血管內(nèi)皮生長因子、癌胚抗原及端粒酶聯(lián)合檢測對良惡性胸腔積液的鑒別診斷價值

劉曉華，娜 娜，劉亞麗，趙 霞，伊志剛

血管內(nèi)皮生長因子、癌胚抗原及端粒酶聯(lián)合檢測對良惡性胸腔積液的鑒別診斷價值

劉曉華，娜 娜，劉亞麗，趙 霞，伊志剛

目的探索胸腔積液中血管內(nèi)皮生長因子 (vascular endothelial growth factor，VEGF)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)及端粒酶單項和聯(lián)合檢測在良惡性胸腔積液中的診斷價值。方法選取70例胸腔積液患者，包括惡性胸腔積液34例，良性胸腔積液36例。采用ELISA法檢測VEGF和CEA在兩組病例胸腔積液中的表達，端粒酶的表達采用PCR-ELISA法檢測。結(jié)果VEGF、CEA及端粒酶在惡性胸腔積液患者組中的表達明顯高于良性組(P<0.05)；在單項檢測中，VEGF的敏感性最高73.53%，其陽性預測值最高83.33%；CEA的特異性最高88.88%；聯(lián)合檢測中VEGF+CEA的敏感性最高91.17%，CEA+端粒酶的特異性低于VEGF+CEA和VEGF+端粒酶。結(jié)論VEGF、CEA及端粒酶在良惡性胸腔積液的鑒別診斷中具有較高價值，聯(lián)合檢測可提高診斷的敏感性。

血管內(nèi)皮生長因子; 癌胚抗原; 端粒酶 ;胸腔積液

胸腔積液是多種疾病的一種重要臨床征象，其中惡性胸腔積液發(fā)展快，壓迫肺臟導致通氣障礙，回心血量減少，可危及生命[1]。對其性質(zhì)的準確鑒定對疾病的診斷和治療具有十分重要的價值。目前，對胸腔積液良惡性的判斷有多種方法，但各種方法在敏感度和特異性上都具有一定的局限性，故尋找合適的檢測方法將對確定胸腔積液性質(zhì)具有重要意義。筆者通過對VEGF、CEA及端粒酶的單項和聯(lián)合檢測，探討其在惡性胸腔積液中的診斷價值。

1 對象與方法

1.1 對象 收集我院2008-01至2013-03住院患者共70例作為研究對象，男36例，女34例；年齡26～78歲，平均(60.21±16.40)歲。經(jīng)病史、胸膜活檢、影像學、支氣管鏡及細胞學等檢查，良性胸腔積液36例(良性組)，其中結(jié)核性胸膜炎25例，肝硬化6例，尿毒癥2例，類風濕炎1例，心力衰竭2例；惡性胸腔積液34例(惡性組)，均經(jīng)病理證實為惡性，其中肺癌并胸膜轉(zhuǎn)移27例，胃癌并胸膜轉(zhuǎn)移3例，乳腺癌并胸膜轉(zhuǎn)移3例，惡性淋巴瘤轉(zhuǎn)移1例。

1.2 標本采集 抽取每位入院未經(jīng)治療有胸腔積液患者胸水50 ml，離心后取上清液,-20 ℃保存，以備檢測。

1.3 方法 應(yīng)用ELISA(雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗)方法測定VEGF、CEA的濃度,試劑由Adlitleram Diagnostic Laborato-ries Inc公司提供。以VEGF>300 pg/ml、CEA>5 ng/ml為惡性胸腔積液的陽性診斷閾值。端粒酶活性的測定采用PCR-ELISA法，采用MRX型全自動電腦酶標儀雙波長法測定450 nm吸光度(OD450)、波長690 nm吸光度(OD690)的值，OD 690為參考波長，用于消除孔間誤差。端粒酶活性為OD=OD 450-OD 690。OD大于陰性對照孔的2.0倍即判定為端粒酶陽性。試劑盒及標準品為 Expressbiotech 產(chǎn)品(批號1550201)。具體操作均嚴格按說明書進行。

敏感性(%)=惡性胸腔積液患者的陽性例數(shù)/所有進行測定的惡性胸腔積液患者總數(shù)×100%;

特異性(%)=良性胸腔積液患者的陰性例數(shù)/所有進行測定的良性胸腔積液患者總數(shù)×100%。

陽性預測值(%)=惡性胸腔積液患者的陽性例數(shù)/(惡性胸腔積液患者的陽性例數(shù)+良性胸腔積液患者的陽性例數(shù))×100%。

聯(lián)合檢測中一項指標達到陽性診斷閾值即為陽性。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對相關(guān)資料進行獨立樣本t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 VEGF、CEA及端粒酶檢測結(jié)果 良、惡性胸腔積液患者VEGF、CEA及端粒酶檢測發(fā)現(xiàn)VEGF、CEA及端粒酶三項指標在惡性胸腔積液患者組中比對照組顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(表1，P<0.01)。根據(jù)診斷閾值所確定的陽性和陰性例數(shù)結(jié)果(表2)。

注:與良性組比較，①P<0.01

2.2 效能評價 結(jié)果顯示見單項檢測中VEGF的敏感性最高，CEA的特異性最高。在聯(lián)合檢測中VEGF+CEA的敏感性最高，VEGF+CEA和CEA+端粒酶的特異性要高于VEGF+端粒酶，且聯(lián)合檢測的敏感性要高于單項檢測，其診斷價值更具優(yōu)勢(表3)。

3 討 論

通過對胸腔積液中腫瘤標志物表達的檢測進而對其性質(zhì)進行判斷，是近年來的研究熱點，也是對腫瘤性質(zhì)作出準確診斷的一個探索。本研究對70例患者的胸腔積液(惡性組34例，良性組36例)中的VEGF、CEA及端粒酶進行檢測后發(fā)現(xiàn)，三項腫瘤標志物在惡性胸腔積液組中明顯升高，較良性組有顯著性差異(P<0.01)。結(jié)果提示，VEGF、CEA及端粒酶在胸腔積液性質(zhì)的判定中具有很高的鑒別診斷價值，如果這些指標顯著升高，超過陽性指標的閾值，就要對胸腔積液的性質(zhì)提高警惕。同時，本研究還對三項指標在胸腔積液性質(zhì)判定中的敏感性、特異性及陽性預測值進行分析，發(fā)現(xiàn)單項檢測中以VEGF的敏感性最高，CEA的特異性最高。在聯(lián)合檢測中以VEGF+CEA的敏感性最高，VEGF+CEA和CEA+端粒酶的特異性要高于VEGF+端粒酶，且聯(lián)合檢測的敏感性要高于單項檢測，其診斷價值更具優(yōu)勢。通過這些分析，提示筆者在臨床診斷中，既要減少漏診，以提高診斷的敏感性，又要增強診斷的特異性，減少良性腫瘤的誤診。這就要求要注重多項指標的聯(lián)合檢測，以提高診斷的準確率。

VEGF是Mohammed等[2]于1989年從牛垂體濾泡星狀細胞中培養(yǎng)分離出的一種多肽，是目前已知的最強的血管通透劑，其對血管的通透性是組胺的5000倍。VEGF能夠促使血管內(nèi)皮細胞分裂、增殖、遷移，對腫瘤生長和轉(zhuǎn)移具有促進作用，同時VEGF還可通過釋放細胞因子和生長因子，使內(nèi)皮細胞增殖、遷移，從而對腫瘤血管的增殖產(chǎn)生促進作用。有文獻報道，VEGF在非小細胞肺癌的表達增加[3]。多項研究已發(fā)現(xiàn)，VEGF在惡性腫瘤的胸腔積液中顯著升高，故推測腫瘤細胞的分泌可能是VEGF的來源之一，其表達與惡性腫瘤具有一定的相關(guān)性。王鏡鑾和張正壽[4]在對50例胸腔積液中VEGF的表達研究發(fā)現(xiàn)，其在惡性患者組中顯著升高，敏感性達76%，這與筆者的研究結(jié)果較為相似。同時，該研究還發(fā)現(xiàn)，VEGF的敏感性高于CEA和端粒酶，這進一步驗證VEGF在惡性胸腔積液中的高表達的觀點，為胸腔積液性質(zhì)的判定提供了新的思路。

CEA是較早應(yīng)用于臨床的腫瘤標志物，它是一種外分泌型的糖蛋白，最早發(fā)現(xiàn)于人的結(jié)腸癌組織中。研究證實，CEA主要來源于腫瘤組織[5]，在正常組織和良性病變組織中僅有少量合成和分泌。作為比較成熟的腫瘤標志物，CEA已被用于多種腫瘤的診斷和鑒別診斷中。有研究報道，在各型肺癌中，其對肺腺癌的診斷價值最高。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CEA在惡性胸腔積液中顯著升高，敏感性為70.58%，特異性為88.88%，且CEA的特異性要較VEGF和端粒酶高。這顯示CEA在惡性胸腔積液診斷中價值較高，可以提高診斷的準確率。

端粒酶是一種RNA依賴的DNA聚合酶，其在維持染色體末端穩(wěn)定和遺傳信息的完整性方面具有重要功能。除了生殖細胞和部分造血細胞，端粒酶在正常組織細胞和良性病變中表達程度極低或沒有表達。但研究證實，其在85%～95%的惡性腫瘤組織中表達增加，如肝癌、宮頸癌、白血病等[6～9]，因此，通過檢測端粒酶的活性可以對腫瘤的性質(zhì)做出判斷。故筆者推斷，惡性腫瘤胸膜轉(zhuǎn)移所致胸腔積液的端粒酶表達升高。本研究結(jié)果顯示， 70例胸腔積液中端粒酶的檢測也證實了這一點，惡性組的端粒酶表達明顯升高，較良性組有顯著差異，且敏感性達64.70%，特異性為83.33%。這一結(jié)果與同類研究相近[9]，提示臨床應(yīng)重視端粒酶作為腫瘤標志物的作用。

總之，腫瘤標志物作為腫瘤診斷的新的途徑，應(yīng)把單項檢測和聯(lián)合檢測結(jié)合起來，以判斷腫瘤的性質(zhì)，盡量避免漏診和誤診。本研究所發(fā)現(xiàn)的VEGF具有較高的敏感性和陽性預測值，且聯(lián)合檢測中VEGF+CEA的敏感性較高，可以作為臨床參考。

[1] 楊崢維.胸腔內(nèi)生物化療方法聯(lián)合熱療治療惡性胸腔積液的臨床研究[J]. 武警醫(yī)學院學報, 2010, 19(12): 947-949.

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[6] 劉 陽,胡 梅,吳婭娜,等.肝癌患者血清端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶mRNA表達研究 [J]. 武警醫(yī)學院學報, 2012, 21(3): 161-166.

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[9] 周小林,范 輝. 端粒酶與HER-2蛋白對胸水性質(zhì)判斷的價值[J] .現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2011, 20(30): 37-42.

(2013-11-10收稿 2014-01-11修回)

(責任編輯 郭 青)

DifferentialdiagnosisvalueofcombinedmeasurementofVEGF，CEAandtelomerasebetweenbenignandmalignantpleuraleffusions

LIU Xiaohua，NA Na，LIU Yali，ZHAO Xia，and YI Zhigang. First Department of Medicine, Inner Mongolian Autonomous Regional Corps Hospital, Chinese People’s Armed Police Forces, Huhhot 010040, China

ObjectiveTo study the differential diagnosis value of combined measurement of VEGF，CEA and telomerase between benign and malignant pleural effusions .MethodsSeventy patients with pleural effusions were observed, including 34 cases of malignant pleural effusions and 36 cases of benign effusions. VEGF and CEA levels in pleural effusion were detected by ELISA.Telomerase activity was tested by PCR-ELISA.ResultsThe expresions of VEGF, CEA and telomerase in the group of patients with malignant pleural effusion were significantly higher than those in the benign group (P<0.05). In single-item detection, the sensitivity and positive predictive values of VEGF were highest (73.53%，83.33%). The specificity of CEA was highest(88.88%). In combined examination, the sensitivity of VEGF+CEA was highest, and the specificity level of CEA+telomerase was lower than that of VEGF+CEA and VEGF+telomerase.ConclusionsVEGF, CEA, and telomerase hare high value in the differential diagnosis of benign and malignant pleural effusions. Combined examination can improve the diagnostic sensitivity.

vascular endothelial growth factor; carcinoembryonic antigen; telomerase; pleural effusion

劉曉華，碩士，副主任醫(yī)師，E-mail：liuxiaohua818@sina.cn

010040呼和浩特，武警內(nèi)蒙古總隊醫(yī)院內(nèi)一科

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