基于CAMKⅡ信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑研究脾虛證軀體泛化效應(yīng)的方法與思路

段永強(qiáng) 程衛(wèi)東 成映霞 楊曉軼 李蘭珍 安耀榮 田 茸 王 燕

(蘭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合研究所，甘肅 蘭州 730020)

既往基礎(chǔ)及臨床研究表明〔1～14〕，脾虛證的發(fā)生涉及多系統(tǒng)、多組織、多器官的功能紊亂，即脾虛證的臨床癥候特點(diǎn)主要表現(xiàn)為以消化系統(tǒng)功能紊亂，旁及免疫、神經(jīng)、內(nèi)分泌、循環(huán)、運(yùn)動系統(tǒng)相關(guān)生理功能的紊亂，故基于中醫(yī)學(xué)“整體觀念”和“五臟一體觀”的理論，筆者認(rèn)為脾虛證臨床癥候的發(fā)生可呈現(xiàn)出軀體泛化趨勢，即“脾虛證軀體泛化效應(yīng)”模式。這種模式亦與目前倡導(dǎo)的生命系統(tǒng)觀以及細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)理論的觀點(diǎn)相符合，即生命現(xiàn)象(生理活動和病理狀態(tài))的發(fā)生實(shí)際上都是機(jī)體細(xì)胞內(nèi)外信號傳遞的結(jié)果，而假藉細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究脾虛證軀體泛化效應(yīng)的發(fā)生具有一定的可行性。

1 中醫(yī)學(xué)關(guān)于“脾”生理功能的認(rèn)識

中醫(yī)學(xué)歸納“脾(胃)”的功能包括主司運(yùn)化、主統(tǒng)血、主肌肉四肢，為氣血生化之源、后天之本，其功能不僅涵蓋了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)所論的消化系統(tǒng)，而且與神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫、運(yùn)動等系統(tǒng)生理功能密切相關(guān)。其理論基礎(chǔ)可溯及《黃帝內(nèi)經(jīng)》所論“脾為孤臟，中央土以灌四傍”；“四肢皆稟氣于胃，而不得至經(jīng)，必因于脾乃得稟也”；“脾主為胃行其津液者也”；“脾主身之肌肉”；再如《靈樞·營衛(wèi)生會篇》云：“人受氣于谷，谷入于胃，以傳與肺，五藏六腑，皆以受氣”；《難經(jīng)·三十難》云：“人受氣于谷，谷入于胃，乃傳于藏六腑，五藏六腑皆以受于氣”；《衛(wèi)生寶鑒·勞倦所傷虛中有寒》云：“胃者衛(wèi)之源，脾者榮之本”……以上文獻(xiàn)強(qiáng)調(diào)“脾(胃)”為氣血生化之源，五藏六腑、四肢百骸皆依賴脾胃氣血而發(fā)生各自的功能。脾(胃)的功能正常，則諸臟腑功能亦能正常發(fā)揮。

2 中醫(yī)學(xué)關(guān)于“脾虛證”及“脾虛證軀體泛化效應(yīng)”的認(rèn)識

中醫(yī)經(jīng)典理論和文獻(xiàn)所記載的“脾病”(脾虛證)可影響多系統(tǒng)、多組織、多器官的功能紊亂或失常。如《素問·藏氣法時(shí)論》云：“脾病者，身重，善饑肉痿，足不收行，善瘈，腳下痛。虛則腹?jié)M，腸鳴飧泄，食不化?！薄端貑枴ぬ庩柮髡撈吩疲骸敖衿⒉〔荒転槲感衅浣蛞?，四支不得稟水谷氣，氣日以衰，脈道不利，筋骨肌肉，皆無氣以生，故不用焉”；《靈樞·本神》云：“脾藏營，營舍意，脾氣虛則四肢不用，五臟不安，實(shí)則腹脹經(jīng)溲不利。”《脈經(jīng)》卷二：“脾虛，……病苦泄注，腹?jié)M，氣逆，霍亂，嘔吐，黃疸，心煩不得臥，腸鳴?！薄妒?jì)總錄》卷四十四：“脾氣……若虛則生寒，令人心腹脹滿，水谷不消，噫氣吞酸，食輒嘔吐，霍亂泄利，四肢沉重，多思?xì)饨Y(jié)，惡聞人聲”……尤其是金·李杲《脾胃論·脾胃虛實(shí)傳變論》倡“脾胃之氣既傷，而元?dú)庖嗖荒艹洌T病之所由生也”，并結(jié)合內(nèi)經(jīng)理論明確提出“內(nèi)傷脾胃，百病由生”的學(xué)術(shù)論點(diǎn)，對脾胃病機(jī)學(xué)說的發(fā)展和后世醫(yī)家從脾胃論治諸病具有重大的啟發(fā)和指導(dǎo)。

中醫(yī)證候?qū)W歸納“脾虛”主證包括：腹脹納少，食后脹甚，肢體倦怠，神疲乏力，少氣懶言，形體消瘦，或肥胖水腫，體虛怕冷，舌苔淡白，而臨床通過應(yīng)用益氣健脾方藥干預(yù)治療可顯著改善或消除上述諸癥。

綜上所述，脾虛證是以消化吸收功能障礙為主要表現(xiàn)的神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫、運(yùn)動等系統(tǒng)調(diào)節(jié)紊亂、營養(yǎng)物質(zhì)代謝低下的虛損性疾病狀態(tài)，是多系統(tǒng)和多器官功能衰弱的綜合病理變化〔14〕?；谝陨掀⒌墓δ芎推⑻撟C的證候基礎(chǔ)及臨床證候特點(diǎn)，筆者提出了“脾虛證軀體泛化效應(yīng)”的證候模式和研究假說。但這種“脾虛證軀體泛化效應(yīng)”發(fā)生的內(nèi)在共同機(jī)制究竟如何？其中有無共同的發(fā)生信號通路或物質(zhì)基礎(chǔ)? 這是需要借助現(xiàn)代醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)技術(shù)及細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)理論來開展研究，以期深刻揭示脾虛證的發(fā)生機(jī)制。

3 基于細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)理論研究“脾虛證軀體泛化效應(yīng)”的可行性

在細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中，其中有鈣調(diào)蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。鈣調(diào)蛋白(CaM)是一種依賴于Ca2+的蛋白，Ca2+的多數(shù)生理作用是通過Ca2+與鈣調(diào)蛋白形成復(fù)合物才實(shí)現(xiàn)的〔15〕。CaM是細(xì)胞內(nèi)Ca2+的重要受體，傳遞鈣離子對各種細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)信息，為細(xì)胞信號傳遞的重要物質(zhì)?，F(xiàn)已證明Ca2+-CaM信號通路廣泛存在于多種真核細(xì)胞內(nèi)，Ca2+的許多功能如物質(zhì)代謝、肌肉收縮、突觸傳遞、神經(jīng)遞質(zhì)的合成與釋放、激素分泌、細(xì)胞生長和基因表達(dá)等都是通過CaM信號轉(zhuǎn)導(dǎo)完成的。

CaM發(fā)揮生物學(xué)功能主要是CaM以Ca2+-CaM復(fù)合物形式參與調(diào)節(jié)〔16〕。CaM作為細(xì)胞內(nèi)Ca2+受體可與Ca2+可逆性結(jié)合。Ca2+通過與CaM結(jié)合，激活Ca激酶(Ca2+-CaM依賴的蛋白激酶)發(fā)揮作用。CaM牽連許多細(xì)胞內(nèi)過程，包括轉(zhuǎn)錄控制、離子流動、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)和細(xì)胞復(fù)雜功能。其主要有以下幾個(gè)方面生物學(xué)功能：①調(diào)節(jié)細(xì)胞各種酶的活性；②調(diào)節(jié)肌肉收縮和舒張(包括心肌、骨骼肌和平滑肌)；③調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)功能，包括神經(jīng)遞質(zhì)的合成與釋放、突觸傳遞、軸漿運(yùn)輸及腦內(nèi)蛋白質(zhì)的磷酸化；④參與刺激分泌耦聯(lián)及調(diào)節(jié)糖代謝；⑤調(diào)節(jié)前列腺素、胰島素的合成與釋放；⑥增強(qiáng)大腦長期記憶的作用等。這不但說明CaM信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及其信息分子在機(jī)體多系統(tǒng)多臟器生理功能的正常發(fā)揮中具有重要的生物學(xué)作用，而且與中醫(yī)“脾”主司運(yùn)化、主統(tǒng)血、在體合肌肉主四肢、脾在志為思等功能具有一定相關(guān)性。

研究表明鈣離子/CaM依賴蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)是一種多功能CaM激酶，可被細(xì)胞內(nèi)激活，進(jìn)而發(fā)揮生理效應(yīng)，二者均是胃泌素受體后關(guān)鍵的信號物質(zhì)。已有研究表明脾虛證壁細(xì)胞胃泌素受體結(jié)合位點(diǎn)數(shù)下調(diào)〔17，18〕，受體后信號物質(zhì)細(xì)胞內(nèi)鈣離子在靜息狀態(tài)和胃泌素的刺激狀態(tài)下均有異常變化〔19〕。另有隋峰等〔20，21〕開展了補(bǔ)中益氣湯、黨參、白術(shù)含藥血清對脾虛大鼠壁細(xì)胞胞內(nèi)Ca2+/CaM活性的影響，研究表明脾虛大鼠壁細(xì)胞胞內(nèi)Ca2+/CaM活性的增高可能是脾虛大鼠的深層次病理機(jī)制之一。以上國內(nèi)學(xué)者的研究表明，CaM信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中Ca2+/CaM信號分子在消化系統(tǒng)功能紊亂或障礙的發(fā)生中具有重要的作用，但有關(guān)脾虛證進(jìn)程中機(jī)體其他系統(tǒng)組織器官功能紊亂或障礙時(shí)，CaM信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑所發(fā)揮的作用卻少有研究，此細(xì)胞信號通訊機(jī)制和轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑如何在“脾虛證軀體泛化效應(yīng)”進(jìn)程中發(fā)生作用?是需要通過科學(xué)研究來證實(shí)。

4 小結(jié)與展望

本課題組基于“脾虛”可導(dǎo)致多系統(tǒng)、多臟腑的功能紊亂，即脾虛證可引起胃腸動力障礙、消化吸收異常、體倦乏力、失眠健忘、基礎(chǔ)代謝下降等軀體泛化效應(yīng)為設(shè)計(jì)思路，結(jié)合既往工作基礎(chǔ)，提出“CAMKⅡ信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在脾虛證軀體泛化效應(yīng)中的可能作用機(jī)制”工作假說，擬從CAMKⅡ信號途徑關(guān)鍵分子角度揭示脾虛證軀體泛化效應(yīng)的發(fā)生機(jī)制以及益氣健脾法干預(yù)脾虛泛化效應(yīng)的作用機(jī)制和科學(xué)內(nèi)涵，而且基于細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)理論探索脾虛證軀體泛化效應(yīng)的發(fā)生機(jī)制，實(shí)質(zhì)上是一種微觀和宏觀相結(jié)合的新型研究方法，應(yīng)用這種方法進(jìn)行研究，可將中醫(yī)藏象理論和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)細(xì)胞分子生物學(xué)相結(jié)合，有助于闡明中醫(yī)脾虛證及軀體泛化效應(yīng)的科學(xué)內(nèi)涵，進(jìn)一步為臨床辨治脾虛證軀體泛化效應(yīng)及臨床癥狀提供有效指導(dǎo)；亦為研究中醫(yī)五臟一體觀探索研究思路和研究方法。如果基于細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路能尋找到中醫(yī)藥治療脾虛證及脾虛證軀體泛化效應(yīng)的作用藥靶部位，將為加快研發(fā)治療脾虛證的有效中醫(yī)復(fù)方制劑提供科學(xué)依據(jù)，并為二次開發(fā)健脾類優(yōu)勢中成藥的關(guān)鍵技術(shù)提供理論支撐。

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