致康膠囊對大鼠應激性胃潰瘍的藥效學研究

沈 欣，趙宗平，李德鳳，宗桂珍，何 偉

(1.中國中醫(yī)科學院中藥所，北京 100700；2.西安千禾藥業(yè)有限責任公司，西安 710065)

致康膠囊是由西安千禾藥業(yè)有限責任公司生產(chǎn)的中藥制劑，由大黃、黃連、三七、白芷、阿膠、龍骨(煅)、白及、醋沒藥、海螵蛸、茜草、龍血竭等14味中藥組成，其氣微香、味辛涼、微苦，具有清熱涼血止血、化瘀生肌定痛的功效，可用于創(chuàng)傷性出血、嘔血、崩漏及便血等。該處方是在七厘散、腐盡生肌散等經(jīng)典名方基礎上根據(jù)臨床經(jīng)驗和實驗研究而組成，臨床用于婦科、內(nèi)科、外科各種出血性疾病，均有較好的療效和修復功能。臨床應用表明，本藥具有明顯的止血、促進組織修復、消炎的功效，圍繞以上功效，本試驗擬以大鼠應激性胃潰瘍動物試驗進一步探討其藥效及作用機制。

1 目的

致康膠囊對大鼠水浸拘束法致胃黏膜損傷的藥理作用。

2 材料

2.1 動物

SDSPF級雄性大鼠70只，體質(zhì)量200～220 g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司(許可證號SCXK(京)2012-0001)。

2.2 飼料

購自北京市科澳協(xié)力飼料有限公司(產(chǎn)品許可證號SCXK(京)2009-0012，產(chǎn)品批號12093211，生產(chǎn)日期2012909)。

2.3 動物飼養(yǎng)

試驗期間動物飼養(yǎng)于中國中醫(yī)科學院中藥研究所動物房(實驗設施許可證SYXK(京)2008-0023)。動物房為屏障系統(tǒng)，人工光照，12 h明暗周期，溫度控制在20～22℃范圍，相對濕度為40～70%，換氣次數(shù)15次/h。動物飼養(yǎng)于金屬大鼠飼養(yǎng)籠，每籠10只。用500 mL塑料飲水瓶盛裝純凈水供動物隨意飲用，每日更換新鮮飲水。

2.4 藥物

致康膠囊由西安千禾藥業(yè)有限責任公司提供(批號20120611);奧美拉唑鎂腸溶片由阿斯利康制藥有限公司提供(批號1206079，生產(chǎn)日期2011年12月，有效期至2014年11月)。

2.5 試劑

甲醛，北京北化精細化學品有限責任公司(批號20080820)。

2.6 儀器

卡尺，香港豐量國際集團有限公司(型號ELECTRONIC DIGITAL CALLIPER， 0～150 mm)；血流測定儀、PeriCam PSI激光散斑血流視頻監(jiān)測系統(tǒng)，瑞典產(chǎn)。

3 方法

3.1 動物分組

健康CD大鼠按體質(zhì)量隨機分6組，即空白對照組、模型組、奧美拉唑鎂(5 mg/kg)、致康膠囊(680 mg/kg)、致康膠囊(340 mg/kg)、致康膠囊(170 mg/kg)，致康高、中、低劑量相當于人臨床用量11、5.5、2.7 倍，人臨床用量以每日3次，每次12粒為標準。對照組10只，其余各組均為12只。

3.2 給藥

分組當日開始口服灌胃給藥，空白對照組與模型組口服蒸餾水，劑量10 ml/kg，每日1次，連續(xù)4 d。

3.3 造模

動物于實驗前1 d禁食不進水12 h，末次給藥后1 h將大鼠固定于金屬制作的小鐵籠內(nèi)，置于20℃恒溫水中，水淹至劍突6 h。從水中取出大鼠擦干皮膚、麻醉，動物仰臥位固定，剖開腹部皮膚肌肉，暴露胃部，沿胃大彎剪開胃部，用大頭針將胃黏膜固定在隔板上。用PeriCam PSI激光散斑血流視頻監(jiān)測系統(tǒng)，觀察胃黏膜血流量情況，距離12.5 cm，1幀/s，分辨率0.12 mm，監(jiān)測時間2 min。取胃并沿胃大彎剪開，放入10%甲醛溶液固定，次日展開胃壁，觀察并計數(shù)胃黏膜的出血點，測量各個潰瘍的長度，求其總和，作為潰瘍指數(shù)進行統(tǒng)計。將胃送病理做病理學檢查。

3.4 觀測指標

胃血流量：動物仰臥位固定，剖開腹部皮膚肌肉，暴露胃部，沿胃大彎剪開胃部，用大頭針將胃黏膜固定在隔板上。用PeriCam PSI激光散斑血流視頻監(jiān)測系統(tǒng)，觀察胃黏膜血流量情況，距離12.5 cm，1幀/s，分辨率0.12 mm，監(jiān)測時間2 min。數(shù)據(jù)采集： 直線連接固定胃黏膜的大頭針，確定測量區(qū)域，取開始測量1 min至1.5 min，約30 s的測量值作為胃黏膜灌注量，并計算單位面積的胃黏膜灌注量。

胃潰瘍長度及指數(shù)：取胃并沿胃大彎剪開，放入10%甲醛溶液固定，次日展開胃壁，觀察并計數(shù)胃黏膜的出血點，測量各個潰瘍的長度，求其總和作為潰瘍指數(shù)進行統(tǒng)計。

胃病理學檢查： 10%的福爾馬林固定大鼠胃組織，將固定好的胃組織取材修塊后，經(jīng)梯度乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋后，切片(厚度4 μm)并進行HE染色。用光學顯微鏡進行病理組織學檢查。

3.5 統(tǒng)計學方法

4 結果

4.1 致康膠囊對大鼠應激性胃潰瘍的影響

陽性藥、致康膠囊3個劑量組均能明顯減少胃黏膜潰瘍指數(shù)及長度，3個劑量組呈現(xiàn)一定的量效關系，說明本品能明顯減輕應激試驗造成的胃黏膜損傷。

表1 致康膠囊對大鼠應激性胃潰瘍的影響(水浸法)

注：與模型組比較:*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001

4.2 致康膠囊對模型動物胃形態(tài)學變化影響

空白對照組胃黏膜層有少量出血，未見黏膜壞死脫落；模型組、陽性藥組及各劑量給藥組可見不同程度的胃黏膜出血，黏膜上皮壞死脫落形成糜爛，但未累及黏膜肌層，黏膜下層亦可見不同程度的出血，部分動物胃壁肌層可見出血。與空白對照組比較，模型組胃黏膜的各種病變差異有統(tǒng)計學意義；與模型組比較，陽性藥及致康膠囊各給藥組胃黏膜的各種病變差異有統(tǒng)計學意義。

4.3 致康膠囊對模型動物胃血流量的影響

奧美拉唑鎂、致康膠囊3個劑量組均能明顯增加大鼠應激性胃潰瘍模型中胃黏膜單位面積的血流量，致康膠囊高、中劑量組能明顯增加胃黏膜灌注量，3個劑量組呈現(xiàn)一定的量效關系，說明本品能明顯增加模型動物的胃黏膜血流量，調(diào)節(jié)胃黏膜血流的分布狀況，通過增加胃黏膜血流量，有效保護胃黏膜，通過維護和重建黏膜微循環(huán)而保護胃黏膜細胞的完整性。

表2 致康膠囊對大鼠胃黏膜出血病變比較

表3 致康膠囊對大鼠胃黏膜壞死脫落病變比較

表4 致康膠囊對大鼠黏膜下層出血病變比較

表5 致康膠囊對大鼠應激性胃潰瘍模型中胃黏膜血流量的影響作用

注：與模型組比較:*P<0.05，**P<0.01

5 結論

應激性胃潰瘍是以炎性糜爛、淺表潰瘍及胃腸道出血為特征的急性胃黏膜病變，是內(nèi)分泌系統(tǒng)和自主神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂導致胃腸運動、分泌功能失調(diào)造成的急性潰瘍模型，病理表現(xiàn)為胃腺部黏膜呈彌漫性水腫，部分黏膜充血，廣泛出血或形成血痂，血痂與胃黏膜結合牢固，大鼠胃黏膜的完整性被破壞，上皮細胞壞死，毛細血管破裂出血及滲出，胃黏膜表面微絨毛呈現(xiàn)明顯水腫，毛細血管內(nèi)有微血栓形成，從而導致胃黏膜微循環(huán)障礙，胃黏膜屏障受

損，胃黏膜對胃酸和胃蛋白酶分泌增加失去抵抗力引起急性胃黏膜病變。本試驗可觀察到，本藥具有明顯的防治應激性胃潰瘍的作用，且有一定的量效關系。具體表現(xiàn)在可明顯減輕水浸應激胃潰瘍模型大鼠胃黏膜損傷程度，減輕胃黏膜充血、水腫、糜爛等作用。光鏡下的形態(tài)學改變亦可證實，對急性胃黏膜損傷具有保護作用，增強胃黏膜的防御機制，對防治應激性胃潰瘍有一定療效和優(yōu)勢。

同時近年來研究表明，胃、十二指腸病變處黏膜下血流的減少是這些病變的基本原因之一，病變部位的糜爛、潰瘍發(fā)病因素中黏膜下血供減少比胃酸更為重。本研究結果中，致康膠囊可增加胃黏膜血供及調(diào)節(jié)胃黏膜血流的分布狀況，通過增加胃黏膜血流量有效保護胃黏膜，通過維護和重建黏膜微循環(huán)而保護胃黏膜細胞的完整性。

以上結果表明，本藥具有以下較明顯的藥理作用：(1)保護胃黏膜作用?？擅黠@降低急性損傷對模型動物胃黏膜損傷程度；(2)止血作用。減少因胃黏膜損傷引起的毛細血管破裂出血及血痂形成；(3)改善病損部位血液微循環(huán)障礙作用?？稍黾游葛つぱ┘罢{(diào)節(jié)胃黏膜血流的分布狀況，保護和重建黏膜微循環(huán)；(4)修復作用?？擅黠@減輕病損部位的病理損傷。

上述藥理作用為本藥治療和防護消化系統(tǒng)黏膜損傷、保障和重建局部微循環(huán)、加強血運供應、調(diào)節(jié)黏膜保護機制等功效提供了一定的實驗理論基礎。

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