IDO和FoxP3表達(dá)與宮頸癌發(fā)生和病理進(jìn)程關(guān)聯(lián)的分析

徐紅園 路喜安

（山西醫(yī)科大學(xué)，山西 太原 030001）

IDO和FoxP3表達(dá)與宮頸癌發(fā)生和病理進(jìn)程關(guān)聯(lián)的分析

徐紅園 路喜安

（山西醫(yī)科大學(xué)，山西 太原 030001）

目的 研究討論FoxP3表達(dá)和吲哚胺2，3-雙加氧酶與宮頸癌發(fā)生和病理進(jìn)程關(guān)聯(lián)。方法 選取2005年～2013年患者標(biāo)本，50例實(shí)驗(yàn)組和20例對(duì)照組。其中實(shí)驗(yàn)組包含10例(CINⅠ～Ⅱ級(jí)組)，10例CINⅢ級(jí)組，宮頸癌30例(宮頸癌組)。應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，且P＜0.05時(shí)，數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不論是CIN組還是對(duì)照組DIO和FoxP3都明顯的低于宮頸癌組。且IDO的陽(yáng)性表達(dá)式與宮頸癌FIGO分期、宮頸癌FIGO組織學(xué)分級(jí)相關(guān)；FoxP3的陽(yáng)性表達(dá)只與FIGO分期相關(guān)。結(jié)論 IDO和FoxP3對(duì)于宮頸癌的表達(dá)結(jié)果普遍大于實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，可見(jiàn)IDO、FoxP3與宮頸癌的發(fā)展和發(fā)生有著密切的關(guān)聯(lián)

宮頸癌；FoxP3；吲哚胺2,3-雙加氧酶

宮頸癌是女性的三大惡性腫瘤之一，它對(duì)女性造成的威脅近來(lái)以患者年輕化和不斷上升的病死率尤為顯著。而本課題針對(duì)宮頸癌進(jìn)行IDO和FoxP3表達(dá)與宮頸癌發(fā)生和病理進(jìn)程關(guān)聯(lián)分析，希望得出的結(jié)果能對(duì)宮頸癌的治療起到一定的借鑒作用。本次研究主要是在通過(guò)分析宮頸癌病變組織和宮頸上皮內(nèi)瘤變中IDO和FoxP3的表達(dá)，希望能夠展現(xiàn)IDO與FoxP3的表達(dá)與宮頸癌的預(yù)后及病理分級(jí)是否存在關(guān)聯(lián)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

本次的研究對(duì)象主要為50例實(shí)驗(yàn)組（其中，30例的宮頸癌石蠟標(biāo)本以及另外不同級(jí)別的宮頸上皮內(nèi)瘤變的參照組20例）以及20例對(duì)照組（子宮肌瘤確認(rèn)診病例石蠟標(biāo)本）。本次研究選的對(duì)象均為在2005年～2013年確診病例的石蠟標(biāo)本。

1.2 方法

1.2.1 組織學(xué)診斷實(shí)驗(yàn)標(biāo)本

把實(shí)驗(yàn)標(biāo)本做連續(xù)的組織切片，保持切片厚度在4～6 μm，并對(duì)其進(jìn)行各個(gè)指標(biāo)的免疫組織化學(xué)染色。注意確認(rèn)診斷和組織學(xué)分類。

1.2.2 利用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)IDO和FoxP3的表達(dá)

利用Envision二步法對(duì)IDO和FoxP3進(jìn)行蛋白的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。本次實(shí)驗(yàn)提到的吲哚胺2,3-雙加氧酶（IDO）是一種可能在介導(dǎo)腫瘤逃逸過(guò)程中發(fā)揮其重要作用的一種分子，并且是除肝臟以外唯一能夠催化色氨酸分子并把它氧化裂解，從而沿犬尿酸途徑分解代謝的限速酶，與多種的免疫機(jī)制、母胎耐受機(jī)制有關(guān)。由于在多種的對(duì)于腫瘤的研究成果中的數(shù)據(jù)顯示，其在癌組織的表達(dá)會(huì)高于其他正常組織，而且對(duì)于惡性腫瘤患者遠(yuǎn)處的發(fā)生率和預(yù)后等均被證明有明顯的關(guān)聯(lián)性，所以甚至有學(xué)者提出可以把該因子作為惡性腫瘤患者的獨(dú)立預(yù)后因素。

本次實(shí)驗(yàn)操作步驟必須嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，每組實(shí)驗(yàn)必須設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。以一抗同種來(lái)源的動(dòng)物血清代替一抗為陰性對(duì)照，然后將具有IDO陽(yáng)性表達(dá)的胎盤組織和具有FoxP3陽(yáng)性表達(dá)的人扁桃體組織作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.2.3 免疫組織的化學(xué)結(jié)果判定

把切片放入顯微鏡下利用盲法進(jìn)行觀察。FoxP3主要在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)，個(gè)別的在細(xì)胞質(zhì)中也會(huì)有少量表達(dá)，實(shí)驗(yàn)染色后會(huì)呈現(xiàn)出棕黃色的染色顆粒；IDO陽(yáng)性結(jié)果主要在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)進(jìn)行表達(dá)，個(gè)別在細(xì)胞胞膜上及核內(nèi)也能少量表達(dá)，實(shí)驗(yàn)染色后會(huì)呈現(xiàn)出棕黃色的染色顆粒。對(duì)切片進(jìn)行半定量分析，陽(yáng)性劃分標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)每個(gè)切片中陽(yáng)性細(xì)胞占全片細(xì)胞的比例進(jìn)行劃分：當(dāng)出現(xiàn)無(wú)陽(yáng)性染色細(xì)胞時(shí)表明實(shí)驗(yàn)結(jié)果陰性（-）；當(dāng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性染色細(xì)胞占全部細(xì)胞的0～25%為弱陽(yáng)性（+/-）；當(dāng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性染色細(xì)胞占全部細(xì)胞的25%～50%時(shí)為陽(yáng)性（+）；當(dāng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性染色細(xì)胞占全部細(xì)胞的50%～75%時(shí)為中等陽(yáng)性（++）；當(dāng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性染色細(xì)胞占全部細(xì)胞的75%時(shí)為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)采用SPSS13.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，用Spearman進(jìn)行相關(guān)性分析檢驗(yàn)，采用百分比表示計(jì)數(shù)資料，組與組間的比較采用χ2表示。注意當(dāng)P＜0.05時(shí)表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

免疫組織的化學(xué)結(jié)果顯示，在宮頸皮上內(nèi)瘤組和20例的對(duì)照組中，IDO實(shí)驗(yàn)結(jié)果為幾乎不表達(dá)，而FoxP3表達(dá)也并不明顯；而在宮頸癌組中，F(xiàn)oxP3表達(dá)的陽(yáng)性率為69.5%，IDO表達(dá)的陽(yáng)性率為74.2%，與其他的兩個(gè)組相比，IDO與FoxP3具有更明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討 論

宮頸癌是一種病死率非常高的癌癥，全世界每年都會(huì)有20萬(wàn)女性死于宮頸癌[1]。因?yàn)槠鋵?duì)于女性的殺傷力，許多科學(xué)家都致力于找出發(fā)病機(jī)制，然而且始終不得其解。但近幾年的研究卻有這樣的跡象，認(rèn)為宮頸癌的發(fā)生可能與腫瘤的免疫逃逸有著一定的關(guān)系。腫瘤微環(huán)境的研究及其免疫逃逸機(jī)制可能最終解開(kāi)這個(gè)謎底，因而IDO很可能是其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)之一。由于IDO在人類子宮內(nèi)膜腺體和表面上皮細(xì)胞、螺旋動(dòng)脈以及毛細(xì)血管內(nèi)皮、宮頸腺上皮和輸卵管上皮上均存在表達(dá)[2,3]。但是在以往研究中，IDO主要是在母胎免疫方面進(jìn)行的相關(guān)研究，研究范圍十分片面。所以在對(duì)IDO誘導(dǎo)的腫瘤免疫耐受機(jī)制的深入研究后，有關(guān)IDO與婦科腫瘤的研究逐漸成為關(guān)注的熱點(diǎn)。目前，IDO在腫瘤局部免疫耐受中的作用主要依靠三大機(jī)制完成，包括色氨酸缺乏機(jī)制、毒性代謝產(chǎn)物機(jī)制和誘導(dǎo)Tregs免疫負(fù)調(diào)節(jié)機(jī)制。根據(jù)本次研究成果顯示，IDO表達(dá)的陽(yáng)性率按照宮頸組織病變程度遞增順序依次遞增，其中宮頸癌的陽(yáng)性率明顯高于其他組別，說(shuō)明當(dāng)腫瘤抗原刺激巨噬細(xì)胞和DC后，就會(huì)通過(guò)產(chǎn)生IDO來(lái)改變微環(huán)境內(nèi)色氨酸和代謝產(chǎn)物的局部濃度來(lái)抑制T細(xì)胞的腫瘤抗原特異性克隆增殖，使其免受機(jī)體的免疫系統(tǒng)攻擊。所以，宮頸癌患者中IDO的表達(dá)與FIGO分期及組織學(xué)分級(jí)存在相關(guān)性，意味著腫瘤分期、分級(jí)越高，IDO表達(dá)的可能性就越高。

FoxP3又可稱做叉頭狀或翅狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子3，為叉頭蛋白的一種。FoxP3是Tregs細(xì)胞的特征性標(biāo)志物之一，在調(diào)控Tregs的發(fā)育中起到重要作用。在本次研究中，F(xiàn)oxP3不僅與FIGO分期存在相關(guān)性，且FoxP3表達(dá)的陽(yáng)性率同IDO表達(dá)的陽(yáng)性表達(dá)率一般，按照正常宮頸組織到宮頸癌的病變順序依次遞增，這就意味著腫瘤的分期指數(shù)越高，F(xiàn)oxP3表達(dá)的可能性就越大。綜上所述，可見(jiàn)IDO和FoxP3表達(dá)與宮頸癌發(fā)生和病理進(jìn)程是存在明顯的相關(guān)性的。

隨著實(shí)驗(yàn)結(jié)果的得出，我們不妨這么看，由于IDO在實(shí)驗(yàn)中的表達(dá)率，是不是對(duì)IDO的抑制藥物的產(chǎn)生可以作為新的免疫調(diào)節(jié)劑呢？這算是在為解決腫瘤治療方案提供的新的思路。不得不提到一種被列為美國(guó)國(guó)立癌癥研究所緊急研發(fā)規(guī)劃中的新型抑制劑——1-MT。這是一種與底物色氨酸結(jié)構(gòu)最接近的抑制劑，最新實(shí)驗(yàn)表明，1-MT與細(xì)胞毒性抗腫瘤藥紫杉醇、順鉑、環(huán)磷酰胺和阿霉素等合用，可以引起腫瘤的消退，但是它們單獨(dú)使用卻沒(méi)有明顯的作用。隨著實(shí)驗(yàn)的結(jié)束，我們能夠看到IDO在誘導(dǎo)婦科腫瘤免疫耐受機(jī)制的作用十分明顯，在今后的發(fā)展中，IDO有望取代其他繁瑣的步驟而成為宮頸癌評(píng)估及預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)。而它的抑制劑則有望在臨床治療方面成為主要手段。

[1] Muller AJ,Hardaway JB,Jailer D,et a1.Lmmunotherapeutic suppression of indoleamine 2,3-di oxygenase and tumor growth with ethyl pyruvate[J].Cancer Res,2010,70(5):1845-1853.

[2] Munn DH,Mellor AL.Indocible 2.3-di oxygenase and tumor induced tolerance[J].Cline Invest,2007,117(5):1147-1154.

[3] Munn DH,Zhou M,Att Wood yr,et a1.Prevention of allogeneic fetal reerection by tryptophan catabolism[J].Science,1998,281 (5380):1191-1193.

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：1671-8194（2014）07-0103-02