關(guān)于中醫(yī)證候動(dòng)物模型的思考與展望

周小航，王喜軍

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中藥血清藥物化學(xué)國(guó)家中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 哈爾濱 150040)

“證候”是中醫(yī)學(xué)的專業(yè)術(shù)語(yǔ)，概括為一系列互有關(guān)聯(lián)的癥狀總稱，通過(guò)望、聞、問(wèn)、切來(lái)獲知疾病過(guò)程中在整體層面上機(jī)體的變化，簡(jiǎn)稱證或候。為推進(jìn)中醫(yī)證候研究的客觀化和規(guī)范化，對(duì)于其相對(duì)應(yīng)的動(dòng)物模型的建立和研究勢(shì)在必行。自上世紀(jì)60年代，鄺安堃［1］等就較早開(kāi)展了相關(guān)研究。

1 證候動(dòng)物模型的分類

1.1 西醫(yī)病理模型

在臨床實(shí)踐中常可發(fā)現(xiàn)某些化合物的毒副作用可造成器質(zhì)性病變。該類病理生理學(xué)變化與某些中醫(yī)典型證候病理特征相似。

例如趙寧［2］等腹腔注射利血平造成大鼠脾虛證模型，并用四君子湯和理中丸反證該模型，后經(jīng)指標(biāo)檢測(cè)，給藥組和模型組有顯著性差異。王喜軍［3］等先對(duì)給藥組大鼠連續(xù)7日灌胃給予茵陳蒿湯，第8日給藥組和模型組同時(shí)灌胃給予CCl4(四氯化碳)油溶液，最后對(duì)一系列生化指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，模型組與空白組的差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，給藥組也能對(duì)CCl4引起各項(xiàng)指標(biāo)的差異進(jìn)行回調(diào)，由此證明此模型被成功復(fù)制。劉源才［4］等通過(guò)連續(xù)14天皮下注射外源性皮質(zhì)酮，制備腎陽(yáng)虛模型，給予中國(guó)勁酒進(jìn)行干預(yù)。通過(guò)對(duì)相應(yīng)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，其空白組與腎陽(yáng)虛模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，此藥物能改善腎陽(yáng)虛模型大鼠HPA軸的功能。

1.2 中醫(yī)病因模型

此類模型是基于傳統(tǒng)中醫(yī)理論，在動(dòng)物上施以病因，使此模型的表現(xiàn)與臨床主要表現(xiàn)一致，再對(duì)模型的體征等指標(biāo)進(jìn)行觀察，并用與病因相關(guān)的治療藥物進(jìn)行反證，若動(dòng)物理化指標(biāo)相應(yīng)發(fā)生改變，則證明該造模方法有效。

徐惠仁［5］通過(guò)激怒刺激法復(fù)制大鼠肝郁模型，通過(guò)血流變學(xué)相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)模型組與對(duì)照組差異顯著，同時(shí)大鼠出現(xiàn)撕咬、不思飲食等癥狀。這與臨床中情志不遂以致肝郁，且肝氣機(jī)失常以致血瘀等描述相符，并用疏肝理氣藥對(duì)此模型進(jìn)行反證，表明此模型與大鼠肝郁模型相符合。孫福立［6］利用睡眠剝奪法復(fù)制大鼠心氣虛模型，發(fā)現(xiàn)模型組大鼠心率和血壓改變明顯，證明以此方法建立的模型符合中醫(yī)心氣虛證。李麗琦［7］通過(guò)寒冷刺激法復(fù)制大鼠血瘀證模型，從血液黏度等指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)模型組均與對(duì)照組存在差異，并且經(jīng)藥物反證，證明此模型與中醫(yī)寒凝血瘀證相吻合。

1.3 病證結(jié)合模型

此類模型是指既能體現(xiàn)中醫(yī)辨證論治的思想，又能在器官上得到明確的病理變化和診斷評(píng)價(jià)，也就是在動(dòng)物模型身上同時(shí)具備證候和疾病的特征，這種模型在探討疾病病理、生理變化與中醫(yī)證候之間的關(guān)系起著不可或缺的作用。

1.3.1 多因素復(fù)合模型

多因素復(fù)合模型是基于中醫(yī)藥理論，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)知識(shí)，分別或同時(shí)采用中醫(yī)學(xué)病因復(fù)制證候模型和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)病因復(fù)制疾病動(dòng)物模型，使模型動(dòng)物同時(shí)表現(xiàn)出疾病和證候的特征［8］。

例如任建勛［9］等通過(guò)不可預(yù)知的慢性睡眠剝奪并伴隨半高脂高糖復(fù)合飲食刺激大鼠，復(fù)制了大鼠氣虛血瘀模型，發(fā)現(xiàn)模型組與空白組血流變學(xué)相關(guān)指標(biāo)出現(xiàn)顯著性差異。模型大鼠在雙參通冠方干預(yù)給藥后，給藥組的各項(xiàng)指標(biāo)與模型相比均降低。宋紅等［10］對(duì)大鼠進(jìn)行大黃瀉下、游泳力竭和饑餓復(fù)合法復(fù)制脾氣虛證模型。模型組大鼠經(jīng)血清木糖濃度等指標(biāo)與對(duì)照組比較存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，經(jīng)健胃中藥治療，其各項(xiàng)指標(biāo)均與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.3.2 從西醫(yī)病理判斷中醫(yī)的“證”

疾病的病理變化即中醫(yī)證候，醫(yī)學(xué)檢查中的生化指標(biāo)和病理切片等，一些病理變化在一定程度上與中醫(yī)的證存在相關(guān)性，并能反映部分中醫(yī)證的實(shí)質(zhì)。例如佟欣［11］等人在原有黃疸模型研究的基礎(chǔ)上，多因素復(fù)合誘導(dǎo)大鼠陰黃證模型，治療組給予茵陳四逆湯，觀察并測(cè)定其生化指標(biāo)等活性和效價(jià)，在藥物治療下，證實(shí)大鼠的上述指標(biāo)恢復(fù)，故認(rèn)為此模型具有良好的穩(wěn)定性，并且經(jīng)得起藥物反證，是一種切實(shí)可行的陰黃證造模方法。王喜軍［3］等人，對(duì)給藥組按高、中、低劑量分別給予大鼠茵陳蒿湯，于第10日模型組和給藥組同時(shí)灌胃給予50%(體積比)乙醇5g/kg，連續(xù)5天復(fù)制大鼠肝損傷模型。觀察生化指標(biāo)的變化，發(fā)現(xiàn)模型組與給藥組相比，生化指標(biāo)存在顯著性差異，同時(shí)對(duì)組織病理學(xué)進(jìn)行觀察，模型組肝臟出現(xiàn)肝損傷，給藥組也出現(xiàn)肝損傷，但與模型組相比程度明顯減輕。故認(rèn)為成功復(fù)制此模型，且茵陳蒿湯具有良好的保肝作用。

1.3.3 在中醫(yī)“證”的基礎(chǔ)上建立西醫(yī)“病”的模型

在傳統(tǒng)中醫(yī)理論的指導(dǎo)下，運(yùn)用六淫、飲食、情志、勞倦等中醫(yī)特有的致病因素建立中醫(yī)病因證候模型，在此基礎(chǔ)上，通過(guò)藥物或是手術(shù)等方法，建立西醫(yī)疾病的模型。例如何軍峰［12］等人先通過(guò)喂養(yǎng)大鼠高脂飼料4周，誘發(fā)心血管的病理改變，此基礎(chǔ)上腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素制備2型糖尿病大鼠模型，最后再給予強(qiáng)的松龍和腎上腺素，并對(duì)其進(jìn)行心電圖檢測(cè)等觀察，模型組大鼠2型糖尿病模型的復(fù)制是成功的。王建［13］等采用老年Wistar大鼠，結(jié)合饑餓、疲勞等因素復(fù)制氣虛血瘀模型，采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎復(fù)制腦缺血模型。模型組血液流變學(xué)等一系列微觀指標(biāo)的變化，均與空白對(duì)照組的差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。并對(duì)此模型用中藥復(fù)方制劑腦通絡(luò)進(jìn)行反證。認(rèn)為此氣虛血瘀腦缺血模型復(fù)制成功。

2 發(fā)展與前景

無(wú)論是西醫(yī)病理模型還是中醫(yī)病因模型模擬中醫(yī)證候的研究，都可單獨(dú)闡明某種病因的單獨(dú)作用，但不能體現(xiàn)現(xiàn)實(shí)生活中疾病發(fā)生的復(fù)雜性和中醫(yī)單一病因的復(fù)雜性，所以這兩種模型的發(fā)展受到了極大的制約。病證結(jié)合動(dòng)物模型雖然看似全面的模擬中醫(yī)發(fā)病根源，但是由于變量多，可控性和可重復(fù)性都較難把握。因此，如何使中醫(yī)證候動(dòng)物模型更加規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化以及如何提高模型的重現(xiàn)性都將成為發(fā)展趨勢(shì)。要做出理想的中醫(yī)證候動(dòng)物模型，我們應(yīng)闡明宏觀信息與微觀指標(biāo)的聯(lián)系同時(shí)建立“以方測(cè)證”，從這兩部分入手。例如Ping Wang［14］等應(yīng)用UPLC HDMS對(duì)大鼠腎陰虛模型進(jìn)行代謝組學(xué)分析，對(duì)其尿液進(jìn)行檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)腎陰虛組與模型組代謝輪廓有顯著性差異，同時(shí)應(yīng)用六味地黃丸后使上述代謝輪廓回調(diào)至正常水平。

中醫(yī)證候動(dòng)物模型不應(yīng)僅局限在單獨(dú)的局部生理的改變，還應(yīng)結(jié)合系統(tǒng)生物學(xué)，聯(lián)合多種組學(xué)、譜學(xué)，借助多系統(tǒng)，研究實(shí)驗(yàn)整體在證候模型中的改變，觀察整個(gè)生物系統(tǒng)在DNA、mRNA、蛋白質(zhì)、代謝物之間復(fù)雜的生物過(guò)程。方便科學(xué)工作者從整體角度印證中醫(yī)證候動(dòng)物模型的科學(xué)性、有效性，推進(jìn)對(duì)中醫(yī)理論的觀察，探索和研究，深入揭示“證”本質(zhì)的研究。

3 展望

20世紀(jì)中葉至今，中醫(yī)證候動(dòng)物模型不斷發(fā)展成熟，思路也日漸開(kāi)闊。成熟體系的建立和成功案例的不斷復(fù)制與創(chuàng)新對(duì)中醫(yī)藥的發(fā)展起了舉足輕重的作用。在此過(guò)程中，該類模型的不足之處也逐漸顯現(xiàn)。本文通過(guò)對(duì)相關(guān)問(wèn)題的探討，期望能不斷改善中醫(yī)證候動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)機(jī)制，建立與傳統(tǒng)中醫(yī)理論與特色相適應(yīng)的手段，并不斷完善，為提高臨床實(shí)驗(yàn)的可靠性和適用性提供支持。

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