HPLC-ELSD法測(cè)定加味玉屏風(fēng)顆粒中黃芪甲苷的含量

范其坤 陳梅榮 汪 軍 王 暉

(江西省藥物研究所，江西 南昌 330029)

加味玉屏風(fēng)顆粒是在臨床經(jīng)驗(yàn)方的基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)的中藥新藥，由金銀花、防風(fēng)、綿馬貫眾等六味中藥組成，具有清熱、解毒、補(bǔ)氣功效。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，筆者選擇處方中君藥黃芪的有效成分黃芪甲苷作為指標(biāo)，通過(guò)條件優(yōu)化，建立了高效液相色譜法-蒸發(fā)光散射(HPLC-ELSD)測(cè)定加味玉屏風(fēng)顆粒中黃芪甲苷含量的方法，該方法簡(jiǎn)便易行，專屬性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于加味玉屏風(fēng)顆粒中黃芪甲苷的含量測(cè)定。

1 材料與方法

1.1 儀器

高效液相色譜儀(包括LC-10AD VP泵，島津CTO-2AS柱溫箱，Alltech-500ELSD檢測(cè)器，XWK-Ⅲ無(wú)油空氣泵，N2000色譜工作站)；HH-4恒溫?cái)?shù)顯水浴鍋(國(guó)華電器有限公司)；KQ-250DE型醫(yī)用數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥

黃芪甲苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物檢定所，批號(hào)110781-200801)；乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑為分析純。

1.3 色譜條件

Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈-水(34∶66)；漂移管溫度：105℃；載氣流量：2.5 L/min；流速：1mL/min；進(jìn)樣量：20μL；理論塔板數(shù)：按黃芪甲苷計(jì)算不得低于8000。

1.4 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。

1.5 供試品溶液的制備

取加味玉屏風(fēng)顆粒研細(xì)，取細(xì)粉約5g，精密稱定，超聲提取60min，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5ml，微熱使溶解，用乙醚輕搖洗滌2次，20ml/次，棄去乙醚液，水液用水飽和的正丁醇振搖提取5次，20ml/次。合并正丁醇液，用氨試液洗滌3次，40 ml/次。正丁醇液回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

1.6 陰性樣品溶液的制備

取不含黃芪的陰性樣品，按供試品溶液制備方法同法制備，即得。

1.7 測(cè)定法

精密量取對(duì)照品溶液10μl，20μl，供試品溶液20μl注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。

2 結(jié)果

2.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

分別將黃芪甲苷對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液注入高效液相色譜儀，結(jié)果供試品溶液色譜圖中，呈現(xiàn)與對(duì)照品溶液相同保留時(shí)間的色譜峰，且基線平穩(wěn)、分離度好，而陰性對(duì)照溶液在此保留時(shí)間無(wú)色譜峰，見(jiàn)圖1～3。

圖1 黃芪甲苷對(duì)照品色圖譜

圖2 供試品色圖譜

圖3 陰性對(duì)照色圖譜

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 線性關(guān)系考察

取黃芪甲苷對(duì)照品約6mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，從中分別精密吸取2μl、4μl、8μl、12μl、16μl、20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積(A)的常用對(duì)數(shù)對(duì)進(jìn)樣量(C)的常用對(duì)數(shù)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果表明黃芪甲苷進(jìn)樣量在4.821μg～24.104μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，回歸方程為：A=1.3315C+4.7412，r=0.9992。

2.2.2 精密度試驗(yàn)

取同一份黃芪甲苷對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果RSD為1.17%。

2.2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10h，精密吸取20μl注入液相色譜儀，記錄峰面積，結(jié)果RSD為1.03%，表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品，精密稱取6份，照含量測(cè)定方法依法測(cè)定，結(jié)果平均含量為0.999mg/g，RSD為1.97%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.5 回收率試驗(yàn)

取已知含量的本品，研細(xì)，取約2g，共6份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入黃芪甲苷對(duì)照品適量，以下照含量測(cè)定方法依法測(cè)定，計(jì)算，結(jié)果平均回收率為99.52%，RSD為2.42%，見(jiàn)表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.2.6 樣品含量測(cè)定

取樣品3批，依法測(cè)定含量，結(jié)果3批樣品黃芪甲苷含量分別為9.99mg/袋、10.19mg/袋、10.04mg/袋。

3 討論

3.1 黃芪甲苷為黃芪藥效的主要基礎(chǔ)物質(zhì)，有增強(qiáng)機(jī)體免疫力，提高抗病能力，抗病毒，抗應(yīng)激，促生長(zhǎng)，改善心肺功能等功能，具有增強(qiáng)心臟收縮力，保護(hù)心肌，抗心力衰竭的作用。用HPLC-ELSD法測(cè)其含量，方法成熟，檢測(cè)方便，穩(wěn)定性好。

3.2 流動(dòng)相的選擇試驗(yàn)曾對(duì)甲醇-水、乙腈-水流動(dòng)相系統(tǒng)及不同比例的乙腈-水進(jìn)行了考察，根據(jù)出峰時(shí)間和色譜分離情況，確定以乙腈-水(34∶66)為流動(dòng)相，在此條件下，黃芪甲苷色譜峰出峰時(shí)間合適，分離效果最佳。

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