黑龍江省某鎮(zhèn)肉牛布魯氏菌感染情況調(diào)查

（1. 黑龍江省動物疫病預(yù)防與控制中心，黑龍江哈爾濱 150069；

2. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所，黑龍江哈爾濱150001）

黑龍江省某鎮(zhèn)肉牛布魯氏菌感染情況調(diào)查

汪 淼1，王靖飛2，張俊峰1，孫 剛1

（1. 黑龍江省動物疫病預(yù)防與控制中心，黑龍江哈爾濱 150069；

2. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所，黑龍江哈爾濱150001）

為了解黑龍江省B鎮(zhèn)肉牛的布魯氏菌病流行現(xiàn)狀，從而評估該病在當(dāng)?shù)嘏Ｈ褐械牧餍袪顩r及人感染布魯氏菌的風(fēng)險，本研究以估計個體及群流行率為目的，按照預(yù)期流行率0.5%，可接受誤差0.3%，置信水平95%對B鎮(zhèn)531個肉牛養(yǎng)殖場戶養(yǎng)殖的3535頭肉牛進行隨機抽樣，獲得血清樣本1334份，用虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗兩種方法檢測均為陽性的牛即為布病患病牛，同時對養(yǎng)殖戶就養(yǎng)殖模式、動物來源、更新方式、既往病史、養(yǎng)殖規(guī)模等方面進行問卷調(diào)查。血清檢測結(jié)果顯示，虎紅平板凝集5份陽性，陽性率為0.37%，對5份陽性血清進行試管凝集試驗復(fù)檢，布魯氏菌抗體全部為陰性。同時回收問卷531份，有效問卷389份，合格率73.3%。根據(jù)本次檢測結(jié)果，B鎮(zhèn)肉牛布病個體流行率接近于零，牛群中沒有發(fā)現(xiàn)利于布魯氏菌感染的風(fēng)險因素。

肉牛；布魯氏菌病；流行率；黑龍江

1 研究背景

布魯氏菌?。ㄒ韵潞喎Q“布病”）是由布魯氏桿菌（Brucella）引起的哺乳動物的傳染病，屬于全世界常見的動物傳染病之一，對人類健康和動物生產(chǎn)性能都有很大威脅[1]。世界動物衛(wèi)生組織將其列為列表疫病，我國將其列為二類動物疫病。家畜感染布魯氏菌會引起流產(chǎn)、消瘦及泌乳下降，從而造成經(jīng)濟損失；人感染布魯氏菌病會引起流感樣癥候群及長期虛弱[2]。人感染布病主要因為與染疫動物及流產(chǎn)物、死胎等的接觸而造成。

黑龍江省B鎮(zhèn)從2006年以來著重發(fā)展養(yǎng)殖業(yè)，B鎮(zhèn)轄區(qū)內(nèi)建有一家大規(guī)模的牛肉產(chǎn)品加工企業(yè)，在政府的大力倡導(dǎo)和該企業(yè)的帶動下，全鎮(zhèn)形成了以肉牛養(yǎng)殖為主導(dǎo)的產(chǎn)業(yè)模式，肉牛存欄量最高達1.1萬頭。養(yǎng)殖量的增加也增加了人與牲畜接觸的機會，因而也增加了感染布病的可能性。只有掌控該鎮(zhèn)肉牛群中布病流行情況，才能夠較準(zhǔn)確地評估布病在牛群中的流行狀況及人感染布魯氏菌的風(fēng)險，進而提出相對科學(xué)的意見和建議，保證當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖業(yè)者和消費者的身體健康。本研究擬通過流行病學(xué)調(diào)查了解黑龍江省B鎮(zhèn)肉牛的布病流行現(xiàn)狀。從而估計當(dāng)?shù)厝馀２疾〉牧餍新?，并識別可能存在的風(fēng)險因素。

2 研究方法

2.1 病例定義

陽性牛：對牛血清進行虎紅平板凝集試驗，陽性血清用試管凝集試驗進行復(fù)核，兩種方法檢測均為陽性的牛即為布病患病牛，視為陽性牛。陽性場/戶：存在至少一頭陽性牛的場/戶即為陽性場/戶。

2.2 抽樣

某鎮(zhèn)共531戶養(yǎng)殖戶，共飼養(yǎng)成年肉牛3535頭。按照預(yù)期流行率0.5%，可接受誤差0.3%，置信水平95%，計算需要樣本量為1327頭。按照每戶養(yǎng)牛數(shù)量占全鎮(zhèn)總數(shù)的比例，將全部樣品分配至各戶，逐戶采樣。實際抽樣量為1334頭份。

2.3 檢測方法

用哈藥集團生物疫苗公司生產(chǎn)的布病抗體檢測試劑，采血分離血清樣本進行虎紅平板凝集試驗初篩（敏感性（Se）：0.99，特異性（Sp）：0.70），陽性樣本用試管凝集試驗（敏感性（Se）：0.80，特異性（Sp）：0.99）復(fù)核。經(jīng)過試管凝集試驗檢測，陽性樣本即判定該牛為布病患病牛。

2.4 問卷調(diào)查

2013年11—12月，由某鎮(zhèn)動物疫控中心（防疫站）完成抽樣及問卷調(diào)查工作。首先對一名站領(lǐng)導(dǎo)就樣品采集、血清分離及問卷填寫規(guī)則進行培訓(xùn)，之后再對參與本次采樣和填寫問卷的村級防疫員進行培訓(xùn)。在每戶采血時，通過當(dāng)面詢問的方式完成問卷填寫。

2.5 數(shù)據(jù)分析

用Excel對問卷中各問題進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計；根據(jù)檢測結(jié)果，估計某鎮(zhèn)肉牛布病流行率。

3 結(jié)果

回收問卷531份，其中142份為無效問卷，應(yīng)答率73.3%。共收集血清樣本1334份，對這1334份血清進行檢測，虎紅平板凝集抗原逐份篩查，陽性率為0.37%，對5份陽性血清進行試管凝集試驗復(fù)檢，布魯氏菌抗體全部為陰性。

對389份有效問卷上的信息進行統(tǒng)計，對飼養(yǎng)模式、動物來源及既往病史的結(jié)果見表1。

表1 問卷信息統(tǒng)計結(jié)果

對養(yǎng)殖規(guī)模及數(shù)量的統(tǒng)計結(jié)果，見表2。

表2 養(yǎng)殖規(guī)模及數(shù)量統(tǒng)計結(jié)果

4 討論

4.1 本研究采用橫斷面研究，選擇估計流行率的方法，按比例抽樣的策略，0.5%的估計流行率是相對較低的流行率，要求樣本量約占群體總數(shù)的37.5%，同時又兼顧了全鎮(zhèn)每一個養(yǎng)殖場戶進行抽樣，實際樣本量略大于理論值，可以支持抽樣策略，滿足本研究估計個體流行率的目的。

經(jīng)過了幾十年的平穩(wěn)期之后，自2000年以來，我國獸醫(yī)部門檢出的布病陽性牲畜數(shù)量逐年增加，以奶牛、羊主產(chǎn)區(qū)疫情較重。與此同時布病人間病例也有上升趨勢[3]。黑龍江省人間布病也從2000年開始發(fā)病率有所回升，2006年高達10.69/10萬，其主要菌株以羊種布魯氏菌為主[4]。由此可見，肉牛雖可感染布病，但可能性較低。

4.2 本研究所用的血清學(xué)檢測方法是根據(jù)我國現(xiàn)行動物布病檢測標(biāo)準(zhǔn)（GB/T18646-2002）為依據(jù)完成的。RBPT法，即虎紅平板凝集試驗，此方法出現(xiàn)于20世紀(jì)70年代，為減少平板凝集試驗的非特異性反應(yīng)，以虎紅染料染色菌體，制成一種新的酸性緩沖玻片抗原，主要特點是抑制引起非特異性反應(yīng)的IgM和IgG的活性以及某些其他細菌共同抗原與抗布魯氏桿菌血清出現(xiàn)的交叉反應(yīng)，因此具有一定的特異性和較高的敏感性，且方法簡便，成本低廉，適用于布病大面積檢疫和流行病學(xué)調(diào)查，但易出現(xiàn)假陰性和假陽性[5]。據(jù)文獻報道，在1051份布病疑似感染患者的血清中，RBPT檢測結(jié)果存在0.2%的假陰性[6]。

本研究中，1334份血清樣品經(jīng)過RBPT檢測，僅有5份為陽性，在1329份陰性中，一定存在假陰性。分析其原因可能有：一是部分血清發(fā)生溶血現(xiàn)象。由于條件限制，在現(xiàn)地采血后，將采血器帶回實驗室分離血清，在這個過程中難免會因為路途顛簸，保管不當(dāng)而造成溶血現(xiàn)象的發(fā)生。二是本次檢測試驗是在12月份進行，實驗室內(nèi)氣溫較低，進行RBPT時，可能會產(chǎn)生假陰性[7]；三是虎紅平板凝集試驗的結(jié)果判定上，為避免出現(xiàn)假陽性，一定要嚴格控制判定時間，仔細觀察凝集狀態(tài)。在時間上，以4分鐘時判定為最佳，但在實際工作中，樣品量大時，難免掌握不好，影響結(jié)果判定。

在觀察凝集狀態(tài)時，有學(xué)者認為出現(xiàn)肉眼可見顆粒或絮狀凝集為RBPT凝集[8]，而在本次檢測結(jié)果的判定中，只有顆粒狀凝集判為陽性，絮狀或片狀凝集判為非特異性凝集，不計做陽性。因此可能漏掉陽性樣品，造成檢測結(jié)果的假陰性較多。

經(jīng)過RBPT檢測陽性的血清樣本，進行試管凝集試驗（SAT），而SAT的結(jié)果同樣受多方面因素影響，比如結(jié)果的渾濁程度判定不準(zhǔn)確、血清的稀釋比例不準(zhǔn)確等，都會造成假陰性的出現(xiàn)。另外，待檢血清中的纖維蛋白、藥物濃度等都會感染檢測結(jié)果，出現(xiàn)假陰性[7]。

因此本研究檢測結(jié)果中陽性樣品數(shù)量雖然為0，但是無法排除可能存在的假陰性結(jié)果。

4.3 問卷有效率

本次調(diào)查問卷回收情況較好，但是問卷有效率很低，僅為73.1%。問卷內(nèi)容問到了養(yǎng)成年牛的數(shù)量和母牛的數(shù)量，但有些問卷的回答存在歧義，無法區(qū)別成年牛中是否包括母牛的數(shù)量。同時，本次調(diào)查中問卷的填寫是以場為單位，每場填寫一份問卷而不是每份血清樣品對應(yīng)的牛填寫一份單獨的問卷，這樣對同一場內(nèi)的不同感染情況的牛無法進行比對分析。

4.4 問卷獲取信息的分析

養(yǎng)殖模式：根據(jù)問卷反饋的信息，該鎮(zhèn)肉牛主要養(yǎng)殖模式為散養(yǎng)和圈養(yǎng)，其中，44養(yǎng)殖戶，共1291頭牛采用圈養(yǎng)方式；345戶共977頭牛采用散養(yǎng)方式。說明大多數(shù)人家是以散養(yǎng)為主，且養(yǎng)殖數(shù)量在10頭以下的居多。散養(yǎng)群體不大，便于管理也便于發(fā)現(xiàn)健康狀況異常問題。圈養(yǎng)的肉牛每場最多130頭，最少僅為1頭，養(yǎng)殖密度普遍較大，便于飼養(yǎng)管理的同時，也在一定程度上避免了疫病的發(fā)生和傳播。

引進方式：遼寧省喀左縣從建國至20世紀(jì)90年代末，堅持牲畜自繁自養(yǎng)，因此自新中國成立以來從未發(fā)生過牲畜布病，而從2000年之后，隨著大力發(fā)展養(yǎng)羊業(yè)，從外地購進小尾寒羊，才陸續(xù)發(fā)生人員感染布病的情況，同時也在飼養(yǎng)羊群中檢出布病患病羊[9]。說明從外地引進動物的同時存在引入疫病的可能性。本次調(diào)查中，通過問卷反饋的信息可知，該鎮(zhèn)肉牛主要靠自繁自養(yǎng)，389個場戶中有360戶自繁自養(yǎng)，從外購進或從交易市場購進的29個場戶也都從本地（即該縣境內(nèi)）引進，避免了遠距離的運輸，也避免了自然環(huán)境改變等對動物造成的應(yīng)激，動物的健康狀況相對可以把握。

既往病史：根據(jù)問卷反饋的信息，全鎮(zhèn)肉牛養(yǎng)殖戶均未發(fā)生所飼養(yǎng)肉牛及人員感染布病的情況，母畜初產(chǎn)流產(chǎn)率也為零。說明這一地區(qū)屬于肉牛布病清凈區(qū)，同時，從調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)?shù)匮?、奶牛的飼養(yǎng)量幾乎為零，根據(jù)相關(guān)文獻[10]，羊及奶牛感染的布病血清流行率遠高于肉牛，傳播給人的風(fēng)險也較高。

5 結(jié)論通過本次研究結(jié)果可以推斷，黑龍江省B鎮(zhèn)肉牛布魯氏菌病流行率接近零，牛群中沒有發(fā)現(xiàn)利于布魯氏菌感染的風(fēng)險因素。

致謝：感謝哈爾濱市畜牧獸醫(yī)局防疫處、B鎮(zhèn)獸醫(yī)主管部門及各鄉(xiāng)村獸醫(yī)的大力協(xié)助。

[1] Hegazy Y M，Moawad A，Osman S，et al. Ruminant Brucellosis in the Kafr EI Sheikh Governorate of the Nile Delta，Egypt：Prevalence of a Neglected Zoonosis[J]. Plos neglected tropical diseases，2011，5（1）：e944.

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[4] 邢智鋒，吳群紅，金福芝等. 1949-2009年黑龍江省人間布魯氏菌病疫情分析[J]. 疾病監(jiān)測，2011，26（11）：861-863.

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Investigation of Brucellosis in Beef Cattle in Town B of Heilongjiang Province

Wang Miao1，Wang Jingfei2，Zhang Junfeng1，Sun Gang1

（1. Heilongjiang Animal Disease Prevention and Control Center，Harbin，Heilongjiang 150069；2. Harbin Veterinary Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Harbin，Heilongjiang 150001）

Epidemiological research methods were adopted to estimate prevalence and identify risk factors of brucellosis in the beef cattle in B town of Heilongjiang province. Sample size was determined for the purpose of estimating prevalence with estimated prevalence 0.5%，acceptable error 0.3% and conf dence level 95% as parameters in the calculation. A total of 1334 serum samples were collected from 531 beef cattle farms and tested using RBPT and SAT. A positive sample should be conf rmed by both of the two tests. In addition，questionnaires were f lled out during the investigation，including farm type information，animal source，management mode，disease history，farm size，etc. The serological tests showed that five samples were positive for antibodies to Brucella in the RBPT，but they were all negative in the SAT test. 531 questionnaires were collected with 389 as valid，yielding a valid rate of 73.3%. Considering the specif city of the test，the true cattle prevalence of brucellosis was approximately nil and no risk factor was identif ed in the study.

beef cattle；brucellosis；prevalence；Heilongjiang

S851.38

：A

：1005-944X（2014）11-0048-04