HPLC測定不同產(chǎn)地貝母中貝母辛的含量

鄒和平，彭騰，寇俊闖，王小琴，禹亞杰

·品種品質(zhì)·

HPLC測定不同產(chǎn)地貝母中貝母辛的含量

鄒和平1，彭騰2，寇俊闖2，王小琴2，禹亞杰2

目的：對8種不同產(chǎn)地貝母中貝母辛的含量進(jìn)行測定。方法：采用Kromasil C18(4.6 mm×250mm，E76575)色譜柱，流動(dòng)相為乙腈:0.2%二乙胺水溶液=40:60；流速：1.00mL/min；柱溫：27℃；檢測波長：205nm。測定了8種不同產(chǎn)地貝母中貝母辛的含量。結(jié)果：不同產(chǎn)地貝母中貝母辛含量有一定的差異，其中新疆貝母含量最高為0.02734%，伊犁貝母和康定貝母含量次之，其他5種貝母含量較少。結(jié)論：本方法靈敏度高，而且簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于貝母的內(nèi)在質(zhì)量控制。

貝母；貝母辛；高效液相色譜法

貝母為百合科貝母屬（Fritillaria）多種植物的鱗莖，是我國具有悠久使用歷史的傳統(tǒng)中藥，味苦、性寒，有清熱潤肺、化痰止咳、散結(jié)等功能，用于熱咳嗽，咯痰帶血，瘰疬腫毒[1]。在我國貝母的原植物種類繁多，據(jù)《中國植物志》記載，我國產(chǎn)20 種和2變種，全國各省區(qū)多有分布，近年來通過調(diào)查及分類學(xué)研究，我國貝母屬植物己超過50種（變種）。但其治療疾病的用途不一樣，價(jià)值也有高低之分[2]。

近年來我國對各種貝母化學(xué)成分的研究陸續(xù)有報(bào)道，到目前為止己從貝母屬植物中先后分離出97種生物堿，弄清了73 種生物堿的化學(xué)結(jié)構(gòu)，其中異構(gòu)體生物堿就有55 種[3]。同時(shí)現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，貝母生物堿是其止咳、化痰和平喘等作用的有效成分[4]。而貝母辛(Peimisine)，是百合科貝母屬貝母中的有效化學(xué)成分之一，研究表明它可以作用于M受體，松弛平滑肌以達(dá)到平喘的作用[5]；而通過抑制血管緊張素而達(dá)到降壓的作用[6]。此外貝母辛還具有預(yù)防肝纖維化作用[7]。因此，貝母辛的含量測定對于評價(jià)藥材質(zhì)量、保證用藥安全及控制制劑質(zhì)量都有著重要意義。經(jīng)文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)針對貝母辛的研究領(lǐng)域多在結(jié)構(gòu)的確定[8,9]。而對貝母辛的含量測定尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法，針對不同產(chǎn)地的貝母進(jìn)行含量測定。結(jié)果表明，本方法靈敏度高，而且簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。

1 試藥與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)樣品

貝母樣品來源見表1。

表1 8種貝母及其產(chǎn)地

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

貝母辛對照品（購于Sigma公司）；乙腈（色譜純）；氨水、甲醇、乙腈、二乙胺等試劑均為分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

高效液相色譜儀（北京清博華科技有限公司，LC2000型，P1010 10 mL分析輸液泵，UV1000D雙波長紫外可見檢測器）；真空干燥箱（BE-ZK-27L，東莞貝爾試驗(yàn)設(shè)備有限公司）；數(shù)顯恒溫水浴鍋(XMTB-02810207,浙江余姚工業(yè)儀表二廠)；電子分析天平(MINQIAO,FA2004N)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18(4.6 mm×250mm，E76575)；HS2000色譜工作站；流動(dòng)相：乙腈:0.2%二乙胺水溶液=40:60；流速：1.00mL﹒min-1；柱溫：27 ℃；檢測波長：205 nm；按貝母辛峰計(jì)算，理論塔板數(shù)在3000以上。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取貝母辛對照品適量于10 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，得0.25 mg﹒mL-1的貝母素辛對照品溶液，備用(4℃下保存)。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取貝母樣品粉末(過四號篩) 2 g，置燒瓶中，加濃氨試液4 mL浸潤1小時(shí)，精密加入甲醇溶液40 mL，混勻，置85℃水浴中加熱回流2小時(shí)，放冷，濾過，置250 mL燒瓶中用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，殘?jiān)蛹状既芤喝芙?，定容? mL，0.22 μm濾膜濾過，備用。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密量取貝母辛對照品溶液2.0 μl、4 μl、6 μl、8 μl、10 μl、12 μl依次測定，以峰面積積分值自然對數(shù)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量自然對數(shù)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=16779X-6695.8，R2=0.9993。

圖1 貝母辛的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1精密度試驗(yàn) 取貝母辛對照品溶液進(jìn)樣10 μl，按上述條件進(jìn)行測定，重復(fù)6次，貝母辛峰面積積分值計(jì)算RSD=0.74%(n=6)，表明該方法精密度良好。2.5.2 重復(fù)性試驗(yàn) 同批樣品，照供試品制備方法制備5份，各進(jìn)10 μl，進(jìn)樣檢測，結(jié)果RSD=1.8%，表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.5.3穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液于0、2、4、6、8 h測定，結(jié)果表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，RSD為2.3%。

2.5.4加樣回收率試驗(yàn) 取已測得質(zhì)量分?jǐn)?shù)的貝母樣品0.2～0.3g，精密稱定，分別加入一定量的貝母辛對照品溶液，同供試品溶液的制備項(xiàng)下操作，制備供試溶液并測定，計(jì)算回收率，得貝母辛平均回收率為104.04%，RSD為4.04%(n=5)。

2.6 樣品的測定

按供試品溶液項(xiàng)下制備樣品溶液，取10 μl進(jìn)樣，測定貝母辛的含量見表2。

表2 不同品種和不同產(chǎn)地貝母中貝母辛的含量

結(jié)果表明: 不同產(chǎn)地貝母中貝母辛含量有一定的差異，其中新疆貝母含量最高為0.02734%，伊犁貝母和康定貝母含量次之，其他5種貝母含量較少，其中梭砂貝母中貝母辛含量最低。

3 討論

從色譜圖上看，8種不同產(chǎn)地的貝母在此分離條件下，不僅貝母辛能夠很好地被指認(rèn)，色譜圖上的其他成分的色譜峰也很好，因此，這種方法有待于繼續(xù)研究考察，進(jìn)一步來確認(rèn)其他的色譜峰，從而為貝母的成分研究及定量分析方法提供新的依據(jù)。

本實(shí)驗(yàn)對10個(gè)不同產(chǎn)地平貝母樣品進(jìn)行了測定，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地貝母中貝母辛含量存在較大差異，因此應(yīng)當(dāng)注意產(chǎn)地與藥材質(zhì)量的關(guān)系。此外，本實(shí)驗(yàn)的測定結(jié)果為貝母辛的進(jìn)一步提取分離研究也提供了可靠的依據(jù)。

[1] 徐薦琦,徐薦瑋.貝母的研究綜述[J].求醫(yī)問藥,2013,11(2): 319.

[2] 翟榮紅.貝母的品種區(qū)別與性狀鑒別[J].甘肅中醫(yī),2009,22 (6):62.

[3] 韓靜.中藥貝母多樣性研究及質(zhì)量考察[D].甘肅:蘭州大學(xué), 2009.

[4] 張鵬,徐仿周,吳繼洲.貝母及其復(fù)方制劑中生物堿含量測定方法[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2004,23(4):261.

[5] 趙益,朱衛(wèi)豐,劉紅寧,等.貝母辛平喘作用及機(jī)制研究 [J].中草藥,2009,40(4):597.

[6] Ping Li, Jing-Jing An. Puqienine E:An angiotensin converting enzyme inhibitory steroidal alkaloid from Fritillaria puqiensis[J]. Fitoterapia,2010,81:149.

[7] 劉琚,徐選福,郭傳勇,等.貝母辛對肝纖維化大鼠肝組織α—SMA表達(dá)的影響[J].中國中醫(yī)急癥,2013,22(8):1274.

[8] R.Shakirow,R.N.Nuriddinov.Alkaloid of Petilium Edumdi[J]. KSimiya Primdnykh Soedinenii,1965,l(6):384．

[9] 王鋒鵬,張格,唐心曜,等.貝母辛的結(jié)構(gòu)修正[J].藥學(xué)學(xué)報(bào), 1992,27(4):273．

（責(zé)任編輯： 胡慧玲）

Determination of peimisine in Beimu from different growing areas by HPLC

ZOU He-ping1, PENG Teng2, KOU Junchuang2, WANG Xiao-qin2, YU Ya-jie2//(1. Chongqing Taiji Group, Chongqing 401147;2. Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, China)

Objective:To determine the content of peimisine in 8 kinds of Beimu from different growing areas.Method:The separation was performed on a Kromasil C18(4．6 mm×250mm) column，and the mobile phase was consisted of methanol and 0.2% diethylamine solution. The fow rate was 1.00 mL﹒min-1.Temperature was 27 ℃.The UV detection wavelength was 205 nm.Result:Peimisine contents were different in different Beimu. Beimu from Xinjiang had the highest content of peimisine (0.02734%). The content of peimisine in Beimu from Yili and Kangding took the second place. The other 5 kinds of Beimu had less peimisine.Conclusion:The method is simple，accurate and can be used to control the internal quality of Beimu.

Beimu；Peimisine；HPLC

R 284

A

1674-926X(2014)03-002-02

1.太極集團(tuán)有限公司，重慶 401147；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 教育部中藥材標(biāo)準(zhǔn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川 成都 611137

鄒和平，長期從事藥品生產(chǎn)與質(zhì)量管理工作Tel:18602394688 Email:zouheping2008@126.com

彭騰，男，博士，副教授，主要從事中藥活性成分的篩選及物質(zhì)基礎(chǔ)研究Tel:13880376673 Email:pengteng1973@sina.com

2013-11-27