反相高效液相色譜法測(cè)定麻仁丸中苦杏仁苷和芍藥苷的含量

劉立新，柳兵 （吳都醫(yī)藥牛尾巴大藥房，湖北 鄂州436054）

談發(fā)明 （宜昌市中醫(yī)院，湖北 宜昌443003）

麻仁丸由火麻仁、大黃、蘆薈、白芍、枳實(shí)、苦杏仁等中藥組成，具有瀉熱通腸、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)之功效［1］?？嘈尤受帐强嘈尤实闹饕行С煞郑嘈尤受赵诮?jīng)酶作用分解形成氫氰酸的同時(shí)，也產(chǎn)生苯甲醛，后者可抑制胃蛋白酶的活性，從而影響消化功能［2］。芍藥性微寒、味苦酸，有養(yǎng)血柔肝、緩中止痛、斂陰收汗的功能，芍藥苷是芍藥的主要有效成分之一［3］。筆者參照有關(guān)文獻(xiàn)，采用反相高效液相色譜法 （reversed phase high-performance liquid chromatography，RP-HPLC），建立麻仁丸中苦杏仁苷和芍藥苷的含量測(cè)定方法，為麻仁丸的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試劑

Dionex-P680液相色譜儀，UVD170U檢測(cè)器，四元低壓梯度泵，HKZJZ2830171BAF戴安變色龍高效液相數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，美國戴安公司；5200H型超聲波清洗器，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司；SZ-97自動(dòng)三重純水蒸餾器，上海亞榮生化儀器廠；AT-201電子分析天 （d=0.01mg，瑞士）；麻仁丸 （按2010版藥典自制）；苦杏仁苷對(duì)照品，供含量測(cè)定用，中國藥品生物檢定所，批號(hào)：110820-201305；芍藥苷對(duì)照品，供含量測(cè)定用，中國藥品生物檢定所，批號(hào)：736-200320；乙腈為色譜純；水為重蒸餾水 （自制）；甲酸等其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的配制

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器中干燥36h的苦杏仁苷對(duì)照品和芍藥苷對(duì)照品適量，分別精密稱定，加甲醇制成每1ml含苦杏仁苷和芍藥苷各100μg的溶液。

2.1.2 麻仁丸供試品溶液的制備 參照文獻(xiàn) ［4-5］。

2.1.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按麻仁丸處方比例和工藝，制備不含苦杏仁和白芍的陰性樣品。按供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照溶液。

2.2 色譜條件

色譜柱：Aglient TC-C18柱 （4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1% （11：89）；流速：1.0ml／min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長：221nm［6-7］。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10μl進(jìn)樣，按照上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果：理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算不低于7000，按芍藥苷峰計(jì)算不低于10000，苦杏仁苷和芍藥苷峰與其它雜質(zhì)峰分離度均大于1.5，峰形對(duì)稱，陰性無干擾。對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液在此色譜條件下的色譜圖見圖1～3。

圖1 對(duì)照品溶液色譜圖

圖2 供試品溶液色譜圖

圖3 陰性對(duì)照溶液色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察

制備濃度為200μg／ml的苦杏仁苷和200μg／ml的芍藥苷的混合對(duì)照品溶液，精密吸取上述對(duì)照品溶液1、2、4、6、8、10ml分別置于10ml容量瓶中，加入甲醇定容，搖勻。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液10μl，各進(jìn)樣2次，按上述色譜條件測(cè)定。以峰面積平均值為縱坐標(biāo) （Y），以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，苦杏仁苷在0.2～2.0μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=0.1955X+6.7365，r=0.9996；芍藥苷在0.2～2.0μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程Y=0.1256X+7.5868，r=0.9993。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取苦杏仁苷、芍藥苷對(duì)照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果苦杏仁苷的峰面積RSD為0.31%，芍藥苷的峰面積RSD為0.45%。表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，按上述色譜條件，分別于0、2、4、8、12、24h測(cè)定峰面積?？嘈尤受盏姆迕娣eRSD為0.60%，芍藥苷的峰面積RSD為0.98%，試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

按照含量測(cè)定的方法，對(duì)同一樣品測(cè)定5次，結(jié)果苦杏仁苷和芍藥苷含量平均值分別為2.2387mg／g、2.2278mg／g，RSD分別為1.3%、1.1%。

2.8 加樣回收試驗(yàn)

取已知含量的麻仁丸樣品 （苦杏仁苷含量為2.2387mg／g、芍藥苷含量為2.2278mg／g）6份，每份約0.7g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，分別精密加入對(duì)照品溶液15ml，精密加甲醇35ml，按2.1.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備，分別按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果見表1、2，表明本法苦杏仁苷和芍藥苷回收率為分別為99.36%、99.16%，RSD分別為1.3%、2.0%。

表1 苦杏仁苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

表2 芍藥苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.9 含量測(cè)定

按上述含量測(cè)定方法，對(duì)3批麻仁丸的含量進(jìn)行測(cè)定，外標(biāo)法計(jì)算樣品中苦杏仁苷和芍藥苷的含量，結(jié)果見表3。

表3 麻仁丸中苦杏仁苷和芍藥苷的含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

本試驗(yàn)用RP-HPLC法，流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸 （11∶89），可使苦杏仁苷和芍藥苷有良好的分離度。選擇測(cè)定波長時(shí)，苦杏仁苷最大吸收波長208nm，而芍藥苷為230nm，我們選定217、219、211、213nm4個(gè)波長進(jìn)行比較，經(jīng)試驗(yàn)確定221nm時(shí)苦杏仁苷和芍藥苷的檢測(cè)靈敏度比較好。此方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、精密度高，陰性無干擾，可作為麻仁丸中苦杏仁苷和芍藥苷含量測(cè)定的方法。

［1］劉晉華，蔡大偉，屈梅，等 .復(fù)方麻仁丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究 ［J］.中國藥師，2004，7（10）：778-780.

［2］邢國秀，李楠，楊美燕，等 .天然苦杏仁昔的研究進(jìn)展 ［J］.中成藥，2003，25（12）：1007-l009.

［3］胡南，許惠玉，陳志偉，等 .芍藥苷的藥理學(xué)研究進(jìn)展 ［J］.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，28（9）：1093-1095.

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［5］李坤平，李康，孔繁晟，等 .正交設(shè)計(jì)研究白芍總苷的超聲提取工藝 ［J］.食物與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2009，28（4）：201-504.

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［7］左力.HPLC法測(cè)定補(bǔ)脾益腸丸中苦杏仁苷含量 ［J］.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，15（7）：78-79.