擦拭類痕跡脫落細(xì)胞提取方法的比較實(shí)驗(yàn)

史 良，李慶慶

（成都市公安局 四川成都 610000)

擦拭類痕跡脫落細(xì)胞提取方法的比較實(shí)驗(yàn)

史 良，李慶慶

（成都市公安局 四川成都 610000)

目的:通過三種不同提取方法對同一非滲透性客體上的接觸類生物檢材進(jìn)行提取，分析三種提取方法對DNA檢出率的影響差異。方法:分別采用紗布擦拭法、棉簽二步法和脫落細(xì)胞粘取器提取20處赤手桌面擦拭痕跡，進(jìn)行DNA檢測。 結(jié)果:紗布擦拭法提取均未檢出完整STR分型，其中25%檢出部分STR分型及混合STR分型，其余75%為無效圖譜或未檢出；棉簽二步法提取有10%檢出完整STR分型，60%檢出部分STR分型及混合STR分型，30%為無效圖譜或未檢出；脫落細(xì)胞粘取器法有10%檢出完整STR分型，20%檢出部分STR分型及混合STR分型，70%為無效圖譜或未檢出。三組結(jié)果間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異（P=0.009），其中棉簽二步法結(jié)果最好，脫落細(xì)胞粘取器次之，紗布擦拭法效果最差。結(jié)論:對于非滲透性客體上的接觸類生物檢材的提取，使用棉簽二步法的效果相對比較理想。

脫落細(xì)胞；擦拭痕跡；DNA檢驗(yàn)

擦拭類物證是接觸類生物物證中的一種，由于其微量性以及遺留的普遍性，容易被犯罪嫌疑人所忽視，這類物證在現(xiàn)場勘查中的發(fā)現(xiàn)及正確提取，能夠較大程度提高現(xiàn)場勘查的質(zhì)量。本次研究以現(xiàn)場勘查中最常見的手指擦拭痕跡為研究對象，以光滑非滲透性客體為承痕客體，采用紗布擦拭法[1]、棉簽二步法[2,3]和脫落細(xì)胞提取器法[4,5]提取，比較三種提取方法在接觸類生物檢材提取效果上的優(yōu)劣。

一、材料與方法

（一）樣本制作。

赤手擦拭痕跡60處。承痕客體均選擇光滑非滲透性客體（辦公桌桌面），每次制樣前均使用一次性毛巾將表面反復(fù)擦拭干凈。所有樣本的制樣人為同一人，一處擦拭痕跡由制樣人的一只手指在客體上擦拭，每處痕跡均反復(fù)擦拭四次。每20處擦拭痕跡為一組，每組用一種方法提取。所有參與實(shí)驗(yàn)人員均佩戴手套、口罩、頭套等防護(hù)用具。

（二）取樣。

1．紗布擦拭法。用潔凈剪刀剪取0.3cm×0.3cm面積大小潔凈紗布，鑷子夾住蘸取少量純凈水，用定性濾紙吸附掉多余水分，使紗布具有粘附力。用該紗布在遺留有擦拭痕跡處反復(fù)擦拭后裝入1.5ml離心管內(nèi)備檢。

2．棉簽二步提取法。將一支干凈棉簽用純凈水浸潤，用鑷子夾取棉簽上少量棉紗，采用另一支干燥、潔凈的棉簽上吸附掉多余水分，使棉紗具有粘附力。用該棉紗在遺留有擦拭痕跡處反復(fù)擦拭，放入1.5ml離心管內(nèi)。再用鑷子夾取少量干燥棉紗，在已經(jīng)擦拭過的地方再次進(jìn)行反復(fù)擦拭，再將該棉紗放入同一離心管內(nèi)備檢。

3．脫落細(xì)胞提取器提取。打開提取器的蓋子，小心揭開粘面保護(hù)層，用粘面在有擦拭痕跡處反復(fù)粘取多次，封存?zhèn)錂z。

（三）DNA的提取及檢測。

1．DNA的提取。采用CheleX-100進(jìn)行DNA提取。將擦拭物置于1.5ml離心管中，加入5% CheleX-100 60μl和10g/L蛋白酶K 5μl，加樣槍頭混勻，置于56℃1h，期間震蕩1次；100℃放置10min，10000g離心3min，上清4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2．PCR擴(kuò)增。采用對PowerPlex16 HS(Promega公司)試劑盒進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增反應(yīng)體系為10μl體系 （Sample 4μl、Master Mix 2μl、Primer Pair Mix 1μl、H2O 3μl）。采用GeneAmp?PCR System 9700熱循環(huán)儀進(jìn)行PCR擴(kuò)增，共32個循環(huán)。擴(kuò)增產(chǎn)物4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

3．電泳。取擴(kuò)增產(chǎn)物1μl，采用ABI 3130XL型遺傳分析儀進(jìn)行電泳檢測，GeneMapper ID-X軟件進(jìn)行分析。

（四）統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。

采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)進(jìn)行多組間非參數(shù)比較。

二、結(jié) 果

辦公桌桌面上擦拭性生物檢材三種提取方法DNA檢測結(jié)果主要表現(xiàn)為出現(xiàn)完整DNA分型、部分STR分型、混合STR分型以及無效圖譜幾種類型（圖1-3）。

圖1 完整STR分型圖譜

圖2 混合STR分型圖譜

圖3 無效DNA分型圖譜

kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)顯示三種提取方法具有顯著性差異（P=0.009），棉簽二步法效果最好。三種提取方法的結(jié)果見表1。

表1 三種提取方法結(jié)果比較

三、討 論

隨著DNA技術(shù)的不斷完善，生物物證在刑偵破案中認(rèn)定犯罪、分析作案過程、指明偵查方向和劃定偵查范圍等方面的作用越來越顯得重要。在現(xiàn)場勘查中，指紋、足跡等傳統(tǒng)痕跡物證已經(jīng)越來越不容易提取到，并且隨著犯罪分子對DNA檢驗(yàn)技術(shù)有了一定了解，一些肉眼可見的血跡、煙頭等物證可能會被破壞。

在案件的現(xiàn)場勘查中，常常會發(fā)現(xiàn)犯罪嫌疑人遺留下一些攀爬、擦劃、擦拭等痕跡，在這些痕跡中往往都會含有犯罪分子的脫落細(xì)胞，成功提取這些痕跡里的犯罪分子脫落細(xì)胞可以為提高現(xiàn)場勘查質(zhì)量以及為偵查、破案增添一個重要途徑。此類物證的特點(diǎn)是：1．承痕客體往往較大或比較固定，難以直接原物提取到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)；2．受現(xiàn)場條件和現(xiàn)場保護(hù)措施等因素制約，檢材容易受到污染；3．受犯罪分子觸碰時間、接觸力度和皮膚特質(zhì)等因素影響，物證中含有DNA物質(zhì)的數(shù)量差別也會很大；4．時間越長，接觸類痕跡中的DNA物質(zhì)會部分降解導(dǎo)致提取量減少。

所以，如何在現(xiàn)場勘查過程中，第一時間對承痕客體上的DNA物質(zhì)進(jìn)行最大限度的有效富集并獲得有價值的DNA圖譜，是接觸類生物物證在案偵工作中發(fā)揮作用的關(guān)鍵所在。

本實(shí)驗(yàn)中接觸性生物檢材經(jīng)過三種不同的提取方法提取，在檢出完整STR分型方面，使用棉簽二步法和脫落細(xì)胞提取器的檢驗(yàn)效果優(yōu)于紗布擦拭法；在檢出部分STR分型及混合STR分型方面，使用棉簽二步法的效果明顯優(yōu)于其他兩種方法。在實(shí)際案偵工作中，能夠檢出部分STR分型及混合STR分型，也能為偵查破案，特別是劃定或縮小偵查范圍提供很大的支撐。

在本次實(shí)驗(yàn)中，使用棉簽二步法在第一次擦拭后，在短暫的時間范圍內(nèi)（約10秒），肉眼可見承痕客體表面仍舊殘留有液體，此時客體表面仍殘留有生物物證沒有被提取到，棉簽二步法的第二次提取可以將該殘留物質(zhì)粘附提取。而使用脫落細(xì)胞提取器，由于本次實(shí)驗(yàn)采用的擦拭痕跡面積比提取儀的粘面面積大，在粘取多次以后，膠面不再具有粘性，影響了提取檢驗(yàn)的效果。但是，如果膠面恰好粘附到比較集中的DNA物質(zhì)，則在檢驗(yàn)效果上有非常好的表現(xiàn)。使用脫落細(xì)胞提取儀的優(yōu)點(diǎn)在于提取材料規(guī)范成熟，操作簡單易學(xué)，提取后保護(hù)到位，缺點(diǎn)是使用成本較高，提取范圍較小。

在本次實(shí)驗(yàn)中，針對光滑非滲透性客體上的接觸類生物物證，使用棉簽二步法提取優(yōu)勢比較明顯。該方法的優(yōu)點(diǎn)在于提取材料容易獲得，成本低，選擇提取的范圍容易掌握，操作步驟比較簡單，檢出率較高。但該法對操作手法有一定要求，如棉紗量、沾水量以及擦拭時的力量大小等。鑒于本次實(shí)驗(yàn)樣本量的限制，對于實(shí)驗(yàn)的結(jié)論還需要在以后實(shí)踐工作中進(jìn)一步印證。

1.張曉楠，吳元明，候 穎，等.從梳子上提取DNA檢驗(yàn)1例[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2007（28）：23

2.袁則平.棉簽二次轉(zhuǎn)移法有效提取現(xiàn)場手套印脫落DNA[J].刑事技術(shù)，2013（5）：232.

3.Sweet D,Lore te M,Lore te JA,et al.A improved method to recover saliva from human skin:the double swab techique[J],J Fore sic Sci,1997(42):320-322.

4.趙春鶴，郭業(yè)明，陳紅英，等.利用脫落細(xì)胞粘取器提取接觸類檢材DNA的方法[J].廣東公安科技，2013（4）：54-55.

5.陳殿宇，郝金萍，張忠祥，等.生物脫落細(xì)胞提取儀在案件檢驗(yàn)中的應(yīng)用[J].刑事技術(shù)，2008，（2）：58.

（責(zé)任編輯:吳良培）

D919.2

A

1674-5612（2014）05-0052-04

2014-06-06

史 良，（1976-），男，四川成都人，成都市公安局刑事偵查局，研究方向：刑事科學(xué)技術(shù)。