HPLC法測定葛根湯顆粒中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量

李具偉，臧恒昌，王彥厚

（1.山東大學(xué)藥學(xué)院，山東濟(jì)南250012；2.瑞陽制藥有限公司，山東淄博256100；3.淄博市食品藥品檢驗(yàn)所，山東淄博255086）

HPLC法測定葛根湯顆粒中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量

李具偉1，2，臧恒昌1，王彥厚3

（1.山東大學(xué)藥學(xué)院，山東濟(jì)南250012；2.瑞陽制藥有限公司，山東淄博256100；3.淄博市食品藥品檢驗(yàn)所，山東淄博255086）

目的建立一種葛根湯顆粒中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量的測定方法。方法采用高效液相色譜法，以極性乙醚連接苯基鍵合硅膠為填充劑，以甲醇－0.092%磷酸溶液（含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺）（1.5∶98.5）為流動(dòng)相，檢測波長為210 nm。結(jié)果在該色譜條件下，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的線性范圍分別為：4.08～81.6μg·mL－1（r＝0.999 9）與4.1～82μg·mL－1（r＝0.999 9），平均回收率分別為98.8%、98.5%。結(jié)論該方法簡單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作為葛根湯顆粒中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法。

葛根湯顆粒；高效液相色譜法；鹽酸麻黃堿；鹽酸偽麻黃堿

葛根湯為傳統(tǒng)的中藥方劑，由葛根、麻黃、白芍、桂枝、甘草、生姜、大棗六味中藥組成，具有發(fā)汗解表生津舒經(jīng)的功效。葛根湯顆粒為采用葛根湯的傳統(tǒng)配方制備而成的顆粒劑，用于發(fā)熱惡寒，鼻塞流涕，咳嗽咽癢，咳痰稀白，汗出，頭痛身疼，項(xiàng)背強(qiáng)急不舒，苔薄白或薄白潤，脈浮或浮緊?，F(xiàn)代研究一般側(cè)重于葛根湯中葛根素的含量測定［1～3］，對于麻黃的質(zhì)量控制研究報(bào)道較少。張?jiān)氯A等［4］采用氣－液色譜法測定葛根湯中麻黃堿的含量，但對于鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿這兩種麻黃中的主要成分分別進(jìn)行質(zhì)量控制的研究未見相關(guān)報(bào)道。為了更好地控制葛根湯顆粒的質(zhì)量，加強(qiáng)對易制毒藥品的管理，本文建立了一種測定葛根湯顆粒中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量的方法，該方法簡便、重現(xiàn)性好，可用于葛根湯顆粒的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀（島津，Shimadzu LC－20ATVP），檢測器（Shimadzu SPD－20AVP），精密電子天平（XS105DU）。

1.2 試藥 鹽酸麻黃堿對照品（批號(hào)：171241－200506，含量：100%，中國藥品生物制品檢定所）。鹽酸偽麻黃堿對照品（批號(hào)：171237－200505，含量：100%，中國藥品生物制品檢定所）。甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

1.3 供試品 葛根湯顆粒（瑞陽制藥有限公司，批號(hào)：12052811、12041811、12020811、12042011、12011611、12041311、12041511、12052711、12033011、12052711）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：以極性乙醚連接苯基鍵合硅膠為填充劑（4.6 mm×250 mm，5μm，月旭材料科技有限公司）；流動(dòng)相：以甲醇－0.092%磷酸溶液（含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺）（1.5∶98.5）為流動(dòng)相；檢測波長：210 nm；流速：1.0 mL·min－1，進(jìn)樣量：10μL。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸麻黃堿對照品、鹽酸偽麻黃堿對照品適量，加甲醇分別制成每1 mL各含40μg的混合溶液，即可。色譜圖見圖1。

2.3 供試品溶液的制備 將本品研細(xì)，取細(xì)粉約

0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入1.44%磷酸溶液50 mL，稱定重量，超聲處理（功率600 W，頻率50 kHz）20 min，放冷，再稱定重量，用1.44%磷酸溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。色譜圖見圖2。

圖1 對照品色譜圖

2.4 線性關(guān)系的考察 分別精密稱取鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿對照品0.020 4 g和0.020 5 g，置50 mL容量瓶中，用1.44%磷酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，置10 mL容量瓶中，加1.44%磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻，作為測試溶液。分別精密量取各溶液10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積對相應(yīng)濃度進(jìn)行線性回歸處理，得回歸方程為：Y鹽酸麻黃堿＝24 913X＋2 264.3（r＝0.999 9），Y鹽酸偽麻黃堿＝25 168X＋11 496（r＝0.999 9），結(jié)果表明溶液濃度分別在4.08～81.6μg·mL－1與4.1～82μg·mL－1（r＝0.999 9）之間，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的峰面積與相應(yīng)濃度呈良好的線性關(guān)系。

圖2 供試品色譜圖

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品（批號(hào)：12052811），按2.3項(xiàng)下的方法制備6份平行樣品，分別測定，鹽酸麻黃堿的平均含量為0.383 5%，RSD為0.10%，鹽酸偽麻黃堿的平均含量為0.052 4%，RSD為0.15%。結(jié)果表明本方法的重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的供試品溶液，分別于0、1、2、4、6 h測定，結(jié)果鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量的RSD分別為0.30%和0.45%，n＝6，表明供試品溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品（批號(hào)：12052811，鹽酸麻黃堿含量0.383 5%，鹽酸偽麻黃堿含量0.052 4%）9份，每份約0.5 g，分成3組，每組3份，精密稱定后，第1組每份加入樣品含量80%的鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對照品，第2組每份加入樣品含量100%的鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對照品，第3組每份加入樣品含量120%的鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對照品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，搖勻，測定。鹽酸麻黃堿的平均回收率為98.8%，RSD為0.90%，鹽酸偽麻黃堿的平均回收率為98.5%，RSD為0.80%，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)

2.8 樣品測定與結(jié)果 分別按照“2.2”，“2.3”項(xiàng)下操作制備供試品溶液與對照品溶液，分別精密量取10μL注入液相色譜儀，測定峰面積，結(jié)果見表2。

表2 葛根湯顆粒樣品中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿在210 nm處有最大吸收，根據(jù)參考文獻(xiàn)［4～7］確定檢測波長為210 nm，在此波長下的基線平穩(wěn)，檢測靈敏度高。

3.2 流動(dòng)相的選擇 曾試用甲醇－0.092%磷酸溶液，乙腈－0.092%磷酸溶液，主峰拖尾比較嚴(yán)重，根據(jù)參考文獻(xiàn)［5］加入三乙胺和二正丁胺有效地改善了主峰的拖尾現(xiàn)象，在該流動(dòng)相條件下，主峰的拖尾因子小于1.5，樣品中的其他物質(zhì)色譜峰與主成分色譜峰分離度良好，保留時(shí)間比較合適，理論塔板數(shù)較高。

3.3 色譜柱的選擇 分別選用C18色譜柱（4.6 mm ×250 mm，5μm，月旭材料科技有限公司），C8色譜柱（4.6 mm×250 mm，5μm，SMA公司），極性乙醚連接苯基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱（4.6 mm× 250 mm，5μm，月旭材料科技有限公司），其中C18色譜柱和C8色譜柱主峰與其他雜質(zhì)峰的分離度小于1.5，最終確定選用極性乙醚連接苯基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱。

3.4 本方法操作簡單、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可作為葛根湯顆粒中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法。

［1］葛爾寧.RP－HPLC法測定葛根湯中葛根素的含量及變化［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2005，11（4）：12－13.

［2］吳永芹，馮凱，周慧，等.HPLC法同時(shí)測定葛根芩連片中葛根素和黃芩苷的含量［J］.中國藥事，2012，26（3）：282－284.

［3］譚姣章.HPLC法對黃芪葛根湯中的異黃酮類有效成分含量測定［J］.醫(yī)學(xué)信息，2011，24（6）：1547－1549.

［4］張?jiān)氯A，黎若熹，賀良華.氣－液色譜法測定葛根湯中的麻黃堿含量［J］.中成藥研究，1985，3：29－30.

［5］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2010版（一部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1.

［6］馬毅，晉玲，王振恒，等.HPLC測定不同產(chǎn)地麻黃中麻黃堿和偽麻黃堿的含量［J］.西部中醫(yī)藥，2012，25（7）：14－16.

［7］李宏，于自勛，岳昌林.復(fù)方勒馬回顆粒中麻黃堿含量測定［J］.藥物分析雜志，2006，26（9）：1340－1342.

表3 3批供試品有關(guān)物質(zhì)檢測結(jié)果

由上表可以看出，UPLC與HPLC檢測結(jié)果基本一致，具備同樣的檢測能力。

5 討論

中國藥典收錄的氨芐西林有關(guān)物質(zhì)檢測方法為梯度洗脫方法，梯度洗脫時(shí)間在60 min以上，耗時(shí)較長，而使用UPLC法檢測有關(guān)物質(zhì)，14.6 min一針梯度洗脫，檢測時(shí)間至少縮短了75%，節(jié)省了試劑的使用，大大提高了工作效率。同時(shí)該方法與藥典收錄的HPLC檢測方法有等效的檢測能力，適用于氨芐西林有關(guān)物質(zhì)的分析檢測。

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Determ ination of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in Gegentang Granules by HPLC

LIJu-wei1，2，ZANG Heng-chang1，WANG Yan-hou3
（1.School of Pharmaceutical Sciences，Shandong University，Jinan 250012，China；2.Reyoung Pharmaceutical Co.，Ltd.，Zibo 256100，China；3.Zibo Institute for Food and Drug Control，Zibo 255086，China）

ObjectiveTo establish a method for the content determination of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in Gegentang Granules.MethodsThe HPLC analysis was carried out on polar ether connected phenyl bonded silica gel analytical column withmethanol－0.092%phosphoric acid（containing 0.04%triethylamine and 0.02%di－n－butylamine）（1.5∶98.5）asmobile phase.The detection wavelength was at210 nm.ResultsThe liner ranges of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloridewere4.08～81.6μg·mL－1and 4.1～82μg·mL－1.The average recoveries of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride were respectively 98.8%and 98.5%.ConclusionThemethod was simple，accurate and reproducible，and it can be used for the determination of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in Gegentang Granules.

Gegentang Granules；HPLC；Ephedrine hydrochloride；Pseudoephedrine hydrochloride

R927.2

：A

2095－5375（2014）03－0150－003

李具偉，研究方向：藥品質(zhì)量分析，E－mail：lijuwei＠reyoung.cn

王彥厚，碩士生導(dǎo)師，主任藥師，研究方向：藥物分析與質(zhì)量控制，Tel：0533－3591186，E－mail：wyhzb＠163.com