冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者血清同型半胱氨酸與氧化高密度脂蛋白水平及其相關(guān)性研究

趙新秀，王仁萍，胡 松，賈韻平，毛擁軍

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(CAD)是威脅人類健康的主要疾病之一，目前對其危險(xiǎn)因素的探尋和防治已成為預(yù)防該疾病的重要手段。作為惟一保護(hù)因素的血脂指標(biāo)高密度脂蛋白(HDL)一旦發(fā)生氧化反應(yīng)生成氧化高密度脂蛋白(OX-HDL)，便將喪失逆轉(zhuǎn)膽固醇的作用，并可通過凝血、血小板聚集等多種途徑促進(jìn)動脈平滑肌細(xì)胞(SMC)增加，從而加速動脈粥樣硬化[1-2]，因此OX-HDL成為CAD患者不可忽視的血脂監(jiān)測指標(biāo)。另外，血清同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)可通過多種機(jī)制導(dǎo)致動脈粥樣斑塊形成，是近年來研究較活躍的新的CAD事件評估危險(xiǎn)因素[3]。目前國內(nèi)外對于CAD血清Hcy與OX-HDL水平之間關(guān)系的研究甚少。本研究以CAD患者為研究對象，探討血清Hcy與OX-HDL的水平及二者的相關(guān)性。

1 對象與方法

1.1 研究對象 (1)采用分層隨機(jī)抽樣方法，抽取2012年6月—2013年6月青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院特需保健科、心內(nèi)科行冠狀動脈造影被確診為CAD的患者115例為CAD組，按WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)中典型的臨床表現(xiàn)、心電圖、心肌酶學(xué)等檢查結(jié)果嚴(yán)格篩選患者；其中男65例，女50例；平均年齡(73.3±2.3)歲。選擇冠狀動脈造影正常者38例為對照組，其中男24例，女14例；平均年齡(69.3±11.9)歲。CAD組與對照組的性別構(gòu)成、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.517，P=0.300；t=0.93，P=0.350)。(2)依據(jù)2006年美國心臟協(xié)會(AHA)推薦，將血清Hcy水平>10 μmol/L定義為高同型半胱氨酸，將CAD患者分為Hcy正常組(28例)與Hcy異常組(87例)。Hcy正常組男17例，女11例；平均年齡(71.2±1.8)歲。Hcy異常組男48例，女39例；平均年齡(72.6±7.5)歲。Hcy正常組與Hcy異常組的性別構(gòu)成、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.265，P=0.386；t=1.12，P=0.270)。研究對象均簽署知情同意書，并排除急慢性感染、血液系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤、腦血管疾病、肝腎功能不全、自身免疫性疾病及服用激素等免疫抑制劑和維生素類藥物者。

1.2 研究方法 患者于入院次日清晨空腹10 h后抽取肘靜脈血2 ml，置于血清管中，以3 000 r/min離心15 min，離心半徑為13.5 cm，離心后取血清，并用離心管分裝置于-80 ℃冰箱中貯存待用。采用羅氏日立7600全自動生化分析儀測定血清三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、脂蛋白a(LP-a)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、尿酸(UA)、葉酸(FA)及維生素B12(VitB12)水平；血清Hcy、OX-HDL水平測定則采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒，嚴(yán)格按照說明書操作。

2 結(jié)果

2.1 兩組Hcy與OX-HDL水平的比較 CAD組血清Hcy、OX-HDL水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,見表1)。

2.2 Hcy正常組與Hcy異常組血脂指標(biāo)水平的比較 Hcy異常組HDL水平低于Hcy正常組，OX-HDL、LDL水平高于Hcy正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而兩組的TG、TC、LP-a水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見表2)。

2.3 CAD患者Hcy、OX-HDL的秩相關(guān)分析 分別以Hcy和OX-HDL為因變量，F(xiàn)A、VitB12、TC、TG、UA、HDL、LDL為自變量進(jìn)行Spearman秩相關(guān)分析，結(jié)果顯示CAD組Hcy與FA、VitB12呈負(fù)相關(guān)，OX-HDL 與FA呈負(fù)相關(guān)(P<0.05，見表3)；同時(shí)對Hcy、OX-HDL做相關(guān)性分析，結(jié)果顯示Hcy與OX-HDL呈正相關(guān)(r=0.772，P=0.000，見圖1)。

表1 兩組 Hcy與OX-HDL水平的比較〔M(QR)〕

注:CAD=冠狀動脈粥樣硬化性心臟病，Hcy=同型半胱氨酸，OX-HDL=氧化高密度脂蛋白

表2 Hcy正常組與Hcy異常組血脂指標(biāo)水平的比較〔M(QR)〕

注：TG=三酰甘油，TC=總膽固醇,LP-a=脂蛋白a，HDL=高密度脂蛋白，LDL=低密度脂蛋白

表3 CAD患者Hcy、OX-HDL的秩相關(guān)分析

注：FA=葉酸,VitB12=維生素B12，UA=尿酸

圖1 CAD患者血清Hcy與OX-HDL水平的相關(guān)性散點(diǎn)圖

Figure1 Scatter plot of correlation between serum Hcy and OX-HDL levels in CAD patients

2.4 CAD影響因素的多因素Logistic回歸分析 采用多因素Logistic回歸分析，以CAD為因變量，年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)(BMI)、2型糖尿病病史、高血壓病史OX-HDL、Hcy、UA、TG、TC、HDL、LDL、LP-a為自變量，采用逐步法篩查CAD的影響因素。結(jié)果顯示高血壓病史、OX-HDL、Hcy是CAD發(fā)生的危險(xiǎn)因素(見表4)。

3 討論

Hcy通過氧化應(yīng)激使血管內(nèi)皮功能發(fā)生障礙，直接導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷。此外,Hcy還可促使血管平滑肌細(xì)胞增殖,促進(jìn)炎性反應(yīng)，增加血小板的黏附性和聚集性,促進(jìn)血栓的發(fā)生和血管鈣化，導(dǎo)致凝血和纖溶異常等[4]；其還可通過促進(jìn)血脂紊亂導(dǎo)致動脈粥樣硬化。Hcy含有活性巰基，可形成二硫鍵使許多蛋白質(zhì)分子在

表4 CAD影響因素的多因素Logistic回歸分析

注：BMI=體質(zhì)指數(shù)

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)發(fā)生錯(cuò)誤折疊，從而使蛋白質(zhì)分子不能順利地從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)至高爾基復(fù)合體，也就不能分泌到細(xì)胞表面，而在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中大量聚集造成應(yīng)激狀態(tài)，而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可加劇心腦血管細(xì)胞脂質(zhì)調(diào)節(jié)紊亂。用氧化型HDL單克隆抗體或串聯(lián)質(zhì)譜法，均可在人體動脈粥樣硬化斑塊和CAD患者的血清中檢測到OX-HDL[5]。本研究OX-HDL的測定采用ELISA試劑盒，對照組和CAD組的OX-HDL水平分別為125.64(48.00)μg/L和198.29(48.38)μg/L，與Nakajima等[6]人的研究結(jié)果近似。體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)OX-HDL可減少巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、SMC中膽固醇的流出，并抑制其與HDL受體連接，與天然HDL相比，OX-HDL可使巨噬/泡沫細(xì)胞內(nèi)膽固醇及膽固醇酯的堆積增加[7]。另外OX-HDL還能通過凝血、纖溶、血小板聚集和活化途徑加速血栓形成、促進(jìn)SMC增殖、發(fā)生炎性反應(yīng)、導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損失[8]，從而加速動脈粥樣硬化的形成。本研究結(jié)果顯示，CAD組血清Hcy、OX-HDL水平均高于對照組，且多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示Hcy、OX-HDL是CAD發(fā)生的危險(xiǎn)因素。提示Hcy與OX-HDL可通過炎性反應(yīng)、氧化應(yīng)激、內(nèi)皮損傷、凝血異常等機(jī)制參與動脈粥樣硬化的形成。

研究證實(shí)，LDL在體內(nèi)可被多種機(jī)制氧化修飾，促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)生[4]。如血液循環(huán)中的Hcy發(fā)生自身氧化產(chǎn)生活性氧(ROS)，抑制NO的合成及其生物利用度[9]，使細(xì)胞膜上的LP-a發(fā)生氧化反應(yīng)，導(dǎo)致LDL被氧化成OX-LDL，OX-LDL被巨噬細(xì)胞吞噬，從而加速細(xì)胞內(nèi)膽固醇的聚集和泡沫細(xì)胞的形成[10]。近年來國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)具有抗動脈粥樣硬化作用的HDL同LDL一樣能被體內(nèi)外多種因素如脂加氧酶、髓過氧化物酶、超氧陰離子、NO、內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等氧化修飾，形成OX-HDL后不但喪失抗動脈粥樣硬化作用，反而有致動脈粥樣硬化的作用[11]。有研究者采用同位素稀釋液相質(zhì)譜/串聯(lián)質(zhì)譜研究發(fā)現(xiàn)，人動脈粥樣硬化病變存在OX-HDL，在CAD患者粥樣病變內(nèi)，HDL的 3-氯絡(luò)氨酸、3-硝絡(luò)氨酸[12-13]和氨甲酰賴氨酸[14]水平高于HDL水平，表面髓過氧化物酶(MPO)氧化人動脈壁內(nèi)的HDL。為探討HDL能否像LDL一樣被Hcy氧化成OX-HDL，本研究搜集115例CAD患者血清，檢測Hcy、OX-HDL水平并最終得出二者呈正相關(guān)，但其相關(guān)性是否能證明Hcy是致動脈粥樣硬化的機(jī)制之一及其具體機(jī)制還有待通過動物實(shí)驗(yàn)深入研究。同時(shí)本研究發(fā)現(xiàn)，CAD組Hcy與FA、VitB12呈負(fù)相關(guān)。OX-HDL 與FA呈負(fù)相關(guān)，提示補(bǔ)充FA、維生素對于降低Hcy、OX-HDL水平存在一定作用，但其具體機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，血清Hcy、OX-HDL是CAD的危險(xiǎn)因素，可發(fā)揮疾病診斷和病情評估作用，并且二者在CAD中存在相關(guān)性，可為今后探究OX-HDL的產(chǎn)生及致病機(jī)制提供線索。另外，熊向暉[9]和戴瑞等[10]的相關(guān)研究得出Hcy與冠狀動脈病變嚴(yán)重程度相關(guān)，因此，對于今后的研究還有待于采用Gensini積分評價(jià)冠狀動脈病變程度，比較不同Gensini積分患者血清Hcy水平，探討Hcy水平評價(jià)動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性及疾病嚴(yán)重程度的價(jià)值。本研究由于從外周靜脈采血，可能不能充分反映CAD患者冠狀動脈內(nèi)各類因子的變化，如果經(jīng)冠狀竇采血可能更為準(zhǔn)確；并且由于觀察時(shí)間較短，樣本量不足，故今后將進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行深入研究；鑒于研究對象為CAD患者且為研究初級階段，因此尚待進(jìn)行Hcy、OX-HDL的相關(guān)因子受體拮抗劑干預(yù)試驗(yàn)。

1 Young CE,Karas RH,Kuvin JT.High-density lipoprotein cholesterol and coronary heart disease[J].Cardiology in Review,2004,12(2):107-119.

2 Honda H,Ueda M,Kojima S,et al.Oxidized high-density lipoprotein as a risk factor for cardiovascular events in prevalent hemodialysis patients[J].Atherosclerosis，2012，220(2):493-501.

3 Di Minno MN,Tremoli E,Coppola A，et al.Homocysteine and arterial thrombosis：challenge and opportunity[J].Thromb Haemost，2010，103(5):942-961.

4 Oudi ME,Aouni Z,Mazigh C,et al.Homocysteine and markers of inflammation in acute coronary syndrome[J].Experimental & Clinical Cardiology,2010,15(2):e25-28.

5 Shao B,Pennathur S,Heinecke JW.Myeloperoxidase targets apolipoprotein AI,the major high density lipoprotein protein,for site-specific oxidation in human atherosclerotic lesions[J].Journal of Biological Chemistry,2012,287(9):6375-6386.

6 Nakajima T,Matsunaga T,Kawai SI,et al.Characterization of the epitopes specific for the monoclonal antibody 9F5-3a and quantification of oxidized HDL in human plasma[J].Annals of Clinical Biochemistry,2004,41(4):309-315.

7 Rifici VA,Khachadurian AK.Effects of dietary vitamin C and E supplementation on the copper mediated oxidation of HDL and on HDL mediated cholesterol efflux[J].Atherosclerosis,1996,127(1):19-26.

8 張艷林,曹勇軍,尤壽江，等.自噬對氧化低密度脂蛋白損傷內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2010,90(39):2792-2796.

9 熊向暉.同型半胱氨酸與急性冠狀動脈綜合征的關(guān)系探討[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2011,17(17):2-4.

10 戴瑞,張良良,孟憲杰.血漿同型半胱氨酸和 N-末端腦鈉肽水平與急性冠脈綜合征冠狀動脈病變嚴(yán)重程度的相關(guān)性研究[J].中國全科醫(yī)學(xué),2012,15(6):1935-1937.

11 朱岫芳.高同型半胱氨酸血癥是否干預(yù),如何干預(yù)?[J].中國全科醫(yī)學(xué),2013,16(2):1940-1942.

12 Shao B,Heinecke JW.Impact of HDL oxidation by the myeloperoxidase system on sterol efflux by the ABCA1 pathway[J].Journal of Proteomics,2011,74(11):2289-2299.

13 Shao B,Oda MN,Oram JF,et al.Myeloperoxidase:an oxidative pathway for generating dysfunctional high-density lipoprotein[J].Chemical Research in Toxicology,2009,23(3):447-454.

14 Holzer M,Gauster M,Pfeifer T,et al.Protein carbamylation renders high-density lipoprotein dysfunctional[J].Antioxidants & Redox Signaling,2011,14(12):2337-2346.