離子色譜法檢測(cè)生鮮乳中硫氰酸根改進(jìn)初探

李 輝 徐秀玲 穆阿麗 （山東省青島市飼料獸藥檢測(cè)站 266071）

在生鮮乳中摻入硫氰酸鈉，可以抑菌、保鮮，延長(zhǎng)生鮮乳的保存期，但是硫氰酸鈉在人體內(nèi)釋放的氰根離子能很快與細(xì)胞色素氧化酶中的三價(jià)鐵離子結(jié)合，抑制該酶活性，使組織不能利用氧，可引起重度中毒，少量的食入就會(huì)對(duì)人體造成極大傷害。2008年12月硫氰酸鈉被衛(wèi)生部列入第一批公布的《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單》中，被認(rèn)為是可能違法添加的非食用物質(zhì)。

硫氰酸根檢測(cè)的常見(jiàn)方法有滴定法、光譜法、色譜法、電分析法和離子交換色譜法等。2009年衛(wèi)生部公布了基于離子色譜的硫氰酸根檢測(cè)方法是基于戴安公司離子色譜，其前處理采用乙腈沉淀牛奶中的蛋白，離心后稀釋上清液進(jìn)行測(cè)定，色譜條件采用梯度洗脫。

本文研究了采用等度洗脫的離子色譜儀器檢測(cè)，對(duì)生鮮乳中硫氰酸根檢測(cè)方法進(jìn)行了優(yōu)化調(diào)整。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑 瑞士萬(wàn)通850型離子色譜儀(配電導(dǎo)檢測(cè)器、858自動(dòng)進(jìn)樣器)；固相萃取小柱：Supelclean LC-18 SPE Tubes；硫氰化鉀標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥98.5%)。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 準(zhǔn)確稱取于80℃烘箱內(nèi)烘干2h的硫氰化鉀1.6986g于1000ml容量瓶中，定容，混勻，得1000mg/L硫氰酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。取硫氰酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液1ml，置于100ml容量瓶中，加水至刻度，此溶液含硫氰酸10mg/L。移取0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0ml硫氰酸標(biāo)準(zhǔn)中間液，用水定容至10ml，濃度分別為0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0mg/L。

1.3 色譜條件 色譜柱Metrosep A Supp 5-250/4.0mm、檢測(cè)器電導(dǎo)檢測(cè)器、淋洗液3.2mmol/L Na2CO3+1.0mmol/L NaHCO3+7.5%Acetone、流速0.7ml/min、柱溫30℃、進(jìn)樣體積20μl。

1.4 樣品前處理 準(zhǔn)確量取液態(tài)奶樣品4ml，加入5ml色譜純丙酮，渦旋混勻，10000r/min離心3min，取上清液用超純水稀釋2倍，過(guò)經(jīng)5ml甲醇和10ml水活化的LC-18小柱除去樣品中的脂肪，然后上機(jī)進(jìn)行樣品檢測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品色譜圖 圖1為硫氰酸根標(biāo)準(zhǔn)品圖譜，可見(jiàn)保留時(shí)間在19min左右。圖2中自上而下，圖譜1、2、3依次是牛奶樣品經(jīng)過(guò)丙酮、乙腈和5%乙酸沉淀蛋白后的測(cè)試圖，經(jīng)過(guò)丙酮沉淀蛋白后的樣品干擾更少，檢測(cè)結(jié)果更為理想。

2.2 線性范圍和檢出限 在上述色譜條件下，以測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的濃度(mg/L)為橫坐標(biāo)，硫氰酸色譜峰面積(μS×min)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見(jiàn)圖3。

回歸方程為A=4.75726E-3×Q-2.72040 E-3，R=0.999869，硫氰酸離子色譜具有良好響應(yīng)值，峰面積與標(biāo)準(zhǔn)系列濃度呈良好的線性關(guān)系，線性范圍0.1～5.0mg/L。以3倍信噪比計(jì)算求得儀器檢出限為0.082mg/L。

2.3 方法的選擇 衛(wèi)生部推薦的“離子色譜法測(cè)定牛奶中硫氰酸根”方法前處理采用乙腈沉淀牛奶中的蛋白，然后稀釋樣品進(jìn)行測(cè)定，色譜條件采用梯度洗脫。該方法前處理過(guò)程簡(jiǎn)單，但色譜條件采用梯度洗脫，離子色譜儀必須具備梯度洗脫功能才能實(shí)現(xiàn)；且在測(cè)定凍融過(guò)的生鮮乳樣品時(shí)，容易出現(xiàn)上清液與沉淀分離不徹底的問(wèn)題，上清液渾濁、雜質(zhì)較多，容易堵塞小柱，增加了實(shí)驗(yàn)成本，浪費(fèi)人力物力，尤其不利于對(duì)大批量生鮮乳樣品的監(jiān)督檢測(cè)。

通過(guò)查閱文獻(xiàn)，比較了乙酸溶液、乙腈和丙酮沉淀蛋白，選擇用丙酮沉淀蛋白，凈化更為充分，其溶液組成與所使用的淋洗液組成成分更相近，更利于硫氰酸根的檢測(cè)，試驗(yàn)結(jié)果比較理想。另外采用等度洗脫，拓寬了離子色譜儀的選擇范圍。

圖1 硫氰酸根標(biāo)準(zhǔn)品圖譜

圖2 不同方法蛋白色譜圖對(duì)比

圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.4 方法回收率和精密度 取一份經(jīng)凍融后的生鮮乳樣品作為空白對(duì)照，分別取該樣品添加10mg/L硫氰酸標(biāo)準(zhǔn)中間液40、400、1000μl，以3種濃度做加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，每個(gè)濃度重復(fù)5次，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 樣品加標(biāo)回收率(n=5) (mg/L、%)

另取6份生鮮乳平行樣，采用本方法進(jìn)行精密度試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 精密度試驗(yàn)(n=6) (mg/L、%)

3 結(jié)論

本試驗(yàn)前處理簡(jiǎn)單，采用丙酮沉淀蛋白，凈化充分，沉淀與上清分離徹底，其溶液組成與所使用的淋洗液組成成分更接近，有利于硫氰酸根的檢測(cè)。方法檢出限低，分離效果較好，準(zhǔn)確性高，對(duì)質(zhì)檢部門開(kāi)展生鮮乳中硫氰酸根殘留監(jiān)督檢查、打擊非法添加行為具有現(xiàn)實(shí)參考價(jià)值。

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