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      亳菊總黃酮類的抗氧化活性研究

      2014-01-25 13:58:17徐志南
      中國(guó)醫(yī)藥指南 2014年29期
      關(guān)鍵詞:過(guò)氧化黃酮類亞硝酸鹽

      徐志南

      (江蘇省濱??h五汛鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院,江蘇 濱海 224532)

      亳菊總黃酮類的抗氧化活性研究

      徐志南

      (江蘇省濱??h五汛鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院,江蘇 濱海 224532)

      目的研究亳菊總黃酮類的抗氧化活性。方法采用乙醇提取法,提取毫菊中的總黃酮類,以羥基自由基、FeSO4、亞硝酸鹽為材料,采用Fenton法測(cè)定亳菊總黃酮類對(duì)OH-、Fe2+、亞硝酸鹽清除率的影響;以卵黃脂蛋白脂質(zhì)為材料,采用Decker法測(cè)定亳菊總黃酮類對(duì)卵黃脂蛋白脂質(zhì)的抑制作用的影響。結(jié)果亳菊總黃酮類對(duì)OH-、Fe2+、亞硝酸鹽的清除作用隨亳菊總黃酮類濃度的升高而增強(qiáng),對(duì)卵黃脂蛋白脂質(zhì)過(guò)氧化也有顯著的抑制作用并隨亳菊總黃酮類濃度升高而增強(qiáng)。結(jié)論亳菊總黃酮類化合物具有很好的抗氧化能力。

      亳菊;總黃酮類;抗氧化活性;清除率

      菊花為我國(guó)傳統(tǒng)用藥,其“苦、辛,微寒”,具有“清熱解毒、平肝”之功效[1]。菊花中主要含萜類和揮發(fā)油、黃酮類化合物等生物活性物質(zhì)?,F(xiàn)代研究表明,菊花黃酮具有廣譜抗菌、抗病毒、降壓、增加冠脈血流量、清除活性氧自由基等生理活性。亳菊(C. morifolium Ramat‘Boju’)主產(chǎn)于安徽亳州市辛集、大寺、十九里鎮(zhèn)等地,為藥用菊花的主要來(lái)源之一,充分開發(fā)利用亳菊中的黃酮類成分具有十分重要的現(xiàn)實(shí)經(jīng)濟(jì)意義。本研究通過(guò)乙醇提取法,提取毫菊中的總黃酮類,采用Fenton和Decker法測(cè)定亳菊總黃酮類對(duì)羥基自由基、FeSO4、亞硝酸鹽的清除作用和對(duì)卵黃脂蛋白脂質(zhì)的抑制作用的影響,旨在為深入開展亳菊總黃酮類研究、拓寬亳菊綜合利用途徑奠定理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

      1 材料與方法

      1.1 實(shí)驗(yàn)材料:①材料:亳菊是購(gòu)買于太和縣醫(yī)藥公司。②主要儀器:HH-1數(shù)顯恒溫水浴鍋;紫外燈;FA/JA電子天平;UV-757CRT型紫外可見分光光度計(jì);微量定量移液器。③主要試劑:蘆?。皇兔?;乙醇;三氯化鋁;氫氧化鈉;硝酸鋁;亞硝酸鈉均為分析純。

      1.2 方法:①Fe2+清除率測(cè)定:在各試管中加入不同質(zhì)量濃度的亳菊總黃酮類溶液,空白對(duì)照用體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇,陽(yáng)性對(duì)照用等質(zhì)量濃度的EDTA代替樣品。再分別加入2 mmol/L的FeSO4 0.1 mL和5 mmol/L的Ferrozine 0.2 mL,最后各管用蒸餾水補(bǔ)至5 mL,室溫放置20 min,于562 nm處測(cè)定吸光度,根據(jù)吸光度的減少程度計(jì)算亳菊總黃酮類對(duì)Fe2+的螯合率。②對(duì)卵黃脂蛋白脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制作用:用0.1 mol/L pH值7.4的PBS緩沖液配制體積分?jǐn)?shù)為3.85%的卵黃懸液,分別吸取該懸液0.2 mL加入不同質(zhì)量濃度的樣品,空白對(duì)照為體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇。各管再加入0.1 mL 25 mmol/L FeSO4,用pH值7.4的PBS補(bǔ)充至2 mL,37 ℃恒溫震蕩15 min。取出后分別加入0.5 mL 20%的三氯乙酸,3500 r/min離心10 min。分別吸取上清液2 mL于試管中,加入0.28%的硫代巴比妥酸1 mL,加塞,放入沸水浴中15 min。冷卻后于波長(zhǎng)532 nm處測(cè)定吸光度,根據(jù)吸光度計(jì)算抑制率。同時(shí)以等質(zhì)量濃度的BHT作為陽(yáng)性對(duì)照。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:得到回歸方程為:Y=12.093X-0.0009,R2為0.9990。蘆丁濃度在0.008~0.048 mg/mL濃度范圍內(nèi)與吸光度A之間有較好的線性關(guān)系。

      2.2 亳菊黃酮類化合物對(duì)OH-的清除率的影響:羥基自由基屬于活性氧物種,是正常有氧代謝的副產(chǎn)物。在生理?xiàng)l件下,能導(dǎo)致生物體內(nèi)DNA,蛋白質(zhì)和脂質(zhì)氧化損傷。此外羥基自由基不僅破壞細(xì)胞膜的通透性,引起細(xì)胞內(nèi)外離子濃度失衡,而且可抑制細(xì)胞間隙通訊,使細(xì)胞信息傳遞通路發(fā)生障礙。據(jù)報(bào)道,中藥來(lái)源的黃酮可以有效地清除體內(nèi)過(guò)剩的活性氧自由基,保護(hù)細(xì)胞和線粒體的正常結(jié)構(gòu)和功能,防止對(duì)身體的傷害。亳菊黃酮類化合物對(duì)羥基自由基具有較高的清除率,隨著黃酮濃度的增加,其清除羥基自由基的能力進(jìn)一步增強(qiáng)。在同等條件下,亳菊黃酮類化合物對(duì)羥基自由基的清除率優(yōu)于抗壞血酸。

      2.3 毫菊黃酮類化合物對(duì)NO2-的清除率的影響:亞硝胺是一類重要的強(qiáng)致癌物質(zhì),而亞硝酸鹽是亞硝胺合成的前體物質(zhì)。因此,阻斷亞硝胺的合成或清除亞硝酸鹽是防止癌癥的有效途徑之一。大量實(shí)驗(yàn)證實(shí),毫菊黃酮類化合物對(duì)亞硝酸鹽具有較高的清除率,隨著毫菊黃酮類化合物質(zhì)量濃度的增大,對(duì)亞硝酸鹽的清除作用增強(qiáng),呈現(xiàn)較好的量效關(guān)系。在同等條件下,毫菊黃酮類化合物對(duì)亞硝酸鹽的清除率優(yōu)于抗壞血酸。

      2.4 亳菊黃酮類化合物對(duì)卵黃脂蛋白脂質(zhì)過(guò)氧化抑制的影響:卵黃中以卵黃脂蛋白溶液為脂質(zhì)過(guò)氧化體系,測(cè)定了亳菊黃酮類黃酮類化合物所脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制作用。亳菊黃酮類化合物對(duì)Fe2+誘導(dǎo)的卵黃脂蛋白脂質(zhì)過(guò)氧化有較強(qiáng)的抑制作用,并且隨著其質(zhì)量濃度的增加,抑制率逐漸增大。在同等質(zhì)量濃度水平下亳菊黃酮類化合物對(duì)卵黃脂蛋白過(guò)氧化的抑制作用強(qiáng)于BHT。

      3 討 論

      大量研究證實(shí),黃酮類化合物可通過(guò)酚羥基與自由基反應(yīng)生成較穩(wěn)定的半醌式自由基,從而終止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng),能有效地阻止脂質(zhì)過(guò)氧化引起的細(xì)胞破壞[2],起到天然抗氧化劑的功效。本實(shí)驗(yàn)采用乙醇浸提方法提取中毫菊中的黃酮類化合物,并考察亳菊總黃酮類的體外抗氧化的作用。通過(guò)四種方法來(lái)測(cè)定亳菊總黃酮類化合物的抗氧化能力,觀察亳菊對(duì)OH-、Fe2+、亞硝酸鹽的清除率和對(duì)卵黃脂蛋白脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制作用。結(jié)果表明,亳菊總黃酮類對(duì)OH-、Fe2+、亞硝酸鹽的清除作用隨亳菊總黃酮類濃度的升高而增強(qiáng),對(duì)卵黃脂蛋白脂質(zhì)過(guò)氧化也有顯著的抑制作用并隨亳菊總黃酮類濃度升高而增強(qiáng),亳菊總黃酮類化合物有很好的抗氧化能力。

      [1] 楊建雄.連翹葉黃酮的體外抗氧化作用[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2007,19(1):97-99.

      [2] 朱慧,馬瑞君,吳雙桃,等.薇甘菊總黃酮的提取及清除羥自由基活性的測(cè)定[J].食品科學(xué),2010,31(6):70-73.

      R282.710.3

      B

      1671-8194(2014)29-0060-02

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