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    酶-超聲波聯(lián)用提取紫薯色素的工藝研究

    2014-03-01 09:56:31孟雅紅付彥青孫麗平彭林才昆明理工大學(xué)云南省食品安全研究院云南昆明650500昆明理工大學(xué)化學(xué)工程學(xué)院云南昆明650500
    食品工業(yè)科技 2014年14期
    關(guān)鍵詞:紫薯酶法提取液

    李 輝,孟雅紅,付彥青,孫麗平,彭林才(1.昆明理工大學(xué)云南省食品安全研究院,云南昆明650500;.昆明理工大學(xué)化學(xué)工程學(xué)院,云南昆明650500)

    酶-超聲波聯(lián)用提取紫薯色素的工藝研究

    李 輝1,2,孟雅紅1,2,付彥青1,2,孫麗平1,2,彭林才2
    (1.昆明理工大學(xué)云南省食品安全研究院,云南昆明650500;2.昆明理工大學(xué)化學(xué)工程學(xué)院,云南昆明650500)

    研究了酶-超聲波聯(lián)用提取紫薯色素的工藝條件,通過單因素和L9(34)正交實(shí)驗(yàn)確定了其最佳提取工藝條件為:纖維素酶用量20IU/g,酶解時(shí)間45min,酶解溫度50℃,酶解pH5.6,料液比1∶10(g/mL),超聲時(shí)間20min,超聲溫度60℃。在最佳提取工藝條件下,最佳提取次數(shù)為三次時(shí),紫薯色素的提取率可達(dá)98.7%。同時(shí)對(duì)比了酶法、超聲法、酶-超聲聯(lián)用法三種提取方法,結(jié)果表明酶-超聲波聯(lián)用法的紫薯色素提取率較酶法、超聲法分別提高了39.3%和20.3%。研究表明酶-超聲波聯(lián)用法能更好地提取紫薯色素,為紫薯色素的提取提供了一種新工藝。

    紫薯,紫薯色素,纖維素酶,超聲波

    隨著人們生活水平的提高和保健意識(shí)的增強(qiáng),對(duì)食用色素的選取有了新的趨向[1]。天然色素以其安全、綠色、無毒性,同時(shí)兼具營養(yǎng)和藥理等保健功能等優(yōu)點(diǎn)而日益受到人們的重視[2-3]。因此,尋求和開發(fā)天然色素對(duì)于保障人類健康,促進(jìn)食品工業(yè)的發(fā)展具有十分重要的意義。紫薯(purple sweet potato),又名黑薯,薯肉呈紫色至深紫色,它除了具有普通紅薯的營養(yǎng)成分外,還富含硒元素和花青素[4]。紫薯色素是從紫薯中提取的具有良好生物活性的水溶性紅色素,屬于天然花青素類色素,存在于紫薯的塊根、莖、葉和薯皮中[5-6]。在自然狀態(tài)下,花青素在植物體內(nèi)常與各種單糖結(jié)合形成糖苷,稱為花色苷(anthocyanin)。紫薯色素不僅具有給食品著色的作用,而且還具有抗氧化、抗突變、減輕肝機(jī)能障礙與心血管疾病等作用[7],是一類極具前途的功能型食品添加劑和保健食品基料。目前,對(duì)紫薯色素的提取方法有溶劑法[8]、微波提取法[9-10]、超聲提取法[11]、酶-微波提取法[12]等,而采用酶-超聲波聯(lián)用技術(shù)提取紫薯色素的研究鮮有報(bào)道。由于紫薯中含有大量的纖維素[13],采用纖維素酶可以較溫和地將紫薯中的纖維素水解,有效地破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞膜,加速色素成分的釋放,從而提高提取率[14]。超聲波法利用超聲波的空化效應(yīng)、高速?zèng)_擊破碎等作用,破壞提取物細(xì)胞結(jié)構(gòu),使提取液更易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,加速有效成分的溶出[15]。本實(shí)驗(yàn)采用酶-超聲波聯(lián)用技術(shù)提取紫薯色素,并對(duì)其提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化,同時(shí)對(duì)超聲波、酶法及酶-超聲波聯(lián)用三種提取方法進(jìn)行比較,旨在為紫薯色素的提取提供一種新工藝及理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器

    紫薯 昆明呈貢;纖維素酶 酶活力33IU/mL,江蘇淮安百麥綠色生物能源有限公司;檸檬酸、檸檬酸鈉 國產(chǎn)分析純,天津風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司。

    UV-1800型紫外-可見分光光度計(jì) 上海美譜達(dá)儀器有限公司;TC-200B型變頻恒溫?fù)u床 上海天呈科技有限公司;SCQ型數(shù)控加熱超聲波清洗器 上海聲彥超聲波儀器有限公司;TGL-16G型臺(tái)式離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠;FE20型pH計(jì) 上海梅特勒-托利多儀器有限公司。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 紫薯色素的提取工藝流程 新鮮紫薯洗凈去皮切片,60℃烘干,粉碎過60目篩,得到紫薯粉末,置于密閉容器中備用。準(zhǔn)確稱取1.0g紫薯粉置于100mL具塞三角瓶中,加入一定量的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液,加適量的纖維素酶,置于恒溫?fù)u床中(100r/min)在一定溫度下提取一定時(shí)間;將三角瓶及內(nèi)容物冷卻至室溫,放入超聲波清洗機(jī)中(超聲頻率40kHz,超聲功率為150W),在一定超聲溫度條件下處理一定時(shí)間;最后,3000r/min離心15min,得到提取液。

    1.2.2 紫薯色素最大吸收峰測(cè)定 準(zhǔn)確稱取1.0g紫薯粉,加入20mL檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液,在50℃水浴鍋中浸提1h,3000r/min離心15min后,取上清液,在200~800nm范圍內(nèi)掃描,測(cè)定吸光度值,篩選最大吸收峰波長。

    1.2.3 單因素實(shí)驗(yàn) 在其他相同的提取條件下(酶解時(shí)間45min,酶解溫度50℃,超聲溫度50℃),以紫薯色素在最大吸收峰處的吸光度值為評(píng)價(jià)指標(biāo),間接反映紫薯色素的提取率。分別考察纖維素酶用量(5、10、15、20、25IU/g)、酶解時(shí)間(15、30、45、60、75min)、酶解溫度(20、30、40、50、60℃)、酶解pH(3.2、4.0、4.8、5.6、6.6)、料液比(紫薯粉:提取液)(1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30g/mL)、超聲溫度(30、40、50、60、70℃)、超聲時(shí)間(10、20、30、40、50min)7個(gè)單因素對(duì)紫薯色素提取率的影響。

    1.2.4 正交實(shí)驗(yàn) 在單因素實(shí)驗(yàn)中選取對(duì)紫薯色素提取影響較大的四個(gè)因素,按正交表設(shè)計(jì)四因素三水平L9(34)的正交實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步優(yōu)化最佳提取工藝,并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。正交實(shí)驗(yàn)因素水平表見表1。

    表1 正交實(shí)驗(yàn)因素水平表Table 1 The level of orthogonal experimental factors

    1.2.5 提取級(jí)數(shù)的確定 按正交實(shí)驗(yàn)的優(yōu)化條件對(duì)紫薯色素進(jìn)行反復(fù)提取,至提取液基本呈無色,收集提取液,測(cè)定各次提取液體積V及其在最大吸收峰處的吸光度值A(chǔ)。將各次提取液合并得到總體積VT以及總吸光度值A(chǔ)T,提取率按下式計(jì)算,確定最佳提取次數(shù)。

    1.2.6 不同提取方法的比較 在正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化的最佳提取工藝條件下,分別采用單獨(dú)的酶法、單獨(dú)的超聲波法和酶-超聲聯(lián)用法提取紫薯色素,分別收集其提取液定容至50mL容量瓶,測(cè)定各溶液在最大吸收峰處的吸光度值。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 紫薯色素最大吸收峰的確定

    紫薯色素的紫外-可見吸收光譜圖見圖1。從圖1中可以看出,在526nm處具有最大吸收峰。這與文獻(xiàn)[12]所報(bào)道的紫薯花色苷色素的特征吸收峰基本吻合。因此,本實(shí)驗(yàn)選取526nm作為紫薯色素的最大吸收峰。

    圖1 紫薯色素的紫外-可見吸收光譜圖Fig.1 UV-Vis absorption spectrogram of purple sweet potato pigment

    2.2 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

    2.2.1 纖維素酶用量對(duì)紫薯色素提取的影響 由圖2可見,隨著纖維素酶用量的增加,紫薯色素的提取率不斷增大。這是因?yàn)樽鲜碇泻写罅康睦w維素物質(zhì),它與色素類物質(zhì)結(jié)合緊密,纖維素酶能促進(jìn)纖維素解鏈,使得更多的色素物質(zhì)釋放,從而使得紫薯色素提取率提高。當(dāng)纖維素酶用量超過15IU/g時(shí),紫薯色素的提取率增加不明顯,這是因?yàn)榇藭r(shí)酶解反應(yīng)基本達(dá)到了飽和。因此,初步推測(cè)較適宜的纖維素酶用量為15IU/g。

    圖2 纖維素酶用量對(duì)紫薯色素提取率的影響Fig.2 Effect of cellulase dose on extraction rate of purple sweet potato pigment

    2.2.2 酶解時(shí)間對(duì)紫薯色素提取的影響 由圖3可見,隨著酶解時(shí)間的延長,紫薯色素提取率先增加后略有降低。這可能是因?yàn)槊附鈺r(shí)間的延長,造成了少量紫薯色素分子的破壞。在酶解時(shí)間為45min時(shí),紫薯色素提取率出現(xiàn)最大值。因此,初步推測(cè)比較合適的酶解時(shí)間為45min。

    圖3 酶解時(shí)間對(duì)紫薯色素提取率的影響Fig.3 Effect of enzymatic hydrolysis time on extraction rate of purple sweet potato pigment

    2.2.3 酶解溫度對(duì)紫薯色素提取的影響 由圖4可見,在一定溫度范圍內(nèi)(30~50℃),隨著溫度的升高,紫薯色素的提取率也隨之增加,這是由于溫度的升高使纖維素酶的活力增強(qiáng),提高了酶解反應(yīng)的速度,加快了纖維素的降解,使得色素得以釋放。當(dāng)溫度超過50℃時(shí),紫薯色素提取率顯著降低,這是因?yàn)闇囟冗^高可能導(dǎo)致部分紫薯色素發(fā)生降解,同時(shí)部分酶活力失活,最終導(dǎo)致紫薯色素提取率降低。因此,初步推測(cè)50℃為較適宜的酶解溫度。

    圖4 酶解溫度對(duì)紫薯色素提取率的影響Fig.4 Effect of enzymatic hydrolysis temperature on extraction rate of purple sweet potato pigment

    2.2.4 酶解pH對(duì)紫薯色素提取的影響 從圖5可以看出,隨著酶解pH的增加,紫薯色素的提取率先增加后下降。在pH為4.8時(shí),紫薯色素的提取率達(dá)到最大值。這是因?yàn)槔w維素酶的最佳作用pH為3.0~5.0,在此范圍纖維素具有最大的活力,可加速紫薯中纖維素的降解,使得紫薯色素的溶出效率提高。因此,初步推斷4.8為較合適的酶解pH。

    2.2.5 料液比對(duì)紫薯色素提取的影響 由圖6可以看出,隨著料液比的增大,紫薯色素的提取率先增大后降低。這是因?yàn)樵诿附獾倪^程中,隨著溶液量的增加,提取液和紫薯粉末之間的接觸面積增大,有利于纖維素酶對(duì)紫薯細(xì)胞壁纖維素的降解,使得紫薯細(xì)胞迅速破裂,有利于紫薯色素的溶出。但是隨著料液比的不斷增加,提取液中纖維素酶的濃度也隨之減小,酶解反應(yīng)速率降低。因此,綜合經(jīng)濟(jì)成本及后續(xù)濃縮處理等因素的考慮,初步推斷適宜的料液比為1∶15(g/mL)。

    圖5 酶解pH對(duì)紫薯色素提取率的影響Fig.5 Effect of enzymatic hydrolysis pH on extraction rate of purple sweet potato pigment

    圖6 液料比對(duì)紫薯色素提取率的影響Fig.6 Effect of solid-liquid ratio on extraction rate of purple sweet potato pigment

    2.2.6 超聲溫度對(duì)紫薯色素提取的影響 由圖7可以看出,當(dāng)超聲溫度為60℃時(shí),紫薯色素的提取率達(dá)到最大值。當(dāng)超聲溫度超過60℃時(shí),紫薯色素提取率降低,這是因?yàn)樘烊簧貙?duì)熱的穩(wěn)定性不同,當(dāng)提取溫度過高時(shí),會(huì)破壞色素結(jié)構(gòu),造成提取率下降。因此,初步推測(cè)超聲溫度為60℃為宜。

    圖7 超聲溫度對(duì)紫薯色素提取率的影響Fig.7 Effect of ultrasonic temperature on extraction rate of purple sweet potato pigment

    2.2.7 超聲時(shí)間對(duì)紫薯色素提取的影響 由圖8可以看出,紫薯色素的提取率隨著超聲時(shí)間的延長先增加后減小。當(dāng)超聲時(shí)間為20min時(shí),紫薯色素的提取率達(dá)到最大值。這是因?yàn)槌晻r(shí)間較短時(shí),色素不易溶出,超聲時(shí)間過長時(shí),色素又會(huì)因長時(shí)間受熱而分解。因此,初步推斷超聲20min對(duì)紫薯色素的提取效果最好。

    圖8 超聲時(shí)間對(duì)紫薯色素提取率的影響Fig.8 Effect of ultrasonic time on extraction rate of purple sweet potato pigment

    綜上,由圖2~圖8可以看出,纖維素酶用量、酶解pH、料液比和超聲時(shí)間對(duì)紫薯色素的提取率的影響較大,所以選擇這四個(gè)因素作為正交實(shí)驗(yàn)的考察因素,對(duì)酶-超聲聯(lián)用提取紫薯色素的工藝條件進(jìn)行進(jìn)一步的優(yōu)化。

    2.3 酶-超聲波聯(lián)用提取紫薯色素最佳工藝條件的優(yōu)化

    選取纖維素酶用量、酶解pH、料液比和超聲時(shí)間作為考察因素,以紫薯色素在526nm處的吸光度值為考察指標(biāo),進(jìn)行L9(34)正交實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示。對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析,其結(jié)果見表3。

    從表2的極差分析可知,各因素對(duì)紫薯色素提取率的影響順序?yàn)椋毫弦罕龋久附鈖H>纖維素酶用量>超聲時(shí)間,以影響最小的因素D作為誤差列,選擇因素A、B、C做進(jìn)一步的方差分析,結(jié)果如表3所示。

    表2 L9(34)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析Table 2 Results and analysis of L9(34)orthogonal experiment

    表3 方差分析結(jié)果Table 3 The results of variance analysis

    從表3方差分析結(jié)果可以看出,料液比對(duì)紫薯色素提取有顯著性影響,其余為不顯著因素。結(jié)合表2極差分析的結(jié)果,可以確定最佳提取組合為A3B3C1D2。按照A3B3C1D2做驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn),紫薯色素在526nm處的吸光度值可達(dá)0.847。因此,酶-超聲波聯(lián)用提取紫薯色素的最佳工藝參數(shù)為:纖維素酶用量20IU/g,酶解pH5.6,料液比1∶10(g/mL),超聲時(shí)間20min。

    2.4 提取次數(shù)的確定

    按正交實(shí)驗(yàn)的最佳提取工藝參數(shù),對(duì)紫薯色素進(jìn)行多次提取,并計(jì)算提取率,結(jié)果如表4所示。由表4可見,提取3次時(shí),提取率達(dá)到98.7%,可將絕大部分色素溶出,所以最佳提取次數(shù)確定為3次。

    表4 提取次數(shù)對(duì)紫薯色素提取率的影響Table 4 Effect of extraction times on extraction rate of purple sweet potato pigment

    2.5 紫薯色素三種不同提取方法的比較

    分別用酶解法、超聲法、酶-超聲聯(lián)用法提取紫薯色素,比較三種提取方法對(duì)紫薯色素提取率的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)酶法、超聲法、酶-超聲波聯(lián)用法提取紫薯色素測(cè)得A526nm分別為0.608、0.704、0.847。酶-超聲波聯(lián)用法的紫薯色素提取率相比酶法和超聲法分別提高了39.3%和20.3%,可見酶-超聲波聯(lián)用提取法可以有效提高紫薯色素的提取率,比單獨(dú)使用酶法、超聲法提取的效果要好。

    3 結(jié)論

    3.1 通過單因素及正交實(shí)驗(yàn)確定了紫薯色素的最佳提取工藝參數(shù)為:纖維素酶用量20IU/g,酶解時(shí)間45min,酶解溫度50℃,酶解pH 5.6,料液比1∶10(g/mL),超聲時(shí)間20min,超聲溫度50℃。

    3.2 在最佳提取工藝參數(shù)條件下提取紫薯色素,提取次數(shù)為3次時(shí),紫薯色素的提取率可達(dá)98.7%,可將絕大多數(shù)紫薯色素提取溶出。

    3.3 與酶法、超聲波提取法相比,酶-超聲波聯(lián)用法提取紫薯色素的提取率分別增加了39.3%和20.3%,使得紫薯色素的提取率大大提高。因此,酶-超聲波聯(lián)用技術(shù)是提取紫薯色素的一種高效提取方法,具有實(shí)際的應(yīng)用價(jià)值。

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    Study on enzyme-ultrasonic combined extraction method of purple sweet potato pigment

    LI Hui1,2,MENG Ya-hong1,2,F(xiàn)U Yan-qing1,2,SUN Li-ping1,2,PENG Lin-cai2
    (1.Yunnan Province Food Safety Research Institute,Kunming University of Science and Technology,Kunming 650500,China;2.Faculty of Chemical Engineering,Kunming University of Science and Technology,Kunming 650500,China)

    The enzyme-ultrasonic combined extraction method of purple sweet potato pigment was studied by single factor experiment and L9(34)orthogonal experiment.The results showed that the optimum extraction conditions were obtained as follows:cellulase dose 20IU/g,enzymatic hydrolysis time 45min,enzymatic hydrolysis temperature 50℃,enzymatic hydrolysis pH5.6,solid-liquid ratio 1∶10,ultrasonic time 20min and ultrasonic temperature 60℃.Under the optimum conditions,the extraction rate reached up to 98.7%after three times extractions.Furthermore,the three extraction methods(enzymatic extraction,ultrasonic extraction and enzymeultrasonic combined extraction)were compared.The pigment extraction rate of enzyme-ultrasonic combined extraction method increased by 39.3%and 20.3%respectively compared to that of enzyme extraction and ultrasonic extraction.The results of this study indicated that pigment extraction rate of enzyme-ultrasonic combined extraction method was the highest.This study would provide a new extraction method for purple sweet potato pigment.

    purple sweet potato;purple sweet potato pigment;cellulose;ultrasonic

    TS255.1

    B

    1002-0306(2014)14-0256-05

    10.13386/j.issn1002-0306.2014.14.048

    2013-11-19

    李輝(1985-),女,博士,講師,研究方向:食品化學(xué)。

    云南省省級(jí)人培項(xiàng)目(KKSY201305002)。

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