五味子粗多糖與順鉑抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的作用

溫 娜 唐澤波 金 宏 田 晶 王瑋瑤 齊 玲 于洪泉

(吉林醫(yī)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心，吉林 吉林 132013)

腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)的原發(fā)性腫瘤，惡性程度高，約占顱內(nèi)腫瘤的45%〔1〕。目前在全球范圍內(nèi)呈上升趨勢(shì)，復(fù)發(fā)率、死亡率高和治愈率低是其顯著特點(diǎn)。目前尚無(wú)根治方法〔2〕。因此，如何有效地控制甚至治愈膠質(zhì)瘤仍是亟待解決的難題。五味子粗多糖(FSP)是從五味子干燥成熟果實(shí)中提取的總多糖，具有保肝、抗疲勞、抗衰老、增強(qiáng)免疫等功效〔3〕，但對(duì)腦腫瘤的治療作用少有研究。本實(shí)驗(yàn)旨在研究FSP作用于腦膠質(zhì)瘤SHG-44細(xì)胞后發(fā)生的效應(yīng)，以及該藥協(xié)同常規(guī)化療藥物順鉑作用細(xì)胞后的反應(yīng)，為臨床治療腫瘤提供新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1細(xì)胞株 SHG-44細(xì)胞(由吉林大學(xué)第一醫(yī)院神經(jīng)外科提供)。

1.2主要試劑 細(xì)胞培養(yǎng)基RPMI-1640 (Thermo公司)、小牛血清、0.25%胰酶(美國(guó)Gibco公司)，F(xiàn)SP(北華大學(xué)提供)，順鉑(阿拉丁公司，中國(guó))，四甲基偶氮唑(MTT)(Sigma公司)，二甲基亞砜(DMSO)(Thermo公司)。

1.3SHG-44細(xì)胞的培養(yǎng) 將配制好的RPMI-1640培養(yǎng)基置于培養(yǎng)箱中預(yù)熱，自-80℃冰箱中取出腦膠質(zhì)瘤SHG-44細(xì)胞，迅速置于37℃水浴箱中復(fù)蘇，然后將細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶中，加入10 ml含10%小牛血清的RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液，將其置入37℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，待80%～90%融合時(shí)進(jìn)行傳代。

1.4MTT法檢測(cè)FSP對(duì)SHG-44細(xì)胞的作用 將FSP用含5%小牛血清RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液溶解后，配制成終濃度為0、200、400、800 μg/ml的含藥培養(yǎng)基。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的腦膠質(zhì)瘤SHG-44細(xì)胞，胰酶消化后，用含5%小牛血清RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為6×103/ml。將細(xì)胞懸液均勻接種于96孔板中，100 μl/孔，置入37℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，使細(xì)胞同步化。棄去上清液，加入含不同濃度FSP的培養(yǎng)基，每個(gè)濃度重復(fù)5次。作用48 h時(shí)，加入MTT 20 μl/孔，37℃繼續(xù)孵育4 h，棄上清液，加DMSO 150 μl/孔，震蕩均勻使MTT沉淀完全溶解，15 min后在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔吸光度(A)值，用不加細(xì)胞的空白孔調(diào)零。

1.5MTT法檢測(cè)FSP聯(lián)合順鉑對(duì)SHG-44細(xì)胞的影響 將細(xì)胞以6×103個(gè)/孔接種于96孔板培養(yǎng)24 h后，將細(xì)胞分為4組，分別為FSP組(200 μg/ml)，順鉑組(10 μg/ml)，聯(lián)合用藥組(FSP 200 μg/ml +順鉑10 μg/ml)，對(duì)照組使用基礎(chǔ)培養(yǎng)液。余下步驟同前。

2 結(jié) 果

2.1FSP對(duì)SHG-44細(xì)胞增殖的抑制作用 不同濃度FSP作用SHG-44細(xì)胞后，均可以抑制細(xì)胞的增殖， 與空白對(duì)照組(1.43±0.03)相比，200 μg/ml FSP組(1.04±0.04)細(xì)胞增殖明顯受抑制(P<0.05)，而400 μg/ml組(0.72±0.04)和800 μg/ml FSP組(0.65±0.03)細(xì)胞增殖受抑制更加明顯(P<0.01)，并且藥物對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用具有明顯的濃度依賴(lài)性。

2.2FSP聯(lián)合順鉑抑制SHG-44細(xì)胞的增殖 SHG-44細(xì)胞經(jīng)FSP單獨(dú)或與順鉑聯(lián)合作用，MTT檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，順鉑與FSP單獨(dú)作用均可以明顯抑制細(xì)胞的增殖作用(A值0.83±0.04,0.81±0.03)，與空白對(duì)照組(1.37±0.04)比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；當(dāng)FSP與順鉑聯(lián)合作用時(shí)，與空白對(duì)照組比較，抑制增殖作用更加明顯(A值0.69±0.02)(P<0.01)，與FSP組比較，也明顯抑制細(xì)胞的增殖作用(P<0.05)。

3 討 論

腦膠質(zhì)瘤是最常見(jiàn)的顱內(nèi)惡性腫瘤，發(fā)病率和死亡率都很高，病程難以控制，目前治療方案仍然是手術(shù)切除輔以放療和化療等綜合治療為主。但腫瘤呈高度浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，與腦組織無(wú)明顯分界，手術(shù)無(wú)法全切，放療很難完全確定靶區(qū)，化療極易出現(xiàn)耐藥性，因此導(dǎo)致患者最終死亡，具有較高的致死率〔4,5〕。異常過(guò)度增殖是腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞最主要的區(qū)別，因此抑制腫瘤細(xì)胞增殖是抗腫瘤治療的一個(gè)重要環(huán)節(jié)〔6〕。

中藥五味子是長(zhǎng)白山特色中藥，具有產(chǎn)量大、毒性低的特點(diǎn)〔7〕，藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，五味子具有包括抗腫瘤作用在內(nèi)的多種活性作用〔8～11〕。本研究結(jié)果與此前的研究結(jié)果一致〔12〕。提示FSP可以有效抑制腦腫瘤細(xì)胞的增殖。

順鉑是臨床上腫瘤常規(guī)化療藥物之一，長(zhǎng)期使用可對(duì)人體造成嚴(yán)重毒副反應(yīng)和耐藥反應(yīng)〔13〕。本研究結(jié)果提示FSP聯(lián)合順鉑可以更加有效地抑制腦腫瘤細(xì)胞的增殖，兩者可以發(fā)揮協(xié)同作用。

本實(shí)驗(yàn)有力證實(shí)了FSP聯(lián)合化療藥物順鉑可以加強(qiáng)藥物的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用，但機(jī)制尚不明確。聯(lián)合用藥是否可以降低順鉑的用量，在降低毒副作用的同時(shí)達(dá)到最佳治療效果，這些都有待于進(jìn)一步研究。總之，F(xiàn)SP具有抗腫瘤作用，對(duì)其深入的研究將有助于腫瘤的預(yù)防和治療。

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