全自動(dòng)免疫組化儀的應(yīng)用體會(huì)

劉 爽

（江蘇省揚(yáng)州市第一人民醫(yī)院 病理科，江蘇 揚(yáng)州225002）

全自動(dòng)免疫組化儀的應(yīng)用體會(huì)

劉 爽

（江蘇省揚(yáng)州市第一人民醫(yī)院 病理科，江蘇 揚(yáng)州225002）

免疫組織化學(xué)技術(shù)在病理診斷與鑒別診斷中具有十分重要的作用。為保證免疫組化制片的準(zhǔn)確性，可重復(fù)性與整體染色的一致性，全自動(dòng)免疫組化染色機(jī)已被廣泛使用。作者總結(jié)了全自動(dòng)免疫組化染色機(jī)在使用過程中的體會(huì)，旨在通過加深對(duì)全自動(dòng)免疫組化染色機(jī)的了解，以提高免疫組化制片質(zhì)量。

免疫組織化學(xué)；全自動(dòng)免疫組化染色機(jī)；制片質(zhì)量；應(yīng)用體會(huì)

免疫組織化學(xué)技術(shù)作為病理診斷的輔助技術(shù)，已成為目前臨床診斷不可或缺的手段之一，免疫組化技術(shù)的使用大大提高了病理診斷的水平，使原來很多疑難的病例，通過免疫組織化學(xué)的技術(shù)而得以解決。為確保免疫組織化學(xué)的準(zhǔn)確性，可重復(fù)性及整體染色的一致性，全自動(dòng)免疫組化染色機(jī)已廣泛使用。我科于2012年2月也已經(jīng)開始使用，通過一段時(shí)期的臨床摸索實(shí)踐，將全自動(dòng)免疫組化染色機(jī)的使用體會(huì)總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備與試劑

采用美國(guó)Ventana全自動(dòng)免疫組化染色儀；所選試劑中，一抗選用中杉生物有限公司產(chǎn)品，二抗及顯色系統(tǒng)均為全自動(dòng)免染色儀自帶封閉套盒，襯染液為Gill蘇木精染色液。

1.2 操作流程與大部分報(bào)道的文獻(xiàn)相似[1-2]

①腫瘤常規(guī)包埋后4 μm連續(xù)石蠟切片，玻片上標(biāo)記一抗名稱；②根據(jù)當(dāng)日免疫組化檢測(cè)項(xiàng)目，電腦分別輸入免疫組化號(hào)與各一抗的病理號(hào)，Ebar條碼打印機(jī)打印出標(biāo)簽后對(duì)應(yīng)貼到每張玻片上，全自動(dòng)儀器不需要額外烤片；③全部切片入雀巢奶粉中浸泡20 min；④仔細(xì)檢查機(jī)器自帶試劑與各散裝試劑是否足夠完成試驗(yàn)；⑤將標(biāo)簽表面水分與切片背面擦干，平穩(wěn)放置于切片盤上；⑥將DAB試劑盒、蘇木素、返藍(lán)液等試劑置于檢測(cè)試劑架上（注意擦干條形碼上水珠）；⑦準(zhǔn)備完畢后，電腦啟動(dòng)運(yùn)行程序；⑧染色完成后，打開切片盤，取出切片后先入洗潔精除去玻片表面油質(zhì)，然后常規(guī)脫水、透明、封片；⑨使用儀器自帶清潔功能清洗儀器。

2 結(jié) 果

使用Ventana全自動(dòng)免疫組化染色儀，大大減少了手工操作時(shí)間，染色結(jié)果穩(wěn)定，定位準(zhǔn)確，染色信號(hào)表達(dá)清晰，無背景及非特異性染色。

3 討 論

采用全自動(dòng)免疫組化染色機(jī)進(jìn)行免疫組化制片與以往的人工制片相比，具有以下的優(yōu)點(diǎn)：①工作效率提高。手工免疫組化的操作需要不斷的計(jì)時(shí)間，為了保證滿意的實(shí)驗(yàn)結(jié)果常常需要40C過夜。而全自動(dòng)免疫組化染色機(jī)通過程序預(yù)設(shè)，可從脫蠟、抗原修復(fù)、滴加一抗、DAB顯色直至復(fù)染自動(dòng)滿意運(yùn)行，而僅僅需要完成人工脫水與封片的步驟，一次可完成30張切片，染色全過程一般需要3 h左右，省時(shí)、省力；②免疫組化操作標(biāo)準(zhǔn)化。在Ventana自動(dòng)染色機(jī)上，所有程序，包括脫蠟、修復(fù)、封閉、一抗和二抗的孵育、DAB顯色及襯染均是由標(biāo)準(zhǔn)的程序完成，時(shí)間、溫度、試劑添加量均由儀器控制，避免手工操作的誤差。儀器自帶的渦流混勻功能，可使試劑覆蓋整張玻片，消除邊緣效應(yīng)和染色不均一；液體封蓋膜可以保證抗原修復(fù)和一抗孵育的溫度保持恒定；超強(qiáng)清洗功能減少了染色的背景和非特異性染色。實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有很好的可重復(fù)性；③免疫組化試劑的標(biāo)準(zhǔn)化。儀器使用的脫蠟液、修復(fù)液、液體封蓋膜、清洗緩沖液、DAB顯色試劑盒及襯染試劑均是由Ventana生產(chǎn)，經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)檢出廠，保證了每個(gè)批次間的穩(wěn)定性。減少手工配制試劑的批間差。每次開機(jī)前，儀器會(huì)進(jìn)行自檢，確保每次實(shí)驗(yàn)有足夠的試劑；④便于玻片歸檔。全自動(dòng)免疫組化染色機(jī)通過使用配套打印機(jī)，于載玻片上清晰打印標(biāo)簽，所打印的標(biāo)簽具有耐熱，防水、防腐蝕的功能，且終生儲(chǔ)存不會(huì)褪色；⑤安全環(huán)保。全自動(dòng)免疫組化儀配有廢液回收系統(tǒng)，可將廢液集中回收，使環(huán)境保護(hù)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)化的要求。還有液面提示功能，避免過多的廢液溢出，造成污染；⑥全自動(dòng)免疫組化儀有完整的質(zhì)控記錄。每張玻片都有詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)過程，可追溯到實(shí)驗(yàn)時(shí)間，試劑的批次和效期。對(duì)于已經(jīng)過期的試劑，儀器會(huì)提醒用戶，避免過期試劑造成的實(shí)驗(yàn)誤差。這些內(nèi)容均是儀器自動(dòng)記錄，不需要手工記錄，可實(shí)現(xiàn)快速高效的質(zhì)量控制；⑦方便科室的庫存管理。全自動(dòng)免疫組化儀對(duì)已經(jīng)注冊(cè)的試劑有庫存記錄，可以快速查看到庫存清單，及時(shí)訂購(gòu)試劑。

同時(shí)在使用過程中需注意以下方面因素[3]：①組織的前期處理。組織固定時(shí)間以4～6 h為宜，最長(zhǎng)不超過24 h，過長(zhǎng)過短都會(huì)對(duì)染色結(jié)果產(chǎn)生不良影響。因組織固定時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)封閉或破壞組織的抗原活性，而固定時(shí)間過短則抗原彌散和組織結(jié)構(gòu)不清晰；②保證切片質(zhì)量。滿意的切片質(zhì)量是保證染色質(zhì)量的基本要求，切片時(shí)要做到平整和厚薄適中，以4～6 μm為宜，避免出現(xiàn)皺褶；③涂膠片的制備。為避免脫片對(duì)染色結(jié)果的影響，需染色前對(duì)玻片進(jìn)行處理。最好使用配套的涂膠玻片，目前常用的是用APES與多聚賴氨酸（Poly-L-Lysine）制成的涂膠玻片，其防脫效果較為滿意；④試劑瓶的安裝及定期檢查。雖然全自動(dòng)免疫組化染色機(jī)通過條形碼識(shí)別試劑瓶，對(duì)試劑瓶的安裝順序無嚴(yán)格要求，但儀器不能發(fā)現(xiàn)試劑瓶安裝位置的細(xì)微偏差，有試劑不能順利通過滴加孔而造成結(jié)果假陰性的可能。因此待儀器運(yùn)行后，需定期檢查試劑瓶是否與滴加孔滿意對(duì)接。

近些年來，由于病理診斷倡導(dǎo)質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)化，各項(xiàng)指標(biāo)都要求達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)化水平，因而對(duì)免疫組化制片的質(zhì)量與可重復(fù)性要求增加，而全自動(dòng)免疫組化染色儀就是作為病理免疫組化診斷質(zhì)量提高與標(biāo)準(zhǔn)化的可靠工具，對(duì)提高免疫組化制片質(zhì)量具有十分重要的作用。

綜上所述，在病理診斷中，成功的開展免疫組化學(xué)制片的關(guān)鍵是標(biāo)準(zhǔn)化制作[4]。標(biāo)準(zhǔn)化制作可提高免疫組化切片的質(zhì)量與結(jié)果的可重復(fù)性，為正確做出臨床病理診斷提供了有力依據(jù)與可靠保證。全自動(dòng)免疫組化染色儀具有省力，省時(shí)、操作便捷等特點(diǎn)，對(duì)我國(guó)病理實(shí)驗(yàn)室與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)展接軌起到重要作用。

[1] 楊月紅,袁靜萍,袁修學(xué),等.自動(dòng)免疫組化儀的使用體會(huì)[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2011,27(3):333-334.

[2] 羅玉鳳,曹金伶.簡(jiǎn)介免疫組化染色機(jī)[J].診斷病理學(xué)雜志,2012, 19(4):319.

[3] 虞杰,石偉強(qiáng).全自動(dòng)免疫組化儀的應(yīng)用及影響其染色質(zhì)量的因素探討[J].泰州職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào),2011,11(6):69-71.

[4] 鄭杰,鄒萬忠,吳秉銓.成功開展免疫組織化學(xué)的關(guān)鍵標(biāo)準(zhǔn)化[J].中華病理學(xué)雜志,1996,25(6):323-325.

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：1671-8194（2014）03-0034-02