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    秦巴山區(qū)柿葉中揮發(fā)性成分及抗氧化性研究

    2014-01-28 00:52:32豆佳媛王奇馮鞏
    食品研究與開(kāi)發(fā) 2014年15期
    關(guān)鍵詞:柿葉柿樹(shù)揮發(fā)油

    豆佳媛,王奇,馮鞏

    (陜西理工學(xué)院 化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,陜西漢中723000)

    柿葉為雙子葉柿樹(shù)科(Ebenanceae) 柿樹(shù)屬(Diospyros)植物柿(Diospyros kaki L.f.)的葉。柿樹(shù)為常綠或落葉喬木或灌木,主要生長(zhǎng)在熱帶和溫帶,約有6 屬450種,其中我國(guó)有柿樹(shù)2 屬50 多種,栽培面積約2.0×105hm2,產(chǎn)量占世界總產(chǎn)量的50%以上,是世界上最主要的柿樹(shù)生產(chǎn)國(guó)。柿樹(shù)在我國(guó)已2000 多年的栽培歷史,也是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)樹(shù)種之一。柿葉中含有豐富的維生素C、黃酮、蘆丁、多種氨基酸及鐵、鋅、鈣等對(duì)人體有益的營(yíng)養(yǎng)成分,具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和醫(yī)療保健作用。目前,我國(guó)柿葉開(kāi)發(fā)的產(chǎn)品種類(lèi)較少,品質(zhì)低。最成功的是在柿葉茶制備技術(shù)的研究上。關(guān)于柿葉化學(xué)成分的研究報(bào)道較少,其揮發(fā)性成分及生物活性的研究國(guó)內(nèi)外更少有報(bào)道,而且主要集中在揮發(fā)油提取工藝和化學(xué)成分分析研究上[1-5]。近年來(lái)的研究表明柿葉具有明顯的抗氧化作用。石錦芹等[6-7]的研究表明,柿葉無(wú)水甲醇提取物對(duì)豬油的抗氧化作用較強(qiáng),優(yōu)于柿葉無(wú)水乙醇提取物、體積分?jǐn)?shù)70%甲醇提取物和體積分?jǐn)?shù)70%乙醇提取物;而柿葉水提取物的抗氧化作用不明顯。用不同溶劑提取的柿葉提取物的抗氧化性能不同。馬希漢等[8]研究認(rèn)為,柿葉的石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇提取物均有很強(qiáng)的抗氧化作用,而以石油醚提取物抗氧化作用最強(qiáng)。對(duì)上述各類(lèi)提取物中有效成分的系統(tǒng)分析還未見(jiàn)到報(bào)道。為了開(kāi)發(fā)利用柿葉,本文僅報(bào)道作者對(duì)其脂溶性揮發(fā)性成分用GC/MS/DS 聯(lián)用技術(shù)分離鑒定及相對(duì)含量的測(cè)定結(jié)果,并進(jìn)行了抗氧化活性的研究。

    1 實(shí)驗(yàn)部分

    1.1 儀器和試劑

    GC6890N/MSD5973N 色質(zhì)聯(lián)用儀:美國(guó)安捷倫公司;PDP11/24 計(jì)算機(jī)及11/250 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng);UV-6系列紫外可見(jiàn)分光光度計(jì):上海美普達(dá)儀器有限公司;FW100型高速萬(wàn)能粉碎機(jī):天津泰斯特儀器有限公司;101 型電熱鼓風(fēng)干燥箱:北京科偉永興儀器有限公司。

    經(jīng)過(guò)處理的無(wú)水乙醚、石油醚、氯化鈉、無(wú)水硫酸鈉、鄰二氮菲、硫酸亞鐵、過(guò)氧化氫、磷酸二氫鈉、磷酸氫鈉等試劑均為分析純。

    1.2 樣品及揮發(fā)性成分的提取

    被分析的柿葉取自秦巴山區(qū)(5月初的鮮葉)用自來(lái)水將鮮柿葉洗凈、風(fēng)干、粉碎,取300 g 放入索氏提取器用石油醚提取,減壓濃縮后,在100 mL 燒瓶?jī)?nèi),加水至瓶1/2 高處使試樣完全浸透后進(jìn)行蒸餾,蒸至餾出物無(wú)味為止。蒸出物中加入25 g/L 的氯化鈉水溶液以提高萃取率[9],萃取3 次,用無(wú)水硫酸鈉除去萃取液中的水,揮發(fā)乙醚后得到黃綠色揮發(fā)油,有較濃的清香味,待用。

    1.3 GC/MS 分析

    測(cè)試條件:GC 汽化室溫度250 ℃,HP-5(30 m×0.32 mm×0.25 μm)彈性石英毛細(xì)管柱,50 ℃恒溫2 min,然后以4 ℃/min 的升溫速率由80 ℃程序升溫至290 ℃,恒溫30 min,載氣為99.999%高純氦。

    MSD 離子源為EI 源,離子源溫度230 ℃,電子能量70 eV;使用美國(guó)NIST05 譜庫(kù)。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 脂溶性揮發(fā)性成分

    柿葉的揮發(fā)油,經(jīng)氣相色譜質(zhì)譜分離出26 個(gè)組分,見(jiàn)表1。

    經(jīng)氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)揮發(fā)性物質(zhì)進(jìn)行分離和鑒定,運(yùn)用氣相色譜面積歸一化法確定各組分的相對(duì)含量,分離出26種組分,鑒定出26 中化合物,其中有21種含氧化合物,其在揮發(fā)性成分中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為84.237%。以4-甲基-2.6-二特丁基苯酚(39.967%)、植烯醇(6.831%)、2-甲氧基-3-丙烯基-苯酚(4.578%)為主。這26 個(gè)組分中,酚類(lèi)物質(zhì)有5種,酮類(lèi)物質(zhì)有4種,酸類(lèi)物質(zhì)有4種,醛類(lèi)物質(zhì)有2種,酯類(lèi)物質(zhì)有1種,醇類(lèi)物質(zhì)有1種,其中酚類(lèi)物質(zhì)相對(duì)含量為44.915%,是柿葉揮發(fā)油的主要成分,說(shuō)明柿葉揮發(fā)油具有較強(qiáng)的抗氧化作用。

    表1 柿葉中揮發(fā)油組分分析Table1 The components analysis of volatile oils in Persimmon leaves

    2.2 體外·OH 自由基清除作用考察

    用鄰二氮菲-Fe2+氧化法[9]測(cè)定Fe2+/ H2O2體系中·OH 自由基清除率。準(zhǔn)確稱(chēng)取柿葉揮發(fā)油0.087 g,用蒸餾水配制成0.18g/L 的柿葉揮發(fā)油溶液,取6 只已編號(hào)的25 mL 容量瓶,分別加入0.75 mmol/L 鄰二氮菲溶液1.0 mL,pH 7.4 的0.2 mol/L PBS(磷酸鹽緩沖液)1.5 mL,混合均勻,分別加入0.75 mmol/L 新配置的硫酸亞鐵溶液1.0 mL,向1~6 號(hào)量瓶中分別加入0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL 柿葉揮發(fā)油溶液,搖勻,再向每只量瓶中加入新配制的0.01 % H2O2溶液1 mL,另取2只25 mL 量瓶并分別標(biāo)記為損傷管和未損傷管,這2 只量瓶中均不加柿葉揮發(fā)油溶液,且在損傷管中加入0.01%H2O2溶液1 mL,未損傷管不加H2O2,用蒸餾水將8 只容量瓶定容到至刻度,充分搖勻,于37 ℃恒溫水浴中培養(yǎng)60 min,取出,冷卻至室溫,于512 nm 測(cè)定吸光度(n=3)。按下式計(jì)算·OH 自由基清除率(I)。

    式中:A2為柿葉揮發(fā)油溶液的吸光度;A1為未損傷溶液的吸光度;A0為損傷溶液的吸光度。繪制柿葉揮發(fā)油質(zhì)量濃度-清除率曲線(xiàn)見(jiàn)圖1。

    圖1 柿葉揮發(fā)油對(duì)體外·OH 自由基清除作用曲線(xiàn)Fig.1 Volatile oils in persimmon leaves of·OH radical scavenging effect in vitro

    由圖1可知,柿葉揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)H2O2/Fe2+體系通過(guò)Fenton 反應(yīng)產(chǎn)生的·OH 自由基有明顯的清除作用,且隨著揮發(fā)油濃度的增加呈明顯的上升趨勢(shì),當(dāng)濃度為0.008 6 g/L 時(shí),體外·OH 自由基清除率達(dá)44.95%,充分說(shuō)明了柿葉揮發(fā)性物質(zhì)具有較強(qiáng)的抗氧化活性。

    3 結(jié)論

    用GC/MS/DS 聯(lián)用技術(shù)測(cè)定對(duì)秦巴山區(qū)五月份柿葉用石油醚提取、水蒸氣蒸餾提取其中脂溶性揮發(fā)性化學(xué)成分進(jìn)行分離和鑒定,運(yùn)用氣相色譜面積歸一化法確定各組分的相對(duì)含量。分離出26種組分,鑒定出26 中化合物,其中有21種含氧化合物,其在揮發(fā)性成分中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為84.237%。以4-甲基-2.6-二特丁基苯酚(39.967%)、植烯醇(6.831%)、2-甲氧基-3-丙烯基-苯酚(4.578%)為主。同時(shí)對(duì)其抗氧化活性進(jìn)行考察。柿葉中揮發(fā)油對(duì)Fe2+/H2O2體系·OH 基自由基的清除作用,隨著加入量的增加,清除率呈明顯的上升趨勢(shì),當(dāng)達(dá)到一定濃度時(shí),其對(duì)·OH 自由基的清除率基本保持不變。清除率和柿葉中揮發(fā)性物質(zhì)用量存在一定的量效關(guān)系,均可以說(shuō)明柿葉中揮發(fā)油具有很強(qiáng)的抗氧化性。該研究尚屬首例,為進(jìn)一步柿葉的利用提供理論支撐,柿葉的其他生物活性實(shí)驗(yàn)和開(kāi)發(fā)利用還有待研究。

    [1] 安秋榮,郭志峰.柿葉揮發(fā)成分的GC/MS 分析[J].河北大學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,1999,19(3):256-259

    [2] 紀(jì)莉蓮,張強(qiáng)華,崔桂友.柿葉抗菌活性的研究及活性成分的分離鑒定[J].食品科學(xué),2003,24(3):129-131

    [3] 柯范生,林嬌芬,林河通.安溪油柿葉的營(yíng)養(yǎng)成分分析與評(píng)價(jià)[J].包裝與食品機(jī)械,2009,27(1):26-28

    [4] 林嬌芬,林河通,謝聯(lián)輝,等.柿葉的化學(xué)成分、藥理作用、臨床應(yīng)用及開(kāi)發(fā)利用[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2005,31(7):90-96

    [5] 張穎,岳紅,趙曉麗.水蒸氣蒸餾法提取柿葉精油的工藝研究[J].林產(chǎn)化工通訊,2004,38(6):26-29

    [6] 石錦芹,胡小峰,郭開(kāi)宇.柿葉黃酮粗提物抗氧化作用的研究[J].中國(guó)畜產(chǎn)與食品,1999,6(3):128-129

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    [8] 馬希漢,尉芹.柿葉抗氧化作用的研究[J].西北林學(xué)院學(xué)報(bào),2000,15(2):41-44

    [9] 金鳴,蔡亞欣,李金榮,等.鄰二氮菲-Fe2+氧化法檢測(cè)H2O2/Fe2+產(chǎn)生的羥基自由基[J].生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展,1996,23(6):553

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