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    高尿酸血癥動物模型與時間的關(guān)系

    2014-03-09 14:26:06陶兆燕程媛唐熠譚億民李涓
    中藥與臨床 2014年1期
    關(guān)鍵詞:高尿酸造模空白對照

    陶兆燕,程媛,唐熠,譚億民,李涓

    ·藥理毒理·

    高尿酸血癥動物模型與時間的關(guān)系

    陶兆燕1,程媛2,唐熠2,譚億民2,李涓2

    目的:通過喂食高蛋白高鈣飼料建立雞高尿酸血癥模型,觀察造模時間對該造模方法所建立的尿酸代謝障礙模型的影響。方法:選取100 d齡羅曼蛋雞,在產(chǎn)蛋日齡前喂以高蛋白、高鈣飼料,并限制進水量,建立雞高尿酸血癥模型;分別于造模第7 d、14 d、21 d檢測血清尿酸值和糞便尿酸值。結(jié)果:造模第7 d、14 d、21 d,與空白組對照組比較,模型組糞便尿酸值均顯著升高;造模第21 d,模型組血清尿酸值與空白組對照組比較具有顯著性差異(P<0.01)。結(jié)論:給雞喂食高蛋白高鈣飼料,在第21 d時血清尿酸值顯著升高,說明造模成功,提示造模時間對該模型具有一定的影響。

    高尿酸血癥模型;雞;造模時間

    高尿酸血癥(hypemricemia)是長期嘌呤代謝紊亂或尿酸排泄減少所引起的一組異質(zhì)性疾病[1]。近年來,由于經(jīng)濟發(fā)展和人們飲食結(jié)構(gòu)改變,高蛋白、高果糖[2,3]和高嘌呤食物攝取增加,高尿酸血癥的患病率正逐年上升,已成為威脅人類健康的重要疾病。為此,建立高尿酸血癥動物模型,為研究該疾病發(fā)病機制和藥理研究,具有非常重要的意義。本文通過喂食高蛋白高鈣飼料建立雞高尿酸血癥模型,并觀察造模時間對該造模方法所建立的尿酸代謝障礙模型的影響,希望能為以后進一步研究高尿酸血癥的發(fā)病機理提供參考。

    1 材料

    1.1 實驗動物

    100日齡“羅曼蛋雞”12只,體重(900±100)g,由成都正大畜禽有限公司提供;常規(guī)飼料由成都市新津希望飼料廠提供;造模飼料由四川省實驗動物專委會養(yǎng)殖場提供,其中造模飼料(底料為常規(guī)飼料,補充魚粉、骨粉)蛋白質(zhì)含量大于20%、含鈣量大于4%。

    1.2 實驗試劑

    尿酸測定試劑盒,四川邁克生物科技股份有限公司生產(chǎn),批號0812061。

    2 方法

    2.1 實驗方法[4~6]

    取100日齡羅曼蛋雞12只,在實驗室適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d后,稱重,并按體重隨機分為兩組,即空白對照組和模型組,每組6只??瞻讓φ战M給予常規(guī)飼料,自由飲水。其余6只每天給予上述高蛋白、高鈣飼料100 g進行造模,并且每只雞每日控制進水量100 mL。于造模第7 d、14 d、21 d抽取雞翅靜脈血(取血方法:將雞翅展開暴露翼根靜脈, 7號針頭以45°角刺破血管, 1.5 mL離心管收集流出的血液,完畢后壓迫止血),取血前動物禁食8 h,2000 rpm離心10 min,分離血清,按試劑盒規(guī)定檢測方法測定血清尿酸值。并于造模第7 d、14 d、21 d按相同的方法取雞糞便1 g,并用3 mL蒸餾水稀釋,3000 rpm離心10 min,取上清液按試劑盒規(guī)定檢測方法測定糞便尿酸值。

    2.2 統(tǒng)計學(xué)方法

    結(jié)果以 ± 表示,SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理,計量資料符合正態(tài)分布,采用t檢驗,不符合者采用非參數(shù)檢驗秩和法分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    3 結(jié)果

    3.1 不同時期雞血清尿酸值

    結(jié)果顯示,造模第7 d、第14 d,與空白對照組比較,模型組血清尿酸值無明顯變化,說明喂食高蛋白、高鈣飼料后,短時間內(nèi)不能使血清中尿酸升高;造模第21 d,空白對照組比較,模型組血清尿酸值顯著升高(P<0.01),說明此時造模成功。結(jié)果見表1、圖1。

    表1 實驗不同時期雞血清尿酸值測量結(jié)果 (,n = 6)

    表1 實驗不同時期雞血清尿酸值測量結(jié)果 (,n = 6)

    注:與空白對照組比較,** P<0.01

    組別

    圖1 實驗不同時期雞血清尿酸值

    3.2 不同時期雞糞便尿酸值

    結(jié)果顯示,造模第7 d、14 d、21 d,與空白對照組比較,模型組糞便尿酸值均顯著升高(P<0.01),說明喂食高蛋白、高鈣飼料后,任何時間段糞便中的尿酸值都會升高。結(jié)果見表2、圖2。

    表2 實驗不同時期雞糞便尿酸測量值(,n = 6)

    表2 實驗不同時期雞糞便尿酸測量值(,n = 6)

    注:與空白對照組比較,** P<0.01

    糞便尿酸值(μ mol.L-1)造模7 d 造模14 d 造模21 d空白對照組 853.50±135.89 880.21±199.52 928.33±673.07模型組 1746.17±214.64** 1978.93±344.51** 2130.07±459.35**組別

    圖2 實驗不同時期雞糞便尿酸值

    4 討論

    高尿酸血癥是長期嘌呤代謝障礙或(和)尿酸排泄減少所引起的一組異質(zhì)性疾病,其發(fā)病原因主要是尿酸生成增多或排泄減少,導(dǎo)致尿酸在體內(nèi)蓄積而使血中尿酸濃度升高。高尿酸血癥診斷標準為男性血尿酸≥416 μmol.L-1(7.0mg/dL),女性≥ 357 μmol.L-1(6.0mg/dL)[7]?,F(xiàn)代研究已經(jīng)明確高尿酸血癥的發(fā)病與體內(nèi)血尿酸水平的升高直接相關(guān)。尿酸是嘌呤代謝的產(chǎn)物,主要由細胞核酸代謝分解和其它嘌呤類化合物以及食物中的嘌呤核甘酸經(jīng)酶的分解作用而來。并且大量研究表明血尿酸水平升高與肥胖、脂質(zhì)代謝紊亂、糖尿病、動脈粥樣硬化心血管疾病[8]等密切相關(guān),已成為威脅人類健康的重要疾病。

    動物模型作為研究疾病發(fā)病機制和藥理藥效的一種方法在科學(xué)發(fā)展中有著重要的作用。從現(xiàn)有對高尿酸血癥動物模型的研究來看,目前還沒有公認的高尿酸血癥動物模型。但已有研究證實,禽類與人的嘌呤核苷酸代謝途徑相似,缺乏尿酸酶,都是以尿酸為終產(chǎn)物排出體外。從尿酸生成及代謝途徑入手,使血清尿酸水平升高可增加它們的嘌呤吸收與生物合成以及減少尿酸降解和排泄,從而引發(fā)雞高尿酸血癥,其病理過程與人相似[9]。選用禽類作為高尿酸血癥模型動物還能較確切的反映體內(nèi)嘌呤核苷酸的代謝水平,且具有高尿酸血癥水平持續(xù)穩(wěn)定的優(yōu)點[10]。

    從文中表1和圖1實驗不同時期雞血清尿酸值結(jié)果可以看出,造模第7 d和第14 d,與空白對照組比較,模型組血清尿酸值無明顯變化,而造模第21 d,模型組血清尿酸值顯著升高,由此推測采用喂食高蛋白高鈣飼料建立高尿酸血癥模型的方法受時間影響較大。但該實驗結(jié)果與一些文獻報道的造模7 d即可造成高尿酸血癥模型[5]不符,發(fā)生此現(xiàn)象的原因可能是造模飼料成份、喂養(yǎng)方法及其它一些客觀因素所致,具體原因還有待進一步研究。從表2、圖2實驗不同時期雞糞便尿酸值可以看出,與空白對照組比較,各個時間段的雞糞便尿酸值均顯著升高,說明雞食用高鈣高蛋白飼料后由于其體內(nèi)自身的調(diào)節(jié)代謝作用將大部分尿酸排出了體外。從上述結(jié)果及設(shè)想可以得出,通過喂食高蛋白高鈣飼料建立的雞高尿酸血癥模型與造模時間有著密切的聯(lián)系,即造模時間對能否造成高尿酸血癥模型影響較大。同時,該造模方法對雞糞便尿酸值也具有一定影響。此外,通過本實驗的研究也在理論上和數(shù)據(jù)上為高尿酸血癥的進一步研究提供了實驗參考。

    [1] 張超,曹克光,楊崇青.高尿酸血癥及尿酸性腎病動物模型的建立及應(yīng)用[J].實驗動物科學(xué)與管理,1999,16(4):18.

    [2] Takahiko Nakagawa,Richard J.Johnson,Jaime Herrera-Acosta and Edilia Tapia. Fructose-inducedmetabolic syndrome is associated with glomerular hypertension and renalmicrovascular damage in rats[J].Am J PhysiolRenalPhysio,2007, 292:423.

    [3] Takahiko Nakagawa, HanboHu, Sergey Zharikov. A causal role foruric acid infructose-induced metabolic syndrome[J]. Am J Physiol RenalPhysio,2006,290:625.

    [4] 黃國鈞,黃勤挽.醫(yī)藥實驗動物模型制作與應(yīng)用[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2007:512.

    [5] 周敏,雒曉鳴,張巍,等.痹清膠囊對雞高尿酸血癥模型尿酸代謝的影響[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2006,12(12):35.

    [6] 黃麗霞,張慧,黃承初,等.通痹祛風(fēng)湯對雞痛風(fēng)病模型血尿酸代謝的影響[J]. 藥物與臨床,2008,(27):59.

    [7] Feig DI,Kang DH,Johnson RJ.Uric acid and cardiovascular risk [J].N Engl J Med,2008,359(17):1811.

    [8] Krishnan E,Pandya EJ,Chung I,et a1.Hyperuricemia and the risk for subclinical coronary atherosclerosis- data from a prospec—tive observational cohort study [J].Arthritis Res Ther, 2011,13 (2):R66.

    [9] 董純武,顧耀志,吳祖立.雞痛風(fēng)病研究報告[J].中國獸醫(yī)雜志, 1989,15 (2):24.

    [10] 王勇,陳超.高尿酸血癥動物模型研究進展[J].中華實用中西醫(yī)雜志,2003,3(16):1978.

    (責任編輯:陳思敏)

    The relationships between animal model of hyperuricemia and time

    TAO Zhao-yan1, CHENG Yuan2, TANG Yi2, TAN Yimin2, LI Juan2//(1. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075, China;2.Teaching Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610072, China)

    Objective:The chicken model of hyperuricemia was established by feeding high protein and high-calcium diet, and the effect of molding time on the establishment of uric acid metabolism disorder model was investigatedMethod:Roman laying hens of 100 days was selected, and fed high protein and high-calcium diet with limited the amount of water before the egg laying to establish the chicken model of hyperuricemia. At the molding time of 7d, 14d and 21d, the serum uric acid and fecal uric acid values were detected respectively.Result:At the molding time of 7d, 14d and 21d, compared with blank control group, the model group’s fecal uric acid values were all increased. At the molding time of 21d, the model group serum uric acid levels of had signifcant difference when compared with the blank control group.Conclusion:After the animal is fed with high protein highcalcium diet for 21 days, the serum uric acid values are signifcantly increased which indicate that the molding is succeed, and suggest that the molding time has a certain impact on the model.

    Hyperuricemia model; Roman laying hens; molding time

    R 285.5

    A

    1674-926X(2014)01-009-03

    四川省科技廳科技基金(No.2009SZ0233)

    1.成都中醫(yī)藥大學(xué),四川 成都 610075;2. 成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院,四川 成都 610072

    陶兆燕(1987-),女,四川瀘州人,在讀碩士研究生,主要從事中藥藥效與毒理研究Tel:13551079749 Email:taozhaoyan@126.com

    李涓(1963-),女,重慶人,教授,主要從事藥理學(xué)、中藥藥理學(xué)研究以及新藥的開發(fā)研究Tel:13668162880 Email:Li062@126.com

    2013-06-13

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