富含多糖的強旱生植物半日花基因組DNA提取方法

白沙如拉等

近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，以DNA為主要研究對象的保護遺傳學(xué)在珍惜瀕危植物的保護和利用上得到了廣泛應(yīng)用[1-2]。相關(guān)研究結(jié)果證明，保護遺傳學(xué)在瀕危物種的保護方面起到了十分積極的作用[1-4]。而要開展珍惜瀕危植物的保護遺傳學(xué)研究，獲得高質(zhì)量基因組DNA是關(guān)鍵的第一步。對于植物DNA提取，目前已有很多經(jīng)典和成功方法[5-8]，然而，多數(shù)瀕危植物由于生境特殊（干旱、低溫及鹽堿等），其體內(nèi)常含有較多的多糖和多酚等物質(zhì)，若方法不當(dāng)，會使所提基因組DNA沉淀含有多糖等粘稠膠狀物而難于溶解，嚴(yán)重影響所提取DNA的質(zhì)量，以至于無法進行PCR擴增和酶切等反應(yīng)。雖然已有一些富含多糖多酚類物質(zhì)植物的基因組DNA提取方法的報道[5-11]，但這些方法并不適用于所有極端生境下的植物，照搬這些方法提取的基因組DNA常常無法進行下游試驗。為此，對于一些極端環(huán)境下的珍稀瀕危植物基因組DNA的提取仍需摸索其最佳提取條件。變色硅膠能有效、快速干燥植物葉片，用植物干葉片提取DNA以及用此樣品進行酶切和擴增的成功很有意義，為解決野外采樣以及保存和運輸上的困難提供了很大的方便，使得研究人員可以在居群水平對瀕危植物進行保護遺傳學(xué)研究[1-3]。為了評價超旱生瀕危植物半日花（Helianthemum soongoricum）的遺傳多樣性，筆者嘗試了上述多種去多糖多酚類植物基因組DNA的提取方法，用于提取半日花基因組DNA，但所提取的基因組DNA仍含有多糖等粘稠膠狀物而難于溶解，無法進行酶切和PCR擴增試驗，而商業(yè)化的植物基因組DNA提取試劑盒由于價格較高以及DNA產(chǎn)率低，不適合于大樣本量的群體遺傳分析，為此，本研究基于CTAB法提取植物DNA的原理，以硅膠干燥的葉片為材料，通過改進多糖的分離和去除，摸索出一種更適合半日花DNA提取的方法，為進一步開展半日花的保護遺傳學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 材 料

本方法提供了一個通用、簡單易行，成本低，且安全地去除植物DNA 提取過程中多糖等雜質(zhì)的方法，所提取 DNA無降解并且純度較高，采用該方法所提DNA的純度和濃度可以滿足PCR擴增和限制性內(nèi)切酶消化的要求，這為后續(xù)以分子標(biāo)記和序列分析為基礎(chǔ)的植物群體遺傳學(xué)和保護遺傳學(xué)的研究奠定了重要的基礎(chǔ)。

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