HPLC法同時(shí)測(cè)定疏血通脈膠囊中3種皂苷的含量

蘭保強(qiáng)，劉 泰，伍小燕，但旭輝，曹 斌，吳玉強(qiáng)，張青萍，何乾超

（1.廣西中醫(yī)藥研究院，廣西南寧530022；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣西南寧530023；3.廣西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠，廣西南寧530023）

HPLC法同時(shí)測(cè)定疏血通脈膠囊中3種皂苷的含量

蘭保強(qiáng)1，劉 泰2，伍小燕2，但旭輝3，曹 斌1，吳玉強(qiáng)2，張青萍2，何乾超2

（1.廣西中醫(yī)藥研究院，廣西南寧530022；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣西南寧530023；3.廣西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠，廣西南寧530023）

目的建立測(cè)定疏血通脈膠囊中三七有效成分含量的方法。方法采用高效液相色譜法，以Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5μm）為色譜柱，以乙腈－水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速1.0 mL·min－1，檢測(cè)波長203 nm。結(jié)果人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1進(jìn)樣量分別在1.02～10.20μg、0.95～9.50μg和0.35～3.50μg范圍內(nèi)與各自峰面積積分值呈良好線性關(guān)系（r＝0.999 9），平均回收率分別為100.40%、98.90%和99.61%，RSD分別為1.71%、1.98%和1.69%（n＝6）。結(jié)論所采用的方法操作簡單，可靠，準(zhǔn)確，可作為疏血通脈膠囊的質(zhì)量控制方法。

疏血通脈膠囊；高效液相色譜法；人參皂苷Rg1；人參皂苷Rb1；三七皂苷R1

疏血通脈膠囊是廣西名中醫(yī)劉泰主任醫(yī)師根據(jù)前人的經(jīng)驗(yàn)，立足中醫(yī)中風(fēng)痰淤致病理論而擬定的缺血性腦中風(fēng)的藥物驗(yàn)方。由三七、薤白、地龍等藥味組成，多年來臨床觀察表明其對(duì)老年腦梗死的神經(jīng)功能缺損評(píng)分、中醫(yī)證候療效等方面均有改善，對(duì)缺血性中風(fēng)急性期有很好的療效，且不良反應(yīng)?。?～3］。三七為方中名貴藥材，三七總皂苷是其主要有效成分之一，可明顯降低血清膽固醇和甘油三酯的含量，顯著提高血清高密度脂蛋白膽固醇與膽固醇的比值［4］是反映本制劑功能主治的重要組分，因此選擇三七主要皂苷活性成分作為本制劑的主要質(zhì)量控制指標(biāo)，本研究采用反向HPLC法，同時(shí)測(cè)定疏血通脈膠囊中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R13種主要活性成分的含量，為本制劑的質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC－20A高效液相色譜儀，SPD－20A紫外檢測(cè)器（日本島津公司）；威瑪龍色譜工作站。

1.2 試藥 人參皂苷Rg1對(duì)照品（批號(hào)：110703－201027）、人參皂苷Rb1對(duì)照品（批號(hào)：110704－201122）、三七皂苷R1對(duì)照品（批號(hào)：110745－200617）均由中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測(cè)定用。乙腈、甲醇為色譜純，水為重蒸水。疏血通脈膠囊及缺三七的陰性對(duì)照樣品由廣西中醫(yī)藥研究院提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 混合對(duì)照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Rb1對(duì)照品及三七皂苷R1對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含人參皂苷Rg10.390 mg、人參皂苷Rb10.394 mg、三七皂苷R10.097 mg的混合溶液，即得。

2.2 供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物，研細(xì)，取1.0 g，精密稱定，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40 kHz）60 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 陰性樣品溶液的制備 按疏血通脈膠囊制備方法制取缺三七的陰性樣品，按“2.2”項(xiàng)下方法制得陰性樣品溶液。

2.4 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，按表1中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長為203 nm。理論板數(shù)按三七皂苷R1峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000。

表1 流動(dòng)相梯度表

2.5 色譜行為 分別取混合對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各10μL注入高效色譜儀中，測(cè)定，結(jié)果3種皂苷分離度均大于1.5，陰性樣品在人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1及三七皂苷R1出峰位置均無吸收峰，表明處方中其他成分對(duì)測(cè)定無干擾。色譜圖見圖1。

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 線性關(guān)系考察 分別精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Rb1對(duì)照品及三七皂苷R1對(duì)照品適量，加甲醇溶解，分別稀釋成系列濃度，并按“2.4”項(xiàng)下的色譜條件分別進(jìn)樣10μL，記錄峰面積，以進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)，以峰面積值（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果各組對(duì)照品峰面積和濃度呈良好的線性關(guān)系，結(jié)果見表2。

圖1 樣品溶液的色譜圖

表2 3種皂苷對(duì)照品的回歸方程

2.6.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.1”項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)測(cè)定6次，6次測(cè)定所得人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1及三七皂苷R1峰面積的RSD分別為0.64%、1.01%和0.79%（n＝6）。

2.6.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 對(duì)同一供試品溶液，在24 h內(nèi)隔一定時(shí)間測(cè)定一次，共測(cè)定8次，結(jié)果8次測(cè)定供試品溶液中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1及三七皂苷R1峰面積的RSD分別為0.68%、0.66%、0.71%（n＝8），試驗(yàn)表明，在24 h內(nèi)，供試品溶液穩(wěn)定。

2.6.4 重復(fù)性試驗(yàn) 對(duì)同一批樣品，按“2.2”項(xiàng)下方法提取供試品溶液，平行提取6份，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果供試品溶液中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1及三七皂苷R1的平均含量分別為15.88、16.30和4.82 mg·g－1，峰面積的RSD分別為1.61%、0.50%、1.88%（n＝6）。

2.6.5 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品約0.5 g，共6份，精密稱定，分別精密加入含人參皂苷Rg10.219 mg·mL－1、人參皂苷Rb10.188 mg·mL－1和三七皂苷R10.059 mg·mL－13種對(duì)照的混合甲醇溶液50 mL，按“2.2”項(xiàng)下方法處理得供試品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果疏血通脈膠囊中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1及三七皂苷R1的平均回收率分別為100.40%（RSD＝1.71%）、98.90%（RSD＝1.98%）和99.61%（RSD＝1.69%）（n＝6）。

2.7 樣品測(cè)定 按上文擬訂的含量測(cè)定方法，測(cè)定了本品3批樣品的含量，結(jié)果見表3。

Sim ultaneous determ ination of three saponins in Shuxue Tongm ai Capsules by HPLC

LAN Bao-qiang1，LIU Tai2，WU Xiao-yan2，DAN Xun-hui3，CAO Bin1，WU Yu-qiang2，ZHANG Qing-ping2，HE Qian-chao2
（1.Guangxi Academy of Traditional Medical and Pharmaceutical Sciences，Nanning 530022，China；2.Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530023，China；3.Guangxi University of Chinese Medicine Pharmaceutical Factory，Nanning 530023，China）

ObjectiveTo developed amethod for the simultaneous determination of active ingredients in Shuxue Tongmai Capsules.MethodsHPLC was used with Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5μm）Chromatographic column.Mobile phase consisted of acetonitrile－water with gradient elution at a flow rate of1.0 mL·min－1.The detection wavelength was 203 nm.ResultsThe linear range was 1.02～10.20μg for Ginsenoside Rg1，0.95～9.50μg for Ginsenoside Rb1and 0.35～3.50μg for Notoginsenoside R1（r＝0.999 9），the average recovery were 100.40%，98.90%and 99.61%，respectively，with the corresponding RSD of 1.71%，1.98%and 1.69%，respectively.ConclusionThemethod was simple and rapid.Itwas suitable for quality control of Shuxue Tongmai Capsules.

Shuxue Tongmai Capsules；HPLC；Ginsnoside Rg1；Ginsnoside Rb1；Notoginsenoside R1

R927.2

：A

2095－5375（2014）03－0137－003

廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（桂科攻No.11107009－1－11）、廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目（No.2011GXNSFA018180）

蘭保強(qiáng)，男，助理研究員，研究方向：中藥藥物及其制劑，E－mail：lanbaoqiang2008＠126.com

劉泰，男，主任醫(yī)師，研究方向：腦血管疾病的中西醫(yī)結(jié)合臨床研究，Tel：0771－5869102，E－mail：liutai590216＠163.com