xiàn)，文獻(xiàn)報(bào)道僅有19%的卵巢癌在出現(xiàn)卵巢外擴(kuò)散前得以確診，而60%～70%在診斷時(shí)已屬晚期。卵巢癌難以在早期（Ⅰ、Ⅱ期）發(fā)現(xiàn)的主要原因是早期沒有明顯的癥狀體征，因此臨床上急需尋找卵巢癌的早期檢測(cè)手段，使卵巢癌得以在早期時(shí)發(fā)現(xiàn)，從而改善卵巢癌的預(yù)后。目前，血清學(xué)檢測(cè)因其便捷、創(chuàng)傷小等優(yōu)點(diǎn)而成為探索卵巢癌早期診斷方法的熱門研究領(lǐng)域。目前，關(guān)于早期卵巢癌的血清腫瘤標(biāo)志物的研究較多，以下對(duì)該領(lǐng)域的主要研究作一綜述。

1 CA125

CA125，即黏蛋白16，是一種由體腔上皮分泌的高分子量蛋白質(zhì)，可誘導(dǎo)間皮細(xì)胞和苗勒氏組織的分化。CA125通過其單抗OC125可以在人體的血清和組織中被檢測(cè)到。CA125是目前診斷卵巢癌最常用的血清腫瘤標(biāo)志物。卵巢癌中的CA125主要表達(dá)在其細(xì)胞表面，并分泌到血液中。CA125在80%的上皮性卵巢癌中升高，但其檢測(cè)早期卵巢癌的敏感度并不高，僅有27%～60%。另外，CA125在良性疾病和其他惡性腫瘤中亦會(huì)升高，如良性婦科疾?。òㄗ訉m內(nèi)膜異位癥、盆腔炎癥、卵巢良性囊腫）、胸膜炎、心包炎、腹膜炎、腹腔內(nèi)廣泛原發(fā)癌、乳腺癌、肺癌等[2,3]。其中，子宮內(nèi)膜異位癥患者血清CA125的陽(yáng)性率可達(dá)53%，良性卵巢囊腫達(dá)27.8%，腹腔內(nèi)廣泛原發(fā)癌可達(dá)30%。因此，鑒于CA125假陽(yáng)性率高、敏感度低，將CA125作為卵巢癌早期診斷的唯一指標(biāo)仍有一定的局限性，目前CA125更多地應(yīng)用于病情監(jiān)測(cè)、復(fù)發(fā)預(yù)測(cè)和預(yù)后評(píng)價(jià)。

2 人類附睪特異性蛋白4（human epididymis protein 4，HE4）

HE4在男性附睪中表達(dá)，是精子成熟過程中的蛋白酶抑制劑。女性中，HE4主要在正常女性的生殖道上皮表達(dá)和分泌。Hough[4]和Schummer[5]等在基因水平證實(shí)HE4基因在卵巢癌組織中過表達(dá)，之后Drapkin等[6]通過免疫組化發(fā)現(xiàn)HE4蛋白在93%的卵巢漿液性癌、50%的卵巢透明細(xì)胞癌及100%的卵巢子宮內(nèi)膜樣癌的腫瘤組織中高表達(dá)，而在正常卵巢組織中不表達(dá)，提示HE4可能作為卵巢癌的潛在腫瘤標(biāo)志物。2003年Hellstrom等通過免疫小鼠開發(fā)了HE4的單克隆抗體來檢測(cè)血清HE4水平，并對(duì)65例健康對(duì)照組、19例良性卵巢疾病和37例卵巢癌（30例晚期和7例早期）患者進(jìn)行初步探討。研究發(fā)現(xiàn)血清HE4水平在早期和晚期卵巢癌患者中均升高，在鑒別早期卵巢癌與正常對(duì)照組時(shí)，特異度為100%，HE4診斷早期卵巢癌的敏感度為43%（3/7），而CA125的敏感度僅為29%（2/7）；在鑒別早期卵巢癌與卵巢良性腫瘤時(shí)，HE4（AUC=0.86）的能力亦優(yōu)于 CA125（AUC=0.80）。另外Huhtinen等[7]發(fā)現(xiàn)血清HE4水平在卵巢癌患者中顯著升高，而在子宮內(nèi)膜異位癥患者中沒有升高，CA125則在卵巢癌和晚期子宮內(nèi)膜異位癥或卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫患者中均升高，進(jìn)一步說明HE4鑒別卵巢癌和卵巢良性腫瘤的能力優(yōu)于CA125。Moore等[8]對(duì)67例侵襲性卵巢上皮性癌（13例Ⅰ期和2例Ⅱ期）和166例卵巢良性疾病患者的9種腫瘤標(biāo)志物的血清水平進(jìn)行了測(cè)定，包括HE4、CA125。研究發(fā)現(xiàn)對(duì)于診斷Ⅰ期患者，HE4在所有標(biāo)志物中敏感度最高，當(dāng)特異度為90%時(shí)，HE4的敏感度為46.2%，CA125為23.1%；當(dāng)特異度為95%時(shí)，HE4的敏感度為45.9%，CA125為15.1%。Abdel-Azeez[9]和Ghasemi[10]的研究同樣認(rèn)為HE4對(duì)早期卵巢癌的診斷能力優(yōu)于CA125。目前，HE4已經(jīng)開始作為卵巢癌的診斷輔助指標(biāo)應(yīng)用于臨床，成為除CA125外最有應(yīng)用價(jià)值的標(biāo)志物。

3 巨細(xì)胞集落刺激因子（macrophage colony stimulating factor，M-CSF）

M-CSF是由多種細(xì)胞產(chǎn)生的一種具有譜系特異性的造血細(xì)胞因子，刺激骨髓造血祖細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落的形成、參與炎癥反應(yīng)，并在許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起著一定的作用，包括調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、黏附與遷移，促進(jìn)腫瘤新生血管的形成等。早期研究[11,12]發(fā)現(xiàn)61%～68%的卵巢上皮癌患者其血清M-CSF水平升高，而正常健康對(duì)照組和良性腫瘤組患者中僅有2.5%～7%血清M-CSF水平升高，如將M-CSF與CA125結(jié)合，可診斷96%的卵巢癌患者，以上研究均表明M-CSF有望作為卵巢癌早期診斷的腫瘤標(biāo)志物。之后Suzuki等[13]對(duì)49名惡性生殖細(xì)胞腫瘤患者和64名成熟良性囊性畸胎瘤患者的研究發(fā)現(xiàn)Ⅰ期患者中有87%（20/23）血清M-CSF水平升高，其中16名無性細(xì)胞瘤患者血清M-CSF水平全部升高，而在成熟良性囊性畸胎瘤患者中，僅有11%（7/64）患者的血清M-CSF水平升高。該項(xiàng)提示M-CSF有希望作為早期惡性生殖細(xì)胞腫瘤，尤其是無性細(xì)胞瘤篩選的腫瘤標(biāo)志物。Skates的研究[14]也表明MCSF和CA125結(jié)合可以提高早期卵巢癌（27例）的檢出率，當(dāng)特異度為98%時(shí)，M-CSF結(jié)合CA125診斷Ⅰ期卵巢癌的敏感度為67%，而單獨(dú)CA125的敏感度為45%，單獨(dú)M-CSF的敏感度為28%。另外，Donach的研究[15]同樣認(rèn)為結(jié)合M-CSF可以提高敏感度。然而，M-CSF能否在臨床上用于卵巢癌尤其是早期卵巢癌的診斷尚待深入研究。

4 骨橋蛋白（osteopontin，OPN）

OPN是由免疫細(xì)胞或非免疫細(xì)胞分泌于細(xì)胞外基質(zhì)的一種磷酸化糖蛋白，主要介導(dǎo)免疫應(yīng)答、骨的重吸收、組織的修復(fù)、炎癥和上皮細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。研究[16-17]發(fā)現(xiàn)OPN在卵巢癌組織中的表達(dá)增高，與卵巢癌的分級(jí)、分期正相關(guān)，在CA125表達(dá)陰性的卵巢癌組織中呈100%表達(dá)。Kim等[18]對(duì)107例健康婦女、46例良性卵巢疾病、51例上皮性卵巢癌患者（其中10例為早期患者）及47例其他婦科癌癥患者的血清OPN水平進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)卵巢癌組與健康對(duì)照組之間OPN水平有顯著性差異。當(dāng)特異度為80.4%，血清OPN診斷早期（Ⅰ/Ⅱ）和晚期（Ⅲ/Ⅳ）卵巢癌的敏感度分別為80.4%和85.4%，提示OPN可能作為早期卵巢癌的血清篩選標(biāo)志物。另外Meinhold-Heerlein等的研究[19]亦發(fā)現(xiàn)卵巢癌患者血清中OPN水平較對(duì)照組明顯升高，其與CA125結(jié)合可提高卵巢癌診斷的敏感度和特異度，并可全部正確區(qū)分早期卵巢癌（9例）和健康對(duì)照組（67例），但對(duì)早期卵巢癌和良性疾病及晚期卵巢癌的鑒別能力有限。因此，以上研究均提示OPN有望作為早期卵巢癌的診斷指標(biāo)，可進(jìn)一步擴(kuò)大樣本進(jìn)行研究以期提供更多的證據(jù)。

5 間皮素（mesothelin，MES）

MES是一種表達(dá)于體腔間皮細(xì)胞膜的糖蛋白，參與細(xì)胞間的黏附和相互作用，當(dāng)其表達(dá)升高時(shí)可在血清中檢出，稱為可溶性間皮素相關(guān)蛋白（soluble mesothelin-related protein，SMRP）。有研究表明血清SMRP水平在67%～76%的卵巢癌患者中升高，而在正常對(duì)照組中未見升高。Mcintosh[20]對(duì)52例卵巢癌患者（其中10例為Ⅰ～Ⅱ期）、43例良性卵巢腫瘤患者及220例正常對(duì)照組的血清CA125及MES水平進(jìn)行了測(cè)定，研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)特異度為98%時(shí)，CA125和SMRP二者結(jié)合鑒別卵巢癌和正常對(duì)照組的敏感度為86.5%，高于單獨(dú)CA125（78.8%）和SMRP（59.6%），且CA125和SMRP結(jié)合鑒別卵巢癌與良性卵巢腫瘤的敏感度為44.1%，仍高于單獨(dú)CA125（37.2%）和SMRP（28.8%）。更重要的是，這項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)CA125和SMRP結(jié)合亦有助于早期卵巢癌的檢出，但由于病例數(shù)太少（20%），無法得出明確的結(jié)論。Fritz-Rdzanek的研究[21]亦進(jìn)一步證實(shí)了二者結(jié)合有助于提高早期卵巢癌的診斷。Badgwell的研究[22]發(fā)現(xiàn)12%的早期卵巢癌患者血清SMRP水平升高，而在良性腫瘤患者中僅1.7%的患者血清SMRP升高。以上研究均提示血清SMRP檢測(cè)可能作為早期卵巢癌的診斷指標(biāo)，但SMRP檢測(cè)的效力及是否需要與其他指標(biāo)結(jié)合尚待進(jìn)一步的研究。

6 人類激肽緩釋酶（Human Kallikreins，HK）

HK是由位于人類染色體19q13.3～q13.4的一組基因編碼的絲氨酸蛋白酶。這組基因由15個(gè)串聯(lián)的HK基因組成，其所編碼的蛋白為HK1～HK15。HK表達(dá)于上皮組織和內(nèi)分泌組織，并能在體液中檢出，其通過與一些生長(zhǎng)因子、激素或細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合，參與了細(xì)胞凋亡、血管生成和腫瘤轉(zhuǎn)移等過程。有研究報(bào)道多種HK在卵巢癌患者腫瘤組織中的表達(dá)水平升高，其中HK10、HK6在CA125陰性的卵巢癌患者腫瘤組織的表達(dá)率為100%。這些研究均提示HK可能作為診斷卵巢癌的潛在的血清腫瘤標(biāo)志物。

6.1 HK10

Luo等[23]發(fā)現(xiàn)HK10在56%（45/80）的卵巢癌患者的血清中顯著升高，其水平＞1.5μg/l，但在健康對(duì)照組中不見升高，且HK的升高與CA125并不相關(guān)。以0.71μg/l為截點(diǎn)，HK10診斷卵巢癌ROC曲線下面積為0.92，當(dāng)特異度為95%時(shí)，敏感度為78%，提示HK10可能作為診斷卵巢癌的敏感指標(biāo)。隨后該作者的另一項(xiàng)研究不但證實(shí)了上一研究的結(jié)論，而且發(fā)現(xiàn)當(dāng)特異度為90%時(shí)，HK10診斷Ⅰ期和Ⅱ期卵巢癌患者的敏感度為35%，CA125的敏感度為30%，而二者結(jié)合的敏感度為51%，較單獨(dú)CA125和HK10分別提高了21%和16%。另有研究還發(fā)現(xiàn)Ⅰ期漿液性卵巢癌組織HK10 mRNA水平較正常卵巢組織顯著升高。雖然該研究是在卵巢癌組織中進(jìn)行，但可以提示HK10有望作為卵巢癌的血清早期腫瘤標(biāo)志物。

6.2 HK6

Diamandis的研究[24]第一次發(fā)現(xiàn)血清HK6水平在66%的卵巢癌患者（53/80）中顯著升高，提示HK6有望作為卵巢癌診斷的指標(biāo)。隨后該作者的另一項(xiàng)研究對(duì)146例原發(fā)性卵巢癌、141例良性腹腔疾病、97例健康婦女的共384例血清標(biāo)本進(jìn)行HK6水平的測(cè)定，發(fā)現(xiàn)當(dāng)特異度為90%和95%時(shí)，血清HK6水平診斷早期卵巢癌（Ⅰ期32例/Ⅱ期11例）患者的敏感度分別為21%和26%，低于CA125的26%和30%，但如將HK和CA125結(jié)合，診斷早期卵巢癌的敏感度提高到42%和37%。該項(xiàng)研究提示HK6可能不適合單獨(dú)作為早期卵巢癌的診斷指標(biāo)，但其與CA125結(jié)合可以提高早期卵巢癌診斷的敏感度。另外，有研究[25]也證實(shí)CA125 mRNA結(jié)合HK6 mRNA水平提高了早期卵巢癌診斷的敏感度（特異度為75%）和陰性預(yù)測(cè)值，分別為72%和40%，而單獨(dú)CA125僅為56%和33.3%。

6.3 其他HK

關(guān)于其他HK的研究相對(duì)較少。有研究表明血清HK8水平在62%（24/40）的卵巢癌患者中升高；Eleftherios[26]首次在人體體液中采用免疫熒光法檢測(cè)HK11水平，并發(fā)現(xiàn)70%的卵巢癌患者其血清HK11水平升高，之后McIntosh等[27]報(bào)道HK11可以有效鑒別卵巢癌與健康對(duì)照，但與CA125相比較，其對(duì)良性卵巢疾病的診斷并不敏感；George[28]首次在人體體液中采用免疫熒光法檢測(cè)HK5水平，并發(fā)現(xiàn)HK5血清水平在69%的卵巢癌患者中升高，另有研究[29]發(fā)現(xiàn)當(dāng)特異度為95%時(shí)，52%的卵巢癌患者的血清HK5水平升高，而良性腫瘤或交界性腫瘤患者血清中基本無法檢測(cè)到HK5，且HK5水平與分期正相關(guān)，表明其可以作為卵巢癌診斷的一個(gè)指標(biāo)。以上HK是否能夠作為早期卵巢癌的診斷標(biāo)志物尚待進(jìn)一步的研究。

7 非蛋白標(biāo)志物microRNA

microRNA是一類內(nèi)源性非編碼單鏈小分子RNA，在基因轉(zhuǎn)錄后水平上通過與靶mRNA互補(bǔ)結(jié)合，抑制其翻譯或降解mRNA。研究[30]指出microRNA的表達(dá)水平與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān)。近來發(fā)現(xiàn)一種新的實(shí)時(shí)PCR方法可以用于檢測(cè)血清microRNA水平。關(guān)于卵巢癌的研究[31]發(fā)現(xiàn) microRNA21、microRNA92、microRNA93、microRNA126和 microRNA29a在卵巢癌患者的血清中表達(dá)較正常對(duì)照組升高，而microRNA155、microRNA127和microRNA99b的表達(dá)則下降，且其中3例CA125水平正常的卵巢癌患者其血清 microRNA21、microRNA92、microRNA93水平升高。Chung[32]的研究發(fā)現(xiàn)血清miR-132、miR-26a、let-7b、miR-145和miR-143在卵巢癌中的表達(dá)高于正常對(duì)照，miR-132、miR-26a、let-7b和miR-145則相反。以上研究均表明血清microRNA有望作為卵巢癌診斷的補(bǔ)充標(biāo)志物。目前，尚沒有可用于診斷卵巢癌的microRNA有效模型，microRNA在卵巢癌診斷中的作用尚待深入研究。

8 小結(jié)

綜上研究，除CA125以外，檢測(cè)血清HE4、SMRP、HK、M-CSF、OPN和microRNA水平均可能是鑒別健康對(duì)照婦女及卵巢良、惡性腫瘤患者的有效指標(biāo)，且以上研究均提示這些標(biāo)志物有助于提高早期卵巢癌診斷的敏感度和特異度，與CA125聯(lián)合檢測(cè)時(shí)檢測(cè)效能提升更為明顯。目前，除了HE4已經(jīng)在臨床上開始應(yīng)用于卵巢癌的診斷外，其余指標(biāo)尚未用于卵巢癌患者的早期診斷，但有望在不久的將來用于卵巢癌的臨床指導(dǎo)。如果能發(fā)現(xiàn)診斷早期卵巢癌的有效指標(biāo)，將大大提高早期卵巢癌的診斷率，使患者得到及時(shí)診斷和治療，從而提高卵巢癌的整體預(yù)后。

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